p,p’-DDE和β-六氯化苯对青春期大鼠睾丸组织波形蛋白和N-钙粘蛋白及卵泡刺激素受体mRNA和蛋白表达的影响

目的研究p,p’-DDE、β-六氯化苯(β-benzene hexachloride,β-BHC)联合染毒对青春期大鼠睾丸组织波形蛋白(Vimentin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)和卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)mRNA和蛋白表达的影响。方法将20只50日龄清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和p,p’-DDE(100 mg/kg)单独染毒组、β-BHC(100 mg/kg)单独染毒组、p,p’-DDE(100 mg/kg)+β-BHC(100 mg/kg)联合染毒组,每组5只。采用腹腔注射方式进行染毒,注射容积为10 ml/kg,隔天1次,连续进行10 d。采用Real-time PCR检测大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR mRNA的表达;采用Western Blot法检测Vimentin、N-cadherin、FSHR蛋白的表达。结果与对照组相比,β-BHC单独染毒组和p,p’-DDE+β-BHC联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、FSHR mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与p,p’-DDE+β-BHC联合染毒组相比,p,p’-DDE和β-BHC单独染毒组大鼠睾丸组织Vimentin mRNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,p,p’-DDE和β-BHC单独和联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR蛋白的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而p,p’-DDE和β-BHC单独和联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR mRNA和蛋白的表达水平间比较,差异均无统计学意义。结论 p,p’-DDE、β-BHC暴露可降低青春期大鼠睾丸组织中Vimentin、N-cadherin、FSHR的表达水平。

p,p'-DDE,β-BHC单独及其联合对睾丸Sertoli细胞JNK MAPK信号转导通路机制的研究

目的:研究2,2-双-(对氯苯基)-1,1-二氯乙烯(p,p'-DDE)和β-六氯化苯(β-BHC)单独作用及联合作用对离体培养大鼠睾丸Sertoli细胞c-jun氨基末端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的作用机制。方法:从大鼠睾丸组织中分离Sertoli细胞进行离体原代培养2d,设溶剂(DMSO)为对照组,分别以终浓度为10、30、50μmol/L的p,p'-DDE,β-BHC及二者联合染毒Sertoli细胞24h,采用二步RT-PCR法检测Sertoli细胞JNK、c-junmRNA的表达水平。结果:①染毒24h后,对照组及10、30、50μmol/Lp,p'-DDE组Sertoli细胞JNKmRNA灰度比值分别为0.068±0.001、0.164±0.002、0.207±0.006、0.499±0.017;c-junmRNA灰度比值分别为0.122±0.002、0.157±0.006、0.218±0.007、0.289±0.004,随着p,p'-DDE剂量的增加,JNK、c-junmRNA的表达水平均逐渐升高,且10、30、50μmol/L组与对照组差异存在显著性(P<0.05)。β-BHC及联合染毒各组随着染毒剂量的增大,Sertoli细胞JNK、c-junmRNA表达水平也显著增加,且呈剂量依赖性关系(P<0.05)。②p,p'-DDE、β-BHC二者联合作用与单独作用相比,10μmol/L的p,p'-DDE,β-BHC及二者联合染毒组,JNKmRNA灰度比值分别为0.164±0.002、0.149±0.003、0.178±0.004;c-junmRNA灰度比值分别为0.157±0.006、0.131±0.004、0.172±0.002,联合染毒组JNK、c-junmRNA灰度比值均显著高于两者单独作用且存在显著性差异(JNK:P<0.05;c-jun:P<0.01);30、50μmol/L染毒剂量组JNK、c-junmRNA表达水平联合染毒组也显著高于单独染毒组(JNK:P<0.05,c-jun:P<0.01),而各DMSO对照组之间mRNA表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:p,p'-DDE、β-BHC及二者联合作用于睾丸Sertoli细胞后,JNK及其下游的c-jun基因转录水平均明显升高,且联合作用比单独作用更加明显。