益肾达络饮缓解EAE模型小鼠神经系统炎症的机制研究

目的研究益肾达络饮抑制β-制动蛋白1(β-arrestin1)表达对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠炎症因子、环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响,探讨益肾达络饮治疗EAE的机制。方法采用随机数字表法将60只小鼠分为正常组、模型组、中药组(益肾达络饮20 g/kg)、阳性对照组(醋酸泼尼松3.9 mg/kg)、β-arrestin1 siRNA腺相关病毒(AAV-β)组、AAV-β+中药组,每组10只。除正常组外,其余各组小鼠均制备EAE模型。AAV-β组、AAV-β+中药组小鼠通过尾静脉注射AAV-β干扰β-arrestin1蛋白的表达。造模第8天开始每天灌胃相应药液/生理盐水1次,连续14 d。检测小鼠神经功能评分,观察小鼠脑和脊髓组织的病理形态学变化,检测小鼠血清中炎症因子[白细胞介素2(IL-2)、IL-23、γ干扰素(IFN-γ)]水平,检测小鼠脑和脊髓组织中β-arrestin1、cAMP、PKA、CREB蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠神经功能评分、血清中炎症因子水平以及脑、脊髓组织中β-arrestin1蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);脑和脊髓组织中PKA、CREB、cAMP蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);脑和脊髓组织中大部分神经元可见胞体皱缩深染及炎症细胞聚集现象,且存在不同程度的脱髓鞘改变。与模型组比较,各给药组小鼠神经功能评分、脑和脊髓组织的病理形态学变化及大部分指标(除AAV-β组脑组织中的CREB、cAMP蛋白外)均显著逆转(P<0.05或P<0.01)。与AAV-β组比较,AAV-β+中药组小鼠神经功能评分、血清中IFN-γ水平、脊髓中β-arrestin1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),脑与脊髓组织中PKA、cAMP蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论益肾达络饮可能是通过抑制中枢神经系统中β-arrestin1的表达,进而激活cAMP/PKA/CREB信号通路,减轻神经系统炎症,最终缓解EAE的症状。