β-内酰胺酶抑制剂联合不同β-内酰胺类抗生素对耐多药结核分枝杆菌临床菌株体外活性研究

目的体外评估5种β-内酰胺类抗生素和不同β-内酰胺酶抑制剂组合对耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)活性的影响,以期发现针对耐多药结核病最有效的β-内酰胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂组合。方法选取2021年河南省耐药监测项目收集的MDR-TB菌株,使用最小抑菌浓度(MIC)法测定5种β-内酰胺类抗生素或联合β-内酰胺酶抑制剂对临床MDR-TB的MIC值,并采用聚合酶链式反应(PCR)和DNA测序法分析菌株的bla C突变情况。结果共纳入105株MDR-TB,MIC检测结果显示,多尼培南对MDR-TB抗菌活性最高,其MIC 50值为16μg/mL。与β-内酰胺酶抑制剂联合后,大部分β-内酰胺类抗生素的MIC值明显下降。共有13.33%(14株)的菌株存在bla C基因的突变,主要为3种核苷酸替代突变,分别为AGT333AGG、AAC638ACC、ATC786ATT。BlaC蛋白Ser111Arg和Asn213Thr与同义单核苷酸突变相比,增强了克拉维酸/舒巴坦与美罗培南对MDR-TB的协同作用。结论多尼培南和舒巴坦组合对MDR-TB具有最强的抗菌活性。而BlaC蛋白Ser111Arg和Asn213Thr的替代突变使MDR-TB对美罗培南的敏感性在克拉维酸/舒巴坦协同时增强。

AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶研究进展及临床治疗对策

产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC酶)是革兰阴性杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制。AmpC酶是对第三代头孢菌素耐药而不能被β-内酰胺酶抑制剂所抑制,有染色体介导的AmpC酶和质粒介导AmpC酶,前者分诱导表达和非诱导表达,后者可随耐药质粒复制、接合、转化及转座子移位,在革兰阴性杆菌内或种间传播。ESBLs是由质粒介导的能水解大多数青霉素、头孢菌素和氨曲南等β-内酰胺类抗生素且活性能被酶抑制剂抑制的一类β-内酰胺酶,主要由肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产生,也可由其它肠杆菌科细菌、不动杆菌属、铜绿假单胞菌产生。碳青霉烯类抗生素是治疗产AmpC酶和ES-BLs革兰阴性杆菌感染的首选药物。

高效液相色谱法测定β-内酰胺抗生素中残留乙酸的含量

目的建立测定β-内酰胺类抗生素原料中乙酸残留量的HPLC方法。方法采用多因素组内设计方法,确定色谱流动相的组成、比例和pH值。参考ICH Q2,从专属性、检出限和定量限、线性、准确度、精密度和耐用性等6个方面对方法进行验证。用所建立的方法对19种β-内酰胺类抗生素原料进行了测定。结果采用C_(18)色谱柱,流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长220 nm。供试品、溶剂和流动相对乙酸测定没有明显干扰;乙酸的最低检出限约为0.029μg,最低定量限约0.12μg;从定量限到限度2倍浓度范围内,方法的线性关系良好,拟合直线方程为y=388866.7186x-177.5720,r2=0.9999;低中高浓度加样回收率平均分别为93%,96%和99%;方法的重复性和中间精密度分别为2.37%和2.11%;在3根不同C_(18)色谱柱上的耐用性良好。19种β-内酰胺抗生素原料中有3种筛查出残留乙酸。结论所建方法可以实现对β-内酰胺类抗生素原料中残留乙酸的准确定量,为该类原料的生产过程控制和标准物质研制提供了依据。

血液病房产超广谱β-内酰胺酶菌分布情况及药物敏感性分析

目的分析2020年1月至2021年11月江西省九江市第一人民医院(以下简称“本院”)血液病房产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌分布情况及药物敏感性。方法选取2020年1月至2021年11月江西省九江市第一人民医院血液病房138例患者作为研究对象,收集患者的分泌物进行病原菌培养,并对产ESBLs菌分布情况和药物敏感性进行分析。结果革兰氏阴性菌居多,共分离出160株,占比80.00%,其次是真菌和革兰氏阳性菌,各分离出22株和18株。其中以铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌最为常见。本院血液病房病原菌共检出200株,检出情况主要以痰、中段尿、咽拭子居多,以肛拭子、大便检出较少;200株病原菌共检出产ESBLs菌56株,占比28.00%,以中段尿、咽拭子检出居多,脓液、肛拭子、大便中未检出。本院血液病房产ESBLs菌除对亚胺培南、美罗培南耐药率较低外,对大部分抗菌药物的耐药率均较高。结论本院血液病原菌以革兰氏阴性菌为主,且对抗菌药物的耐药率较高,临床应重点关注此类菌株感染,需引起重视,加强院感的防控,避免发生耐药菌的暴发和流行。

瑞芬太尼调节IL-10/β-内啡肽信号通路对坐骨神经损伤大鼠疼痛的影响

目的探讨瑞芬太尼对坐骨神经损伤(SNI)大鼠疼痛的影响及作用机制。方法建立SNI大鼠模型,大鼠分为假手术组、模型组、瑞芬太尼低剂量组(5μg·kg^(-1)·min^(-1))、瑞芬太尼高剂量组(20μg·kg^(-1)·min^(-1))和瑞芬太尼+抑制剂组(20μg·kg^(-1)·min^(-1)的瑞芬太尼+10μL IL-10抗体),评估大鼠疼痛阈值,统计坐骨神经指数(SFI),Masson染液评价靶肌肉萎缩情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量,免疫荧光检测微管相关蛋白(MAP2)的表达,Western blot检测IL-10、β-内啡肽蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠疼痛阈值、SFI和IL-10、β-内啡肽蛋白的表达水平下降,肌肉萎缩、IL-1β、IL-6、TNF-α、MAP2表达增加(P<0.05);与模型组比较,瑞芬太尼低、高剂量组大鼠疼痛阈值、SFI和IL-10、β-内啡肽蛋白的表达水平升高,肌肉萎缩、IL-1β、IL-6、TNF-α、MAP2表达降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);与瑞芬太尼高剂量组比较,瑞芬太尼+抑制剂组大鼠疼痛阈值、SFI和IL-10、β-内啡肽蛋白的表达水平下降,肌肉萎缩、IL-1β、IL-6、TNF-α、MAP2表达增加(P<0.05)。结论瑞芬太尼可能通过激活IL-10/β-内啡肽信号通路抑制SNI大鼠的疼痛行为。

基于不同识别元件的β-内酰胺类药物快速检测方法研究进展

β-内酰胺类药物被广泛用于动物细菌性疾病的治疗,在世界抗生素市场中占据了超过一半的份额。然而,此类药物给食品动物大量使用会造成在动物源性食品中的残留,从而对消费者健康构成潜在威胁。因此,必须要对此类药物在动物源性食品中的残留进行检测。在β-内酰胺类药物的快速检测方法中,核心试剂是使用识别元件,它直接影响检测方法的选择性。受体、抗体、适配体、分子印迹聚合物等识别元件均具有特异性识别能力,已被用于不同兽药的残留检测。本文着重论述了近年来基于上述识别元件的方法在β-内酰胺类药物残留检测方面的应用,旨在为相关研究人员提供一些帮助。

新型β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复合制剂头孢吡肟-他尼硼巴坦钠的研究进展

细菌耐药是一个全球性的公共卫生问题,尤其是碳青霉烯类耐药的革兰阴性菌(carbapenem-resistant Gram-negative bacteria,CR-GNB)的危害尤为严重。临床对CR-GNB感染的防治手段非常有限,故迫切需要新型抗菌药物。头孢吡肟-他尼硼巴坦钠是由第4代头孢菌素头孢吡肟和新型广谱β-内酰胺酶抑制剂他尼硼巴坦钠组成的复方制剂,其对A、B、C和D 4类β-内酰胺酶都具有直接的抑制活性,因而可能对CR-GNB等耐药菌具有较好的抗菌作用。该文从头孢吡肟和他尼硼巴坦钠的作用机理、药学特性、抗菌活性、临床研究、抑酶/抑菌谱等方面进行了综述,从而为头孢吡肟-他尼硼巴坦钠的临床合理应用提供参考。

基于帕累托图的门急诊β-内酰胺类抗菌药物不合理用药分析

目的 通过分析医院门急诊β-内酰胺类抗菌药物不合理用药情况,探讨不合理用药的主要发生因素,制定改进措施,为临床合理用药提供参考。方法 抽取2021年1月—2023年7月北京市昌平区中西医结合医院门急诊β-内酰胺类不合理处方,利用Execl软件整理数据,将不合理问题类型和涉及感染部位进行帕累托图分析。结果 β-内酰胺类不合理处方共723张,占总抗菌药物不合理处方的43.69%(723/1 655),不合理问题共742例次。不合理问题涉及药品中,三代头孢菌素占比最多,为69.54%;其次为酶抑制剂复方制剂,占比16.85%。适应证不适宜(50.81%)、遴选药品不适宜(25.74%),累计构成比在0~80%,为主要因素;用法用量不适宜(21.97%)、联合用药不适宜(0.81%)、给药途径不适宜(0.40%)、重复用药(0.27%),累计构成比在80%~100%,分别为次要因素和一般因素。皮肤软组织(35.96%)、下呼吸道(17.70%)、上呼吸道(16.60%)、皮肤软组织感染的预防用药(6.64%),累计构成比0~80%,为主要因素;消化系统(6.22%)、泌尿生殖系统(5.26%)累计构成比在80%~90%,为次要因素;盆腹腔、耳鼻喉、眼科口腔、骨关节等累计构成比在90%~100%,为一般因素。结论 医师要结合当地细菌耐药趋势、患者个体化因素、药代动力学及联合用药等信息选择合适治疗方案。药师应通过综合分析评价,为临床提供重要用药信息参考和药物警戒信息,引导医师规范使用抗菌药物、优化治疗方案。

β-内酰胺酶抑制剂的稳定性与降解反应特性

β-内酰胺酶抑制剂与广谱β-内酰胺抗生素的联合使用是一种有效解决细菌耐药的策略之一。目前上市的β-内酰胺酶抑制剂按其化学结构主要包括氧青霉烯类(克拉维酸)、青霉烷砜类(舒巴坦和他唑巴坦)和二氮杂二环辛烷类化合物(阿维巴坦),本文对临床常见的β-内酰胺酶抑制剂的稳定性与降解反应特性进行综述,并结合当前药典标准中的有关物质检查项,探讨上述β-内酰胺酶抑制剂的杂质谱控制策略。

枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产β-内酰胺酶的抑制作用

【目的】探讨枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产生的β-内酰胺酶的抑制作用机制,为临床研发β-内酰胺酶抑制剂提供基础依据。【方法】通过青霉素抑菌圈边缘试验筛选产β-内酰胺酶阳性菌株,通过药敏纸片法检测阳性菌株在32、64、128μg/mL枸杞槲皮素作用下对青霉素的敏感性变化;借助多功能酶标仪检测在32、64、128、256μg/mL枸杞槲皮素处理下青霉素含量的变化,并以此来评估枸杞槲皮素对β-内酰胺酶合成及在64、128、256μg/mL枸杞槲皮素作用下对β-内酰胺酶活性的影响。通过AutoDockTools 1.5.6软件对枸杞槲皮素与BlaZ蛋白进行分子对接,采用Discovery Studio 2019 Client软件对分子对接结果进行可视化分析。【结果】从36株金黄色葡萄球菌中共筛选出23株产β-内酰胺酶阳性菌株。药敏纸片结果表明,随着枸杞槲皮素浓度的升高,阳性菌株对青霉素的敏感性增加。多功能酶标仪检测结果表明,枸杞槲皮素可以抑制β-内酰胺酶的合成,并显著抑制β-内酰胺酶的活性(P<0.05)。分子对接结果表明,枸杞槲皮素通过与BlaZ蛋白Ω-loop区域内的保守残基Asn161以氢键结合,影响BlaZ蛋白与β-内酰胺类抗生素的结合。【结论】枸杞槲皮素可以减少β-内酰胺酶的合成,还可通过降低β-内酰胺酶的活性增强青霉素的抑菌作用,具有作为β-内酰胺酶抑制剂的潜在活性,为后续开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供了参考依据。

β-内酰胺酶抑制剂复合抗菌药物的使用量与产ESBLs细菌分离率关系研究

目的 探讨临床上产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)细菌分离率的增加 ,是否与含 β 内酰胺酶抑制剂的复合β 内 酰胺类抗菌药物使用量有关 ,为抗菌药物的规范合理使用提供依据。方法 用SPSS10 0统计软件包 ,统计分析 1998～ 2 0 0 2年 ,每年含β 内酰胺酶抑制剂的复合 β 内酰胺类抗菌药物使用量与产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离率间的相关性关系。结果 5年来含 β 内酰胺酶抑制剂的复合 β 内酰胺类抗菌药物使用总量从16 5 4kg/年增加到 15 6 86 8kg/年 ,增加了 84 8 4 % ;培养总样本数从 10 897份增加到 185 6 7份 ,增加了 70 4 % ;两者间相关系数r =0 884 ,P <0 0 5 ;抗菌药物使用总量与细菌分离株数间的相关系数r =0 4 4 9,P >0 0 5 ,与产ESBLs细菌总分离率间的相关系数r =0 933,P <0 0 5 ;年平均每份送检样本中此类抗菌药物的使用量与细菌分离株数间的相关系数r =0 389,P >0 0 5 ,与产ESBLs细菌总分离率间的相关系数r =0 889,P <0 0 5。结论 产ESBLs细菌分离率的增加与含 β 内酰胺酶抑制剂的复合 β 内酰胺类抗菌药物使用总量及年平均每份送检样本中此类抗菌药物的使用量呈正相关 ,提示临床使用抗菌药物应更具合理性。

广州地区革兰阴性杆菌CTX-M和OXA型广谱β-内酰胺酶基因分型研究

目的调查广州地区临床分离的革兰阴性杆菌中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和OXA型广谱β-内酰胺酶(beta-lactamase,Bla)的主要基因型别及其流行情况。方法按照NCCLS 2001年标准筛选广州地区临床分离菌株的ESBLs表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增法和DNA测序法进行ESBLs基因序列分析。结果PCR扩增结果显示,CTX-M1、CTX-M2、CTX-M9群和OXA的总阳性率在本地区临床分离的临床检测ESBLs阳性的革兰阴性杆菌中分别为9.96%、0、35.5%和1.6%,同时检出≥两种ESBLs基因的菌株数64株,阳性率为5.9%;序列分析进一步证实了CTX-M型ESBLs的具体型别,包括CTX-M-3、CTX-M-22、CTX-M-9、CTX-M-14、CTX-M-17、CTX-M-18、CTX-M-21、CTX-M-24、TOHO-2和TOHO-3,其比例分别为3.23%、3.7%、4.99%、3.32%、2.21%、3.69%、2.95%、4.43%、1.85%和1.48%;其中以CTX-M-9和CTX-M-24阳性率较高;在本地区只检出1种OXA型Bla-OXA-2/PSE-2(1.38%,15/1084);另外,还检出了8株无法具体归类的CTX-M-9型ESBLs,占0.74%;CTX-M型基因主要分布于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,分别占42.8%和36.3%,而OXA基因则主要分布于铜绿假单胞菌中,占80%。结论本地区CTX-M类ESBLs也较为常见,其中尤以CTX-M-9和CTX-M-24为主,暂无CTX-M2群ESBLs,可能存在1种或多种新的CTX-M型ESBLs。

β-内酰胺类抗菌药物及其临床应用评价

β-内酰胺类抗菌药物是临床应用最为广泛的一类抗感染药,其化学结构中含有β-内酰胺环。根据β-内酰胺环是否连接有其他杂环以及所连接杂环的化学结构差异,又可分为青霉素类（Penicillins）、头孢菌素类（Cephalosporins）、碳青霉烯类（Carbapenems）、头霉素和氧头孢烯类（Cephamycins）、单环β-内酰胺类（Monobactams）以及β-内酰胺酶（ESBL）抑制剂（Beta-lactamase inhibitors）。

某三甲医院细菌耐药健康及经济负担研究——以产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌为例

目的 细菌耐药是全世界共同面对的公共健康难题,产生了严重的健康及经济威胁。本研究从医院视角进一步明确产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌感染导致的健康及经济负担,以期为细菌耐药相关政策干预的评估与优化提供实证依据。方法 选取江西省某三甲医院出院时间在2018—2019年的170,819住院人次样本为研究对象,并设置了ESBLs阳性感染组、ESBLs阴性感染组和无感染及定植组。采用倾向得分匹配(propensity score matching, PSM)对3个组进行1:1:100匹配,并采用Cox比例风险回归模型、多状态模型分别测算ESBLs阳性感染组相对于两对照组的死亡风险比(hazard ratio, HR)和额外床日数,最终基于医院视角测算额外住院成本。结果 经匹配后纳入分析的ESBLs阳性感染组、ESBLs阴性感染组和无感染及定植组的样本分别为885、885和81,245住院人次。ESBLs阳性感染组的死亡风险是无感染及定植组的2.58倍(P<0.001),同ESBLs阴性感染者相比并未显著增大患者的死亡风险(P=0.25)。ESBLs阳性感染组相较于其无感染及定植组和ESBLs阴性感染组产生的额外床日数分别为每例3.69 d和1.92 d,对应的额外住院成本为每例6,570.12元和3,418.60元。结论 产ESBLs大肠埃希菌感染会增加患者死亡风险,延长住院时间并加重患者的经济负担,应采取措施进行防控。

AmpC β-内酰胺酶的分子生物学研究进展

Amp Cβ-内酰胺酶是属 Bush功能分类 群 ,Ambler分子分类 C类的头孢菌素酶 ,主要由染色体介导产生 ,不被克拉维酸抑制 ,能水解第三代头孢菌素、头霉素等广谱 β-内酰胺类抗生素。Amp Cβ-内酰胺酶的表达受amp复合操纵子调控 ,与肽聚糖合成密切相关。amp复合操纵子由 amp C、amp R、amp D和 amp G构成 ,分别编码Amp Cβ-内酰胺酶、转录调节因子 Amp R,N-乙酰葡萄糖胺 - L-丙氨酸酰胺酶 Amp D和膜结合转运蛋白 Amp G。其中 Amp R与 UDP- N-乙酰胞壁酰五肽结合可抑制 amp C转录 ,与 N-乙酰胞壁酰酐三肽结合可激活 amp C转录。调控基因突变及 β-内酰胺类抗生素的诱导作用均可使肽聚糖合成与水解反应失衡 ,导致 N-乙酰胞壁酰酐肽积聚 ,从而使 Amp Cβ-内酰胺酶的产量提高。近年来 ,质粒编码的 Amp Cβ-内酰胺酶逐渐增多 ,源于肠杆菌科细菌 ,与染色体编码的 Amp Cβ-内酰胺酶在分子结构上具不同程度的同源性。Amp Cβ-内酰胺酶的诱导产生及质粒编码的Amp Cβ-内酰胺酶的出现是细菌针对抗生素造成的选择压力而进化的结果 ,临床实践中必须慎用超广谱 β-内酰胺类抗生素。

鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药性分析和耐药基因检测

为研究江苏部分地区鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药物的耐药情况和耐药基因,分析其耐药表型与耐药基因的相关性,以K-B纸片扩散法对分离的20株鸡源大肠杆菌进行11种β-内酰胺类药物的敏感性分析,PCR法检测bla_(CTX-M-1)、bla_(CTX-M-2)、bla_(CTX-M-8)、bla_(CTX-M-9)、bla_(TEM)与bla_(SHV)等6种耐药基因携带情况。结果显示:20株鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药率较高,其中苯唑西林为100%,氨苄西林为75%,头孢呋辛为70%,对头孢哌酮、头孢曲松的耐药率最低,均为30%,且分离菌株表现为多重耐药;共检出3种耐药基因,bla_(CTX-M-1)、bla_(TEM)、bla_(SHV),检出率分别为85%、30%、30%,7株分离菌同时携带2种及以上耐药基因,占比35%(7/20);11种β-内酰胺类药物与blaCTX-M-1基因的符合率较高,均达85%以上,与bla_(SHV)基因的符合率相对低些,均在40%以下,且耐药表型与耐药基因型并不完全吻合。提示:江苏部分地区鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药问题比较严重,应加强当地鸡源大肠杆菌的耐药性监测,从而选择合适的药物防治鸡大肠杆菌病。

需氧性阴道炎患者分泌物内肠杆菌产β-内酰胺酶研究

目的需氧性阴道炎(aerobic vaginitis,AV)患者阴道内菌群失调是其致病的主要原因,分析易于培养的肠杆菌中产β-内酰胺酶情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法应用三维抑制试验回顾性分析2013至2014年713例本院确诊为需氧性阴道炎患者送检的分泌物经中的肠杆菌产头孢菌素酶(Amp C)、超广谱β-内酰胺酶(ESBL)、和超超广谱β-内酰胺酶(SSBL)的情况。结果各种肠杆菌β-内酰胺酶表型中,大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌产ESBL≥26%属于高产类型;阴沟肠杆菌产Amp C酶≥26%属于高产类型,且所有菌株产β-内酰胺酶均≥10%,提示在需氧性阴道炎患者体内肠杆菌β-内酰胺酶表型比例较高。结论针对需氧性阴道炎合理使用β-内酰胺类抗生素避免耐药株产生显得非常重要;并且需氧性阴道炎患者的β-内酰胺酶阳性菌株可能是继发其他感染的原发菌原群灶。