三种不同方法检测β-咔啉类生物碱所致的人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的比较分析目前常用的三种检测细胞凋亡方法在不同β-咔啉类生物碱浓度条件下所致人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的运用。方法将生长状态良好的细胞按不同的给药浓度分为A组40μg/ml,B组20μg/ml,C组10μg/ml,D组5μg/ml,E空白对照组,作用24h、48h。分别用MTT法、Hoechest33258细胞核染色法、流式细胞术检测细胞凋亡。结果 MTT法结果显示,A组、B组、C组、D组与E组相比较,生长抑制率差异有统计学意义(P<0.01);Hoechest33258细胞核染色法显示,E组细胞核浓染、边集、碎裂较少,其他组细胞核均有不同程度的改变,A组、B组、C组、D组与E组相比较,凋亡核百分比差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,A组、B组、C组、D组与E组细胞凋亡率相比有统计学差异(P<0.01)。结论β-咔啉类生物碱能引起人胃癌SGC-7901细胞凋亡。

β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及PTEN/Akt表达的影响

目的探讨β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)表达的影响。方法采用不同浓度β-咔啉类生物碱(0、10、20、40μg/ml)处理SGC-7901细胞后,应用活细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测β-咔啉类生物碱处理24、48 h后的SGC-7901细胞增殖抑制情况,Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察β-咔啉类生物碱处理48 h后的细胞凋亡情况,荧光定量聚合酶链反应和Western blotting分别检测β-咔啉类生物碱(0、10、20、30、40μg/ml)处理48 h后细胞中PTEN、Akt m RNA和蛋白水平。结果β-咔啉类生物碱均能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,抑制率呈浓度依赖性(P<0.05);β-咔啉类生物碱可诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,且伴有凋亡特有的DNA梯形条带;与0μg/ml相比,其余浓度β-咔啉类生物碱处理48 h后的PTEN m RNA和蛋白表达增加,而Akt m RNA和蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论β-咔啉类生物碱可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导凋亡,可能与影响PTEN及Akt表达有关。

β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察β-咔啉类生物碱对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法不同浓度β-咔啉类生物碱处理人胃癌SGC-7901细胞48 h后,检测细胞增殖、凋亡情况,并以荧光定量聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别测定细胞中抑癌基因PTEN、蛋白激酶B(AKT)基因mRNA及其蛋白表达。结果不同浓度的β-咔啉类生物碱均能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,其中40μg/m L浓度的抑制效果较其他浓度及5-Fu干预组更显著(P<0.01),并可诱导细胞凋亡。不同浓度β-咔啉类生物均可引起PTEN mRNA和蛋白表达增加,AKT mRNA和蛋白表达减少,其中40μg/m L浓度的调节效果较其他浓度及5-Fu干预组更显著(P<0.01)。结论β-咔啉类生物碱可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导凋亡,其作用机制可能是通过上调PTEN及下调AKT蛋白的表达实现。

β-咔啉类生物碱对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的探讨β-咔啉类生物碱对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法通过体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,将含有不同浓度(5、10、20、40μg/mL)β-咔啉类生物碱的培养液与SGC-7901细胞共同培养24 h和48 h。采用MTT比色法计算细胞抑制率;在荧光显微镜下用Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞形态学改变;流式细胞仪检测凋亡率及基因组DNA琼脂凝胶电泳检测凋亡梯状条带。结果β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞的损伤呈浓度依赖性;β-咔啉类生物碱分别作用24 h和48 h后半数抑制浓度(IC50)分别为17.79μg/mL和12.17μg/mL;荧光染色可观察到有细胞核固缩及核断裂的凋亡现象;流式细胞术显示:阴性对照组(0μg/mL)及β-咔啉类生物碱5、10、20、40μg/mL浓度组24、48 h凋亡率为别1.66%、11.27%、20.32%、30.66%、41.42%和3.84%、15.29%、23.34%、34.87%、49.54%,细胞凋亡率伴随给药浓度增加而增加;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测到明显的凋亡梯状条带。结论β-咔啉类生物碱能诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡,抑制细胞增殖。

β-咔啉类生物碱诱导人胃癌细胞株SGC-7901细胞凋亡的研究

目的观察β-咔啉类生物碱诱导人胃癌细胞株SGC-7901细胞凋亡的形态学改变,探讨其作用机制。方法将β-咔啉类生物碱设定为浓度0、5、10、20、40μg/mL,分别用其处理人胃癌细胞株SGC-7901 48h,透射电镜观察其对SGC-7901细胞超微结构的影响;荧光显微镜观察其对SGC-7901细胞凋亡形态的影响。结果透射电镜结果可见SGC-7901细胞超微结构改变,提示其可诱导细胞凋亡;Hoechst 33258荧光染色分析,在不同浓度β-咔啉类生物碱(0、5、10、20、40μg/mL)作用下,SGC-7901细胞凋亡率分别为(3.25±0.25)%、(6.30±0.39)%、(9.34±0.54)%、(11.33±0.37)%、(19.86±0.55)%,0μg/mL组分别与其他药物浓度组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论β-咔啉类生物碱可诱导人胃癌SGC-7901细胞株发生凋亡。

β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及PTEN、ERK mRNA表达的影响

目的探讨β-咔啉类生物碱对体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901细胞的凋亡作用及PTEN、ERK m RNA表达的影响。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,用CCK-8法测定不同浓度、不同时间β-咔啉类生物碱对胃癌细胞株的生长抑制率;用流式细胞技术检测细胞的凋亡;RT-PCR法检测PTEN、ERK m RNA表达的变化。结果β-咔啉类生物碱体外能抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖,促进了人胃癌SGC-7901细胞凋亡。不同浓度的对β-咔啉类生物碱作用于人胃癌SGC-7901细胞24、48 h后,PTEN m RNA的表达增高,ERK m RNA的表达减少,且呈剂量时间依赖性(P<0.05)。结论人胃癌SGC-7901细胞对β-咔啉类生物碱具有药物敏感性,β-咔啉类生物碱能诱导体外培养的胃癌细胞凋亡,其作用机制可能与β-咔啉类生物碱诱导胃癌细胞中PTEN-m RNA的表达增高和ERK m RNA的表达减少有关。

氟的β-咔啉类生物碱的合成

目的:探索β-咔啉类化合物的合成方法．方法:以色氨酸为原料,经酯化、“一锅煮”反应两步合成β-咔啉类衍生物．结果:得到三个三位取代的含三氟甲基β-咔啉类化合物,产物结构经红外光谱、核磁共振光谱,质谱确证．结论:本路线优于已有文献报道方法．

β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移、细胞侵袭和相关通路基因的影响

目的探索β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移、细胞侵袭,和PI3K/AKT及MAPK/ERK通路基因mRNA,以及蛋白水平的抑制作用。方法通过CCK-8法测定不同浓度条件下β-咔啉类生物碱对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制率;通过Transwell小室测定β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移、侵袭能力的影响;利用q RT-PCR、Western blotting技术检测相关基因mRNA及蛋白的表达差异。结果随着β-咔啉类生物碱浓度增加,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐升高,IC50=13.364μg/m L;阳性对照组(5-FU,5μg/m L)、β-咔啉类生物碱组中Transwell小室内SGC-7901细胞均可见显著减少(P<0.01),且β-咔啉类生物碱组SGC-7901细胞数目较阳性对照组明显降低(P<0.01);阳性对照组、β-咔啉类生物碱实验组GRB2、PI3Kp85a、FAK基因mRNA表达水平较空白对照组显著降低(P<0.05),而STAT3、ERK1、ERK2基因mRNA表达水平无统计学差异(P>0.05);β-咔啉类生物碱组PI3Kp85a、p-ERK1/2、AKT蛋白表达水平显著低于空白对照组与阳性对照组(P<0.05)。结论较5-FU,β-咔啉类生物碱具有更有效的抑制胃癌SGC-7901细胞迁移与侵袭能力,而该机制可能与β-咔啉类生物碱抑制PI3Kp85a、p-ERK1/2、AKT蛋白表达水平有关。

骆驼蓬提取物β-咔啉类生物碱对SGC-7901及裸鼠移植瘤组织PI3K和AKT表达影响

目的新疆地道药材骆驼蓬有抗肿瘤作用。本课题组通过前期实验表明,其提取物β-咔啉类生物碱有诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用,但信号通路尚未明确。本研究拟探讨β-咔啉类生物碱对人胃癌SGC-7901细胞及裸鼠移植瘤组织中PI3K和AKT表达的影响。方法使用β-咔啉类生物碱及氟尿嘧啶体外干预SGC-7901细胞,使用蛋白质印迹及RT-PCR法检测PI3K和AKT蛋白及mRNA的表达。构建裸鼠移植瘤模型,使用不同剂量β-咔啉类生物碱及氟尿嘧啶行体外干预,使用TUNEL法检测凋亡,同时使用蛋白质印迹、RT-PCR、免疫组化法检测PI3K、AKT表达。结果在体外实验中,β-咔啉类生物碱组PI3K、p-PI3K mRNA表达为0.387±0.218、0.325±0.105,低于空白对照组的0.473±0.119和0.423±0.122及阳性对照组的1.003±0.101和1.001±0.201,F值分别为13.912和13.875,P值分别为0.006和0.056。阳性对照组AKT、p-AKT mRNA表达分别为0.679±0.061和0.621±0.043,低于空白对照组的1.001±0.065和1.021±0.037及β-咔啉类生物碱组的0.800±0.056和0.728±0.031,F值分别为8.036和49.747,P值分别为0.020和<0.001。空白对照组PI3K、p-PI3K蛋白表达分别为1.330±0.091和1.244±0.030,高于阳性对照组的1.321±0.194和1.006±0.082及β-咔啉类生物碱组的1.014±0.063和1.011±0.151,F值分别为5.837和5.439,P值分别为0.039和0.045。空白对照组AKT、p-AKT蛋白表达分别为0.934±0.037和0.903±0.129,高于阳性对照的0.887±0.041和0.788±0.054及β-咔啉类生物碱组的0.865±0.080和0.594±0.131,F值分别为11.531和5.973,P值分别为0.009和0.037。在体内实验中,β-咔啉类生物碱组与各组瘤质量相比较,F=4.659,P=0.009。在体内实验中,β-咔啉类生物碱高剂量组PI3K、p-PI3K mRNA表达分别为0.520±0.215和0.513±0.201,低于空白对照组的1.003±0.088和1.001±0.051及阳性对照组的0.517±0.146和0.521±0.212,F值分别为6.873和6.327,P值分别为0.006和0.005。β-咔啉类生物碱高剂量组AKT、p-AKT mRNA表达分别为0.765±0.121和0.732±0.101,低于空白对照组的1.001±0.047和1.004±0.032及阳性对照组的0.851±0.213和0.847±0.094,F值分别为1.227和1.319,P值分别为0.359和0.372。β-咔啉类生物碱高剂量组PI3K、p-PI3K蛋白表达分别为0.621±0.113和0.323±0.069,低于空白对照组的0.706±0.047和0.745±0.153及阳性对照组的0.631±0.105和0.550±0.243,F值分别为1.109和1.194,P值分别为0.409和0.377。β-咔啉类生物碱高剂量组AKT、p-AKT蛋白表达分别为0.435±0.067和0.400±0.118,低于空白对照组的0.536±0.098和0.807±0.161及阳性对照组的0.462±0.166和0.639±0.202,F值分别为5.946和0.417,P值分别为0.013和0.793。结论在人胃癌SGC-7901细胞及裸鼠移植瘤组织中,β-咔啉类生物碱可降低PI3K和AKT蛋白和基因的表达,PI3K/AKT通路上可能有β-咔啉类生物碱作用的靶点。

β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制研究

该研究主要探索β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制与黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因表达的相关性。采用CCK-8法测定不同浓度条件下β-咔啉类生物碱对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率;并通过Transwell小室测定β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移与侵袭能力的影响;qRT-PCR及Western blot技术检测FAK基因mRNA及蛋白的表达差异。然后将si-FAK-1051重组质粒转染到SGC-7901细胞中,再次采用qRT-PCR及Western blot技术鉴定FAK基因沉默效果,最后采用同样的方法检测FAK基因沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响。随着β-咔啉类生物碱浓度增加,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐升高,IC50=13.364 mg·L-1;阳性对照组(5-FU,5 mg·L-1)和β-咔啉类生物碱组中Transwell小室内SGC-7901细胞均可见显著减少(P<0.01),且β-咔啉类生物碱组SGC-7901细胞数目较阳性对照组明显降低(P<0.01);阳性对照组、β-咔啉类生物碱实验组FAK基因mRNA及蛋白表达水平较空白对照组显著降低(P<0.05)。si-FAK-1051转染入胃癌SGC-7901细胞后,FAK基因的mRNA及蛋白表达被明显下调(P<0.05),细胞增殖和细胞迁移能力也显著降低(P<0.05)。β-咔啉类生物碱较5-FU具有更有效的抑制胃癌SGC-7901细胞迁移与侵袭能力,而该机制可能与β-咔啉类生物碱抑制FAK基因mRNA及蛋白表达水平有关。

去氢骆驼蓬碱改善阿尔茨海默病作用及其机制研究进展

去氢骆驼蓬碱(HM)是一种在自然界中丰富存在的β-咔啉类生物碱,具有多种生物学作用。近年体内外研究发现,HM对阿尔茨海默病(AD)具有明显改善作用。其机制可能与HM降低β-淀粉样蛋白(Aβ)异常沉积和Tau蛋白过度磷酸化、调节胆碱能系统、抗氧化应激和神经炎症等作用有关。该文综述HM改善AD的作用及其机制研究进展,以期为HM的临床应用和AD防治药物的开发提供参考。