β-伴大豆球蛋白酶解物抑制致病菌粘附Caco-2细胞

以黄大豆和黑大豆为原料调制了β-伴大豆球蛋白，用SDS-PAGE和PAS染色分析了黄大豆及黑大豆来源的β-伴大豆球蛋白各个亚基构成及糖含量，并通过体外模拟人体消化方法制备了胃蛋白酶及胰蛋白酶酶解物，利用动物细胞培养的方法分析了两种β-伴大豆球蛋白酶解物对肠道致病菌大肠杆菌（Escherichia coli strains serotype O26）和沙门氏菌（Salmonella typhimurium LT2）粘附Caco-2细胞的抑制作用。结果表明：黄大豆及黑大豆来源的β-伴大豆球蛋白均含有相同的亚基，糖含量上基本一致，为3．5％～3．7％；二者加热处理后再体外消化得到的酶解产物与未加热处理相比可以显著抑制大肠杆菌对Caco-2细胞的粘附，而对鼠伤寒沙门氏菌的抑制作用不明显。这一结果说明，摄取加热后的β-伴大豆球蛋白，在经胃蛋白酶、胰蛋白酶等消化作用后，其消化产物有可能具有保护肠道上皮细胞不被大肠杆菌致病菌粘附的作用。

超声预处理对β-伴大豆球蛋白酶解物抗氧化性的影响

研究比较超声预处理前后β-伴大豆球蛋白的结构,表面疏水性和β-伴大豆球蛋白酶解物抗氧化活性的变化。超声预处理显著提高了β-伴大豆球蛋白酶解物的抗氧化活性(p<0.05),当β-伴大豆球蛋白经过超声功率100 W,超声时间30 min,超声温度50℃处理后,结构变化最显著且其酶解物抗氧化活性最高。β-伴大豆球蛋白经过超声预处理后,在280 nm附近的紫外吸收峰增强,α-螺旋结构含量最多增加3.14%,β-转角结构含量最多增加1.22%,β-折叠结构含量最多减少4.17%,埋藏在疏水环境中的酪氨酸和色氨酸等疏水基团从分子的内部展露到分子的表面,提高了蛋白质的表面疏水性,这可能是β-伴大豆球蛋白酶解物抗氧化活性提高的主要原因。因此,超声预处理是一种辅助提高β-伴大豆球蛋白酶解物抗氧化能力行之有效的方法。

微生物转谷氨酰胺酶(MTGase)的蛋白质底物催化特性及其催化机理研究 (I)MTGase催化单底物蛋白质的聚合特性

采用SDS-PAGE结合凝胶成像技术比较了MTGase在还原状态下对酪蛋白酸钠(SC)、牛血清蛋白(BSA)、大豆球蛋白(glycinin)和β-伴豆球蛋白(β-conglycinin)、β-乳球蛋白(β-LG)和α-乳白蛋白(α-LA)等单底物蛋白的聚合效率。结果表明MTGase较易催化SC和BSA聚合,其次为大豆球蛋白,而β-伴豆球蛋白、β-LG和α-LA最不易。根据MTGase催化不同单底物蛋白质的聚合速率的差异,对MTGase催化单底物蛋白质的聚合特性进行了探讨,指出:①底物蛋白的分子结构对MTGase催化活性的重要性;②蛋白质表面疏水度对MTGase催化活性的重要性;③对蛋白质进行一定的预处理可增强MTGase对蛋白质(特别是球蛋白)的催化活性。

大豆巯基肽的共价色谱法制备及其MALDI-TOF-MS分析

建立了一种从复杂的大豆球蛋白酶解物中提取巯基肽的高选择性方法。首先,对大豆球蛋白酶解物中的二硫键用1,4-二硫苏糖醇进行还原,对还原剂的用量进行了考察和优化,提高了酶解物中的巯基肽含量。然后用Thiopropyl-Sephrose 6B共价色谱制备还原酶解物中的巯基肽,对共价色谱的吸附、解吸条件进行了考察和优化。研究表明:二硫键还原最佳1,4-二硫苏糖醇用量为20 mmol/L,还原之后酶解物中的巯基含量从1.8μmol/g提高到了113.8μmol/g。共价色谱的最佳条件为还原酶解物的上样量为酶解物中巯基含量占凝胶活性位点的80%,键合时间30 min;解吸时1,4-二硫苏糖醇浓度20 mmol/L,解吸时间20 min。此外,C18柱可以有效地将巯基肽中的1,4-二硫苏糖醇和2-巯基吡啶去除。MALDI-TOF-MS分析表明制备的巯基肽中可检测到45个肽段,其中36个肽段含有巯基,表明Thiolpropyl-Sepharose 6B共价色谱对巯基肽有很高的选择性。