一株产多种β-内酰胺类抗生素酰化酶菌株的筛选

为了从大量的候选菌株中快速筛选头孢菌素酰化酶产生菌 ,设计并合成了一系列头孢菌素酰化酶的底物类似物。这些酰胺类的底物类似物由二部分组成 ,一部分为与头孢菌素相同或相似的侧链 ,另外一部分为发色基团或便于检测的基团。它们被酰化酶水解酰胺键以后可以方便快速的检测 ,因此用于对大量菌株进行快速筛选。采用这些化合物筛选到 6株酰化酶阳性菌株。其中菌株ZH0 65 0能够同时水解GL 7ACA和多个底物类似物。进一步研究表明 ,该菌至少产生 3种酰化酶 ,AD NABA酰化酶 ,青霉素G酰化酶和头孢菌素C酰化酶。我们初步纯化了AD NABA酰化酶和青霉素G酰化酶 ,并对头孢菌素C酰化酶的活力进行了鉴定。这是首次报道的可以产生青霉素G酰化酶和头孢菌素酰化酶等多种酰化酶的菌株 ,具有良好的应用前景。

β-内酰胺类抗生素对阴沟肠杆菌高产AmpC酶突变的选择作用

目的 比较哌拉西林 /他唑巴坦、头孢哌酮 /舒巴坦、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟和亚胺培南对阴沟肠杆菌高产AmpC酶突变的选择能力。方法 以 10株单纯诱导产AmpC酶的阴沟肠杆菌和 5株诱导产AmpC酶并产超广谱β 内酰胺酶 (ESBLs)的阴沟肠杆菌为对象 ,采用肉汤稀释渐进突变选择法筛选突变株 ,三维试验监测受试菌的AmpC酶产生情况 ,琼脂稀释法测定突变株的抗生素敏感性。结果 在单纯诱导产AmpC酶的阴沟肠杆菌中 ,头孢他啶和头孢噻肟对高产AmpC酶突变的选择能力最强。在诱导产AmpC酶并产ESBLs的阴沟肠杆菌中 ,哌拉西林 /他唑巴坦对高产AmpC酶突变的选择能力最强。头孢吡肟对高产AmpC酶突变的选择作用较弱 ,但可逐渐增强部分受试菌对第三、四代头孢菌素的耐药性。亚胺培南对高产AmpC酶突变没有选择作用 ,也没有导致受试菌耐药性增强。结论 各种 β 内酰胺类抗生素对阴沟肠杆菌高产AmpC酶突变的选择能力是不一致的 ,在治疗由阴沟肠杆菌引起的各种感染时 ,应选择具有高抗菌活性、低选择能力的 β 内酰胺类抗生素。

超高压液相色谱-串联质谱法测定牛奶中的β-内酰胺类抗生素及其酶抑制剂

目的：建立同时测定乳制品中β-内酰胺抗生素(头孢哌酮、头孢噻肟)及其抑制剂(舒巴坦、他唑巴坦)的超高压液相色谱-串联质谱分析方法。方法样品经乙腈沉淀蛋白,正己烷去除脂肪后,采用Oasis HLB固相萃取柱进一步净化,得到样品溶液。以Waters UPLC BEH C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm )分离,采用电喷雾负离子模式电离(ESI-),多反应监测(MRM)模式检测,以保留时间和两对MRM离子对的比定性,基质匹配曲线定量。结果4种分析物在1～100μg/L范围内成线性,相关系数r>0.997,空白样品中4种分析物的添加回收率为85.5%~95.5%,检出限为0.1~0.2μg/L。结论本方法快速、灵敏,重现性好,可用于乳制品中β-内酰胺类抗生素及其酶抑制剂的快速准确检测。

青霉素酰化酶促合成β-内酰胺抗生素的过程优化研究进展

β-内酰胺抗生素是临床引用中最为广泛的一类抗生素,其生产正经历由化学合成到生物催化的转变。青霉素酰化酶是半合抗工业中最重要的一类酶,近年来广泛应用于β-内酰胺抗生素合成的研究中。相对热力学控制而言,动力学控制合成是更受青睐。酶促合成过程中的反应条件的优化控制尤为重要,包括pH、温度、底物浓度和底物比等影响因素的选择对于不同来源的酶和不同目的抗生素不尽相同。反应条件优化以及反应器的合理设计可以提高产物的收率并有效降低成本,是合成β-内酰胺抗生素新的研究热点。本文针对各反应因素以及反应器设计进行综述,并指出未来的可能研究方向。

青霉素酰化酶应用于β-内酰胺抗生素合成中的两大策略

介绍了在β -内酰胺类抗生素酶法合成中两大策略的原理、各自特点、目前的应用情况 ,并将其进行了比较 。

鸡蛋清溶菌酶与β-内酰胺类抗生素联合应用对大肠埃希氏菌生物特性的影响

考察在不同温度下鸡蛋清溶菌酶与 β-内酰胺类抗生素联合应用对大肠埃希氏菌的生长及内毒素释放的影响。在不同温度下培养的大肠埃希氏菌液中加入鸡蛋清溶菌酶和β-内酰胺类抗生素氨苄西林(ampicillin)或头孢噻肟 (cefotaxime) ,收集培养上清液 ,测定其内毒素浓度 ;将上清液加入到培养的巨噬细胞中 ,测定其对巨噬细胞炎性因子的诱生能力。结果 :在不同的培养温度下 ,氨苄西林或头孢噻肟 5 0 μg/ ml均可导致细菌溶解 ,并诱导 Escherichia coli O111:B4释放大量的内毒素到培养上清液中 ,这些培养上清液在体外培养的巨噬细胞上可诱导大量的肿瘤坏死因子 (TNFα)和白细胞介素 6 (IL- 6 )产生。而鸡蛋清溶菌酶与 β-内酰胺类抗生素联合使用能阻止细菌溶解 ,降低细菌内毒素的释放 ,并减少巨噬细胞 TNFα和 IL - 6的产生。结论 :鸡蛋清溶菌酶与β-内酰胺类抗生素联合使用能降低细菌内毒素的释放 。

β-内酰胺类抗生素对L1型金属β-内酰胺酶的稳定性及酶动力学研究

目的通过比较9种β-内酰胺类抗生素对L1型金属β-内酰胺酶(金属酶)的稳定性及酶动力学参数,了解金属酶L1的酶学特性。方法制备金属酶L1的纯化产物,以紫外分光光度计测定9种β-内酰胺类抗生素对L1型金属酶的稳定性及酶动力学参数。结果重组L1酶水解青霉素及碳青霉烯类抗生素的能力接近,氨曲南及头孢他啶对L1酶高度稳定。结论L1酶的稳定性及动力学研究为指导临床合理应用抗生素提供了科学的理论依据。

位点饱和突变揭示青霉素酰化酶αR145和αF146亚基在β-内酰胺类抗生素合成中的重要性

大肠杆菌表达的重组青霉素酰化酶能催化青霉素和头孢菌素类的衍生母核加上一个乙酰基，工业上常利用这一催化反应来生产β-内酰胺类抗生素。通过分析青霉素酰化酶的晶体结构发现，当大的配基结合到活性中心时，αR145-αF146位点发生换位。经过定点饱和突变得到38个突变体，其中不少于33个突变体的催化效率有所提高。部分突变体在低底物浓度下的最高催化效率较对照提高了1．5倍，且催化过程中合成对水解反应的比例提高了5～15倍。在高底物浓度条件下，αR145G、αR145S、αR145L三个突变子较野生青霉素酰化酶的合成效率更高。

β-内酰胺类抗生素酶促合成新进展

β-内酰胺类抗生素的合成在制药工业中占据重要的地位,相关的酶促合成方法研究备受关注;酶促合成显著提高合成效率,减少三废的排放,是实现绿色合成的有效方法.综述了近年来β-内酰胺类抗生素酶促合成研究的新进展,包括一锅合成法、原位产物排出法、介质技术和酶固定化方法.

浅谈β-内酰胺类抗生素与酶抑制剂联用

随着β-内酰胺类抗生素广泛发展，各种细菌对其耐药性随之增多，由于该类抗生素易被致病菌所产生的β-内酰胺酶水解，产酶耐药菌引起的感染已成为临床急需解决的问题。解决此类抗生素耐药性的途径之一是通过与β-内酰胺酶抑制剂组方，恢复抗生素原有的抗菌活性和抗菌谱，从而提高其临床疗效。

β-内酰胺类抗生素与酶抑制剂复方制剂医院用药分析

自20世纪40年代使用第一种β-内酰胺类抗生素青霉素以来,随着抗生素长期、广泛的使用,造成细菌对抗生素的耐药性逐渐增强,成为影响这些抗生素临床效用的一大威胁。细菌产生耐药性的机制很多,

应用酶联免疫法快速检测乳品中β-内酰胺类抗生素残留

建立乳品中β-内酰胺类抗生素残留酶联免疫快速检测方法。应用氨苄青霉素抗体,通过人工制备了氨苄青霉素(Amp)和辣根过氧化物酶(HRP)的结合物Amp-HRP,建立直接ELisa竞争法检测β-内酰胺类抗生素,确定了各种β-内酰胺类抗生素的检出限,并对检测条件进行了优化。检测了已知阴性和阳性的生鲜牛乳样品,结果表明对于阴性和阳性牛奶样品的检测未出现假阳性或者假阴性结果。该方法检测结果准确可靠,可广泛应用于检测乳品中β-内酰胺类抗生素残留的检测。

β-内酰胺抗生素工业中的酶工程

在激烈竞争的 β -内酰胺抗生素工业中 ,酶法生产因其高效、低成本、安全无污染和质量稳定等优点脱颖而出。本文根据 β -内酰胺抗生素工业的生产近况 ,对酶的生产和稳定化、酶法水解以及酶法合成 β -内酰胺抗生素这些酶法生产的关键步骤提出对策。酶工程将推动我国 β

碳青霉烯抗生素对质粒介导β-内酰胺酶的稳定性及抑酶效应研究

用紫外分光光度法 ,以其它 β 内酰胺抗生素为对照 ,研究碳青霉烯类抗生素亚胺培南、美洛培南和帕尼培南对 14种标准 β 内酰胺酶 (TEM 1,TEM 2 ,TEM 3 ,TEM 5 ,SHV 1,SHV 2 ,SHV 4,SHV 5 ,PSE 1,PSE 2 ,PSE 3 ,OXA 1,OXA 2 ,OXA 3 )的稳定性及抑酶作用。亚胺培南、美洛培南、帕尼培南和头孢西丁对 14种标准 β 内酰胺酶均高度稳定。所有抗生素对超广谱 β 内酰胺酶 (TEM 3、TEM 5、SHV 2、SHV 4、SHV 5 )的IC50 低于 3 μmol/L ;但对广谱酶 (TEM 1,TEM 2 ,SHV 1,OXA)的IC50 超过 10 0 μmol/L。整体上美洛培南对 14种 β 内酰胺酶的抑制作用强于亚胺培南和帕尼培南。

皮试仪在β-内酰胺类抗生素过敏试验中的临床应用进展

β-内酰胺类抗生素是目前临床应用最广泛的一类抗生素，包括青霉素及其衍生物、头孢菌素、单酰胺环类、碳青霉烯类和青霉烯类酶抑制剂等。此类抗生素具有杀菌活性强、毒性低、适应证广及临床疗效好的优点，但在临床应用过程中，发生过敏反应的概率较高。

β-内酰胺抗生素的酶法合成研究进展

β-内酰胺抗生素的酶法合成是21世纪β-内酰胺抗生素发展的必然趋势之一,本文对近年来β-内酰胺抗生素合成研究、产品的分离纯化、酶反应器研究进行概述。

β-内酰胺类抗生素与其酶抑制剂复方制剂分析方法概述

β-内酰胺类抗生素是临床广泛应用的抗生素品种,为了抵抗细菌的耐药性,临床常与β-内酰胺类酶抑制剂联用,其中常用的有克拉维酸的联合制剂,舒巴坦的联合制剂和他唑巴坦的联合制剂。本文就上述三大类复方制剂的分析方法做一概述。