异黄酮与β-伴大豆球蛋白的相互作用及其对蛋白结构和潜在致敏性的影响

探究异黄酮和β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin,BCG)的相互作用机理及其对复合物结构和潜在致敏性的影响。利用荧光光谱、圆二色光谱分析2种大豆异黄酮(染料木素(genistein,Gen)、大豆苷元(daidzein,Dai))与BCG相互作用的猝灭类型、结合位点数、作用力类型和蛋白二级结构含量的变化,表征不同条件下制备的异黄酮-BCG复合物的结构,并利用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)与消化产物免疫印迹检测其潜在致敏性。结果表明:活性异黄酮(Gen/Dai)对BCG的猝灭为静态猝灭,且相互作用力以疏水相互作用为主,结合位点数均接近1;并且与异黄酮相互作用诱导了BCG氨基酸微环境的极性增加,使蛋白肽链伸展,结构更为松散;ELISA与消化产物免疫印迹结果显示,与异黄酮结合后蛋白的潜在致敏性增强。本研究有助于科学认识异黄酮在食品复杂基质体系中对过敏蛋白致敏性影响机制,对其抗过敏的深度开发利用具有重要意义。

β-伴大豆球蛋白诱导杂交黄颡鱼肠道上皮细胞内质网应激模型的建立

实验旨在利用β-伴大豆球蛋白构建黄颡鱼上皮细胞内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。利用酶消化法分离得到黄颡鱼肠道上皮细胞,通过细胞形态、角蛋白18(Cytokeratin-18,CK-18)免疫荧光染色和碱性磷酸酶染色法鉴定。利用不同浓度β-伴大豆球蛋白刺激24h后,RT-qPCR检测相关基因转录表达水平,筛选最合适刺激浓度。在此浓度下分别刺激黄颡鱼肠道上皮细胞0、12h、24h和36h,使用RTqPCR、CCK8、透射电镜和免疫荧光染色等方法检测相关指标,筛选最适刺激时间。结果表明:(1)成功分离培养黄颡鱼肠道上皮细胞,细胞呈铺路石状,CK-18和碱性磷酸酶染色呈阳性;(2)成功筛选到4 mg/mLβ-伴大豆球蛋白为最佳刺激浓度。在该浓度下,除grp78、jnk、il-10、atf6外,内质网应激、自噬、凋亡、炎症等相关基因表达水平均显著最高(P<0.05);成功筛选24h为最适刺激时间。4 mg/mL β-伴大豆球蛋白刺激细胞24h显著降低细胞活力,同时引起内质网显著肿胀,GRP78、LC3、Caspase3蛋白表达和Tunel信号显著升高(P<0.01),perk、atf6、beclin1、lc3a、bcl2、caspase3、caspase9和il-12 mRNA表达水平显著最高(P<0.05)。综上,实验成功分离得到黄颡鱼肠道上皮细胞,构建了黄颡鱼肠道上皮细胞内质网应激模型。实验为进一步研究未折叠反应信号通路在黄颡鱼豆粕诱导肠炎发生发展中的作用奠定基础。

透明质酸-大豆β-伴球蛋白复合膜对鲢鱼片微冻贮藏品质影响

为解决淡水鱼在贮藏过程中蛋白质氧化及品质劣变问题,采用0.9%透明质酸(hyaluronic acid,HA)分别与1%、2%、3%大豆β-伴球蛋白制备复合涂膜剂处理鲢鱼肉,在-3℃微冻贮藏28 d,考察鲢鱼肉贮藏期的持水力、色差(△E)、pH值、电导率、挥发性盐基氮(total volatile basicnitrogen,TVB-N)、硫代巴比妥酸值(thiobarbituric reactive subs-tances,TBARS)、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)可溶性肽含量的变化,探究鱼肉肌原纤维蛋白氧化规律,结合主成分分析(principal component analysis,PCA)研究涂膜及微冻技术对鲢鱼肉蛋白质氧化及品质的控制作用。结果表明:与未经涂膜鲢鱼肉相比,复合涂膜可以延缓鲢鱼肉TVB-N、TBARS、pH值、电导率、TCA可溶性肽含量的升高,抑制鱼肉持水力、△E的下降。经复合涂膜处理,鱼肉肌原纤维蛋白巯基含量及钙离子ATP酶(calcium-ATPase,Ca^(2+)-ATPase)的活性提高,羰基含量和表面疏水性明显降低。主成分分析提取的2个主成分的累计方差贡献率达到86.782%,能较好地反映原始信息,可直观了解到各涂膜处理鲢鱼肉品质变化趋势。综合评定,0.9%HA-2%大豆β-伴球蛋白涂膜鱼肉的保鲜效果最佳。

β-伴大豆球蛋白水解产物中糖肽的分离和鉴定

本研究对大豆蛋白水解产物中含糖的肽组分进行了分离和鉴定。从大豆蛋白中分离出相对纯度为75.5%、含糖量为3.23%的β-伴大豆球蛋白后,以β-伴大豆球蛋白为底物,用Alcalase进行酶解调制大豆肽。所得大豆肽经Sephadex G-25凝胶过滤,得到两个组分P1和P2,分子量较大P1含糖量为8.23%。用薄板层析对这一含糖的肽组分进行了鉴定,结果表明此含糖的肽为糖结合性肽。

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对小鼠免疫功能及肠道内环境的影响

90只清洁级昆明系小鼠,随机分为5组,预饲基础日粮一周后,各组分别灌胃:生理盐水(对照组,CK)、伴大豆球蛋白液(Ⅰ)、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液(Ⅱ)、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液提纯B组分(Ⅲ)、伴大豆球蛋白盐酸水解液(Ⅳ),除对照组外,各处理组灌胃液体总含氮量相等,实验期21d。结果显示:与对照组相比,第3周Ⅱ组和Ⅲ组每只小鼠日均采食量较对照组显著下降,分别降低8.75%(P<0.05)和9.28%(P<0.05);Ⅲ组小鼠胸腺相对质量极显著下降,降低了10.40%(P<0.01),肠黏膜sIgA水平提高45.49%(P<0.01),大肠食糜中6磷酸果糖酮糖酶(F6PPK)活性极显著提高(P<0.01),pH值下降了1.80%(P<0.05),肠球菌数显著下降(P<0.05)。实验结果表明水解肽作为腔内信号分子可能与肠道内相关因素有着多层次调控关系,共同促进宿主的健康。

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对双歧杆菌增殖的影响

大豆种子的贮藏蛋白主要由2种球蛋白组成,伴大豆球蛋白(conglycinin)是其中一种,它由3个不同的亚基组成。文中对伴大豆球蛋白进行了分离纯化,并研究了其体外经过胃蛋白酶水解后的肽对双歧杆菌增殖的影响。结果表明,分离纯化的伴大豆球蛋白纯度为90.13％,可供生理功能的研究,经胃蛋白酶水解后的肽能够促进双歧杆菌的增殖,表现出一定的生物活性作用。

植物乳酸菌发酵对大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白免疫活性及水解度的影响

本试验通过植物乳酸菌对豆粉进行液态发酵,在发酵24,36,48,60,72 h时采集发酵样品进行水解度和免疫活性的检测,结果表明:(1)48 h为植物乳酸菌发酵豆粉的最佳时间,可去除71.08%的β-伴大豆球蛋白和64.22%的大豆球蛋白的免疫活性(P<0.01),对β-伴大豆球蛋白的去除程度显著高于大豆球蛋白(P<0.01)。(2)乳酸菌发酵可显著提高豆粉中蛋白质的含量、水解度(P<0.01)以及体外消化率(P<0.01)。(3)蛋白质的水解度与大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白免疫活性之间存在强烈的负相关(P<0.01),与蛋白质的体外消化率存在正相关(P<0.01)。

伴大豆球蛋白水解肽对灌喂大肠杆菌(E.coli)的小鼠肠道微生物区系和健康的影响

目的研究服用伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽的小鼠,灌喂E.coli后的健康状况,分析小鼠灌喂E.coli后24h,48h粪样微生物区系的变化。方法应用PCR-DGGE技术对小鼠粪样微生物区系进行相似性分析;应用连续稀释PCR的方法检测小鼠灌喂E.coli后24h,48h粪样中细菌的数量;同时观察小鼠灌喂E.coli后的健康状况。结果小鼠灌喂E.coli后24h,盐酸彻底水解伴大豆球蛋白液组(HCL-FHC)和灌菌对照组(CON)的相似性较高(71.5%),伴大豆球蛋白组(Conglycinin)和伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽组(PTC)与正常对照组(CONN)的相似性都较高(分别为82.4%和72.9%);灌喂E.coli后48h,CONN组和CON组的相似性不高(59.6%),PTC组和CONN组的相似性较高(73.7%),PTC组和Conglycinin组、HCL-FHC组、CON组的相似性都不高(分别为51.4%、56.3%、48.1%),PTC组小鼠粪中细菌的数量明显低于CON组和HCL-FHC组,同时PTC组健康小鼠的数量明显多于其它处理组。结论伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能维持肠道健康的微生物区系,降低肠道细菌的数量,维持感染E.coli后小鼠的健康。

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解产物中促双歧杆菌增殖肽的分离和鉴定

大豆贮藏蛋白主要包括大豆球蛋白(Glycinin)和伴大豆球蛋白(Conglycinin),本研究采用Sephadex-G15凝胶过滤和薄层层析的方法,对伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解产物中促双歧杆菌增殖肽进行分离,所得活性组分通过毛细管HPLC及质谱进行鉴定,结果表明,分离得到促双歧杆菌增殖活性最强的组分是由性质相近的肽混合物组成,通过毛细管HPLC可以得到活性酶解肽的图谱,并通过质谱可知酶解肽主要由6-10个氨基酸残基组成。上述结果提示,伴大豆球蛋白中的生物活性物质是以无活性的形式存在于蛋白质的多肽链中,必须通过适当酶解,在一定条件下才能释放出来,发挥出各种生物学功能。

糖基化β-伴大豆球蛋白负载提高姜黄素抗氧化及缓释特性

利用干法糖基化制备β-伴大豆球蛋白(soyβ-conglycinin,7S)-葡聚糖共价接枝物包埋姜黄素,并研究姜黄素的抗氧化及缓释效果。结果表明,随着反应时间(0、24、48、72 h)延长,7S-葡聚糖共价复合物接枝度和褐变度逐渐增加,至72 h达到最高,分别为15.02%和0.24。通过pH值循环法诱导7S、7S-葡聚糖封装姜黄素,形成7S-姜黄素、7S-葡聚糖-姜黄素纳米复合物,发现反应时间为72 h时,7S-葡聚糖表现出最高的姜黄素负载量(129.61μg/mg),显著高于7S(69.06μg/mg)。荧光光谱分析表明姜黄素主要通过疏水相互作用与7S、7S-葡聚糖-72 h结合。透射电子显微镜观察到7S-姜黄素和7S-葡聚糖-72 h-姜黄素纳米复合物为球形。姜黄素质量浓度为100μg/mL时,与游离的姜黄素相比,封装在7S-葡聚糖-72 h内的姜黄素抗氧化能力提高1.36倍,且表现出稳定的缓释性能。7S-葡聚糖-72 h负载的姜黄素生物可利用率为66.83%,而7S负载的姜黄素和游离姜黄素生物可利用率分别为48.93%和33.06%。研究结果表明7S-葡聚糖-72 h可作为良好的姜黄素纳米载体,改善其抗氧化及缓释能力。

伴大豆球蛋白水解肽体外抑菌活性试验

大豆贮藏蛋白主要由大豆球蛋白和伴大豆球蛋白组成[1-2],大豆肽是大豆蛋白质酶解的产物,具有多种生物活性作用。伴大豆球蛋白水解肽作为一种植物蛋白来源的多肽,已得到人们的广泛关注。

伴大豆球蛋白及其水解肽对沙门氏菌生长的影响

为了进一步研究伴大豆球蛋白的生物学功能,应用等电点沉淀和盐析的方法制备伴大豆球蛋白,通过凝胶柱层析法进一步分离纯化,得到单一组分,SDS-PAGE电泳鉴定为纯化的伴大豆球蛋白。并对分离得到的伴大豆球蛋白及其胃蛋白酶水解肽对沙门氏菌生长的影响进行观察。结果表明:高浓度(6mg/ml)的伴大豆球蛋白及其水解多肽可以抑制沙门氏菌的生长繁殖,表现一定的抗沙门氏菌增殖的作用,同样浓度水解多肽的抑制作用强于伴大豆球蛋白本身;低浓度(1.5mg/ml及0.75mg/ml)的伴大豆球蛋白及其水解多肽则表现出轻微的促沙门氏菌增殖的作用。

β-伴大豆球蛋白来源生物活性肽的研究进展

β-伴大豆球蛋白是大豆中的主要贮藏蛋白质,结构分析表明它是一种糖蛋白。本文阐述了以β-伴大豆球蛋白为基质酶解得到的具有免疫调节功能的糖肽和SOYMETIDE,以及具有抗氧化、降低胆固醇、调节胃肠道功能的活性肽研究状况,并对其今后研究发展方向作了展望。

伴大豆球蛋白水解肽对鸭抗大肠杆菌感染的作用

研究灌服伴大豆球蛋白水解肽的麻鸭,在肌肉注射大肠杆菌O78后的健康状况,并分析有关细胞因子水平的变化。结果表明,感染对照组出现典型的大肠杆菌病病理变化,而灌服伴大豆球蛋白水解肽的鸭只临床症状较轻。与感染对照组比较,伴大豆球蛋白水解肤能显著提高鸭脾脏IL-2水平与肠道黏膜slgA水平,显著降低脾脏TNF-α水平,说明伴大豆球蛋白水解肽能提高动物机体免疫机能,抵御外源性大肠杆菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生。

伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗沙门氏菌感染的作用

选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠40只,随机分为5个处理组,即正常对照组和感染对照组(基础日粮+生理盐水,I组和Ⅱ组),伴大豆球蛋白组(基础日粮+伴大豆球蛋白,Ⅲ组),伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽组(基础日粮+伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽,IV组)和水解肽分离有效抑菌组分组(基础日粮+水解肽分离有效抑菌组分,V组)。预饲3 d后,除I组和II组外,其他各处理组灌喂液体总含氮量为10mg/mL,每只小鼠灌喂量均为0.5 mL。连续灌胃10 d后,于第11天将108CFU/mL的沙门氏菌分别灌喂除正常对照组的其他各组(剂量均为0.5 mL/只),24 h后采用摘除眼球法收集血液后,宰杀各组小鼠,取脾脏、肠黏膜,分析血清和脾脏中TNF-α、IL-6和肠黏膜组织中sIgA的变化。结果表明在小鼠发生沙门氏菌感染时,伴大豆球蛋白水解肽以及水解肽分离有效抑菌组分能显著降低小鼠血清TNF-α水平(P<0.05)和脾脏IL-6水平(P<0.01),提高脾脏TNF-α和肠道黏膜sIgA水平(P<0.01)。说明伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能提高动物机体免疫机能,抵御外源性沙门氏菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生。

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对大鼠肠道细菌区系变化的影响

【目的】在分子水平上探讨伴大豆球蛋白水解肽对肠道双歧杆菌生长的影响。【方法】选取21日龄健康清洁级雄性SD大鼠,随机分为4个处理,每个处理3只,基础日粮预饲1周后,分别灌胃生理盐水(对照组)、伴大豆球蛋白液(Conglycinin组)、伴大豆球蛋白酶水解肽P2组分(P2-PTC组)、伴大豆球蛋白盐酸彻底水解液(HCl-FHC组),各0.5ml,1次/天。除对照组外,各处理组灌胃液体总含氮量相等(折合蛋白含量为0.5mg·ml-1),试验共21d。应用PCR-DGGE技术分析灌胃伴大豆球蛋白酶解肽对大鼠粪样细菌区系变化的影响,并采用连续稀释PCR的方法半定量研究伴大豆球蛋白酶解肽对大鼠肠道双歧杆菌数量的影响。【结果】灌胃伴大豆球蛋白酶解肽的大鼠在试验后第1周,其粪样微生物区系变化迅速,而后缓慢,最终形成稳定的体系,提示酶解肽在一定程度上影响了肠道细菌的组成,与对照组和蛋白盐酸彻底水解液组比较,肠道双歧杆菌数量明显增加。【结论】本试验在分子水平证明了伴大豆球蛋白水解肽对肠道双歧杆菌的生长有促进作用。

2种黑豆球蛋白与矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的相互作用研究

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)在不同pH值环境中的主要存在形式不同,其抗氧化能力也有所差异。黑豆蛋白是一种常见的膳食蛋白,具有作为不稳定生物活性化合物载体的潜力,了解黑豆球蛋白与C3G的相互作用机制有利于它们在食品体系中的应用。通过多种光谱学分析和分子对接实验研究了pH值为2.0、5.0和7.0时黑豆β-伴大豆球蛋白(7S)和大豆球蛋白(11S)与C3G的相互作用及其对C3G氧化稳定性和抗氧化能力的影响。研究结果表明,pH值为2.0和5.0时,C3G与7S和11S结合不仅导致Tyr残基周围的疏水环境减少,极性增加,而且使7S和11S中α-螺旋增加,β-折叠比例下降。pH值为7.0时,C3G的存在使7S和11S中α-螺旋和β-折叠的占比呈增加趋势,但β-转角比例降低。此外,C3G与7S和11S结合是一个放热过程,在不同pH值条件下,C3G与7S和11S主要通过氢键和范德华力相互作用使7S和11S静态荧光猝灭。7S和11S均在pH值为7.0时对C3G亲和力最强。分子对接结果表明,7S上的GLU229、ARG356和PRO101残基,11S上的ARG161、VAL162、ILE171和THR176残基在与C3G结合中起关键作用。在不同pH值条件下,7S、11S与C3G结合后均显著增强了C3G的氧化稳定性和抗氧化能力。

伴大豆球蛋白水解肽的制备及其对沙门氏菌增殖的影响

利用等电沉淀和盐析的方法,获得大豆球蛋白,并通过Sepharose-CL-6B凝胶柱层析分离纯化,得到单一组分,经SDS-PAGE鉴定为纯化的7 S伴大豆球蛋白,然后将其用胃蛋白酶水解得到伴大豆蛋白水解肽(PTC)。通过96孔细胞培养板2倍稀释法,对不同浓度的伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽(6,3,1.5和0.75 mg/mL)与沙门氏杆菌共同培养,观察了伴大豆蛋白水解肽对沙门氏杆菌增殖的影响。结果发现,添加不同浓度的伴大豆蛋白水解肽可以影响沙门氏菌的增殖,其中6 mg/mL和3 mg/mL的PTC对沙门氏菌的生长产生明显的抑制作用,1.5 mg/mL的PTC对沙门氏菌作用不明显,而0.75 mg/mL的PTC有微弱的促进作用,表现一定的营养作用。

枯草芽孢杆菌肽聚糖对β-伴大豆球蛋白诱导的鲤幼鱼肠上皮细胞损伤的保护作用

为观察不同浓度枯草芽孢杆菌肽聚糖对β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)诱导的鲤幼鱼肠上皮细胞炎性损伤的保护作用,将原代培养72 h(26°C、6%的CO2)的24孔鲤幼鱼IECs培养板随机设为6组,每组4个重复。其中1组为阴性对照,其余5组用浓度为1.0 mg/m L的枯草芽孢杆菌肽聚糖诱导24 h后,分别更换浓度为0(阳性对照)、0.15、0.30、0.45和0.60 mg/m L枯草芽孢杆菌肽聚糖培养液,相同条件培养12、24和36 h,分别检测细胞的抗超氧阴离子(ASA)和抗羟自由基(AHR)能力、蛋白羰基(PC)含量、抗氧化酶(SOD、CAT和GPx)活性和细胞因子IL-1β、IL-8、IL-10、TNF-α1、TGF-β基因表达。结果显示,β-conglycinin上调细胞炎性因子表达,降低细胞抗氧化性能。添加枯草芽孢杆菌肽聚糖后,随PG浓度增加和处理时间延长,细胞抗氧化性能增加,呈显著的量效关系,且36 h呈二次曲线相关。IL-1β、IL-8、TNF-α1 m RNA表达呈二次曲线递减,IL-10、TGF-βm RNA表达呈线性递增。研究表明,不同浓度枯草芽孢杆菌肽聚糖均可保护由β-conglycinin诱导引起的鲤幼鱼IECs氧化损伤,提高IECs抗氧化能力;高浓度PG通过抑制致炎因子和促进抗炎细胞因子的基因表达,提高IECs的抗炎能力。

大豆7S球蛋白β-伴大豆球蛋白的研究现状

大豆β-伴大豆球蛋白约占大豆籽粒总蛋白含量的25%,是7S球蛋白的组分之一,是影响大豆籽粒蛋白营养品质及加工品质的重要组分。本文对大豆7S球蛋白β-伴大豆球蛋白的基本属性,亚基积累规律,遗传变异体的种类及其分子遗传学水平的研究现状等进行了综述。