1例罕见α-地中海贫血产前诊断与家系分子遗传学分析

目的 对1例疑似携带罕见地中海贫血(简称地贫)的产前诊断胎儿进一步测序分析,对先证者进行家系分子遗传学分析。方法 运用血常规和血红蛋白电泳进行地贫筛查,采用gap-PCR法和PCR-RDB法检测24种地贫突变,对疑似罕见地贫进行基因测序分析。结果 先证者为--~(SEA)地贫与α2基因IVS-Ⅱ-119地贫双重杂合子,其IVS-Ⅱ-119地贫基因遗传自母方,--~(SEA)地贫基因遗传自父方。结论 --~(SEA)/α~(IVS-Ⅱ-119)α HbH地贫患儿的诊断,为罕见地贫的遗传咨询和产前诊断提供科学理论依据。

毛细管电泳HbA+HbA2/HbA初筛联合血液学指标RDW筛查诊断新生儿β-地中海贫血的价值分析

目的分析毛细管电泳HbA+HbA2/HbA联合RDW诊断新生儿β-地中海贫血的价值。方法选取2021年1月至2023年12月在我院分娩的2009例新生儿进行毛细管电泳、血液学指标及基因检查筛查β-地中海贫血,描述β-地中海贫血基因类型分布情况,比较非β-地中海贫血组与β-地中海贫血组的毛细管电泳HbA、HbA2/HbA指标、血液学指标,分析筛检效能。结果基因检测β-地中海贫血阳性新生儿12例,总体检出率为0.60%,其中β-地中海贫血单纯杂合突变11例(91.67%),β-地中海贫血复合杂合突变1例(8.33%),以β(CD41-42)、β(IVS-Ⅱ-654)突变常见,分别占16.67%、16.67%。β-地中海贫血组新生儿HbA指标水平显著低于非β-地中海贫血组(P<0.05),β-地中海贫血组新生儿HbA2/HbA指标水平为(2.01±0.10)%,而非β-地中海贫血组新生儿未检测出HbA2。非β-地中海贫血组与β-地中海贫血组的MCV、MCH、MCHC、RBC、Hb水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);β-地中海贫血组的RDW水平高于非β-地中海贫血组,差异有统计学意义(P<0.05)。毛细管电泳HbA+HbA2/HbA及联合RDW检测的阳性预测值、阴性预测值、灵敏度、特异度最高,分别为90.08%、88.34%、89.74%、86.23%。结论毛细管电泳HbA+HbA2/HbA初筛联合血液学指标(RDW)筛查新生儿β-地中海贫血的效能高,可弥补毛细管电泳HbA+HbA2/HbA筛查假阳性率高的缺点,值得临床推广应用。

β-地中海贫血基因诊断与血红蛋白A_2含量增高程度的关系探讨

目的 探讨在红细胞脆性降低的人群中β-地中海贫血基因诊断与血红蛋白（Hb）A2含量的增高程度的关系。方法 用一管法测定红细胞脆性，电泳测定HbA2量，对红细胞脆性低且HbA2含量增高的病例应用反向杂交技术进行β-地贫基因检测。 结果 11226例标本中有77例红细胞脆性低且HbA2增高，其中14例HbA2含量在3．5％～4．0％之间，β-地贫检出率14％，63例HbA2含量在4．O％以上其检出率达97％，且其红细胞脆性明显低于其它各组。 结论 HbA2含量增高的程度提示必须进行β-地贫基因诊断。

1例罕见β-地中海贫血基因双重突变并杂合的临床诊断分析

目的:研究1例罕见α-地中海贫血合并β-地中海贫血基因突变类型、血液学特征和临床表现。方法:选取肇庆市高要区人民医院1例地中海贫血患儿的EDTA-K2抗凝血标本进行血液学特征分析、地中海贫血基因分型检测,并进行临床表现分析。怀疑患儿为异常血红蛋白病及β-地中海贫血基因分型存在疑问,应用第三代基因测序(纳米孔单分子测序)确定β-珠蛋白基因突变位置。结果:血红蛋白电泳检测显示,胎儿型血红蛋白(HbF)异常增高及出现血红蛋白变异体,地中海贫血基因分型检测为--SEA复合CD71-72(+A)纯合子突变。β-珠蛋白基因测序显示,β基因存在一条染色体HBB:c.[219T>A;220G>T]突变,另一条染色体存在HBB:c.216_217insA突变,检测到罕见的杂合突变。结论:发现罕见α合并β-珠蛋白基因突变,是SEA杂合缺失的α地中海贫血合并β基因一条染色体HBB:c.[219T>A;220G>T](CD 72 AGT>AGA、CD 73 GAT>TAT)杂合突变复合另一条染色体HBB:c.216_217insA(CD 71/72+A)杂合突变的β地中海贫血,促进地中海贫血基因的研究发展。

小红细胞百分比与低色素性红细胞百分比的比值对β-地中海贫血与缺铁性贫血的鉴别诊断价值

目的:研究小红细胞百分比(%Micro)与低色素性红细胞百分比(%Hypo)的比值对β-地中海贫血与缺铁性贫血(IDA)的鉴别诊断价值。方法:选取2021年6月—2023年5月贺州市人民医院明确诊断的β-地中海贫血患者100例(β-地中海贫血组)、IDA患者100例(IDA组)以及健康体检者50例(健康组)作为研究对象,均使用BC-6800 Plus全自动血细胞分析仪测定%Micro、%Hypo及%Micro/%Hypo比值(M/H)。比较三组%Micro、%Hypo值及M/H,通过受试者工作特征曲线分析不同Cut-off值下M/H的鉴别诊断效果。结果:β-地中海贫血组和IDA组%Micro均高于健康组(P<0.05);β-地中海贫血组和IDA组%Micro比较,差异无统计学意义(P>0.05)。β-地中海贫血组和IDA组%Hypo均高于健康组(P<0.05);β-地中海贫血组%Hypo低于IDA组(P<0.05)。β-地中海贫血组M/H高于IDA组(P<0.05)。当M/H≥5.915时,鉴别诊断效能最佳,灵敏度为79.0%,特异度为88.7%。结论:当M/H≥5.915时,对β-地中海贫血与IDA的鉴别诊断效能最佳,灵敏度为79.0%,特异度为88.7%,具有一定的鉴别诊断作用。

罕见β-珠蛋白基因Codon 24(GGT>GGA)突变导致β-地中海贫血1例及文献分析

目的:分析罕见β-珠蛋白基因突变类型、血液学及临床特征。方法:收集疑为β-地中海贫血的病例120例。对病例进行全血细胞分类及计数、血红蛋白(Hb)电泳分析检测。用跨越断裂点PCR方法、荧光PCR熔解曲线方法、DNA测序等分析α-和β-珠蛋白基因突变类型。结果:120例β-地中海贫血病例中,检出1例为罕见β-珠蛋白基因突变,基因分析为Codon 24(GGT>GGA,HBB:c.75T>A)杂合子。该病例为男性,39岁,血常规检测显示:Hb 127.3 g/L,血红细胞(RBC)5.81×10^(12)/L,红细胞平均体积(MCV)70.29 fL,红细胞平均血红蛋白量(MCH)21.94 pg,红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)312.10 g/L。Hb分析显示Hb A_(2)4.5%,Hb F 0.4%。a-地中海贫血基因分析未发现常见的基因突变类型。结论:首次在国内发现罕见β-珠蛋白基因Codon 24(GGT>GGA,HBB:c.75T>A)突变导致β-地中海贫血。该病例在临床上易漏诊,应引起重视。

中山市小榄地区β-地中海贫血产前筛查和产前诊断状况

目的调查中山市小榄地区地中海贫血产前筛查中夫妻双方β-地中海贫血(简称β-地贫)的基因突变类型、分布特征及产前诊断情况。方法采用血常规结合血红蛋白电泳法对孕妇血样进行地中海贫血产前筛查,对筛查阳性的疑似地贫携带者,采用单管多重跨越断裂点PCR技术和PCR-寡核苷酸探针反向斑点杂交法(PCR-RDB)进行地贫基因检测,地贫基因检测阳性者,则要求召回配偶。如果夫妻双方同时携带β-地贫基因,则建议其做产前诊断。结果产前地中海贫血筛查孕妇22 220名,5 560例地贫血液学表型筛查为阳性,进行地贫基因检测后发现2 621例诊断阳性,其中携带β-地贫基因突变的1 065例,含β复合α地贫突变的138例。有1 164名配偶接受召回进行地贫基因诊断,204例诊断阳性,其中携带β-地贫基因的80例,含β复合α地贫突变的11例。所有个体共检出12种β-地贫基因突变类型,构成比靠前的为CD41-42(-TCTT)突变,分别占48.75%(39/80,男方)和44.41%(473/1 065,女方);其次为CD17(A→T)突变,分别占15.00%(12/80,男方)和19.72%(210/1 065,女方)。夫妻双方为β地贫基因携带者的22对,20对进行产前诊断,9对夫妻的胎儿诊断为重型β地贫;另有2对拒绝产前诊断,随访发现其中1对夫妻生出重型β地贫患儿。结论小榄地区常居人群β-地贫基因携带率较高,地贫产前筛查及产前诊断依从性较差,应加强婚育人群地贫防控相关知识教育,确保所有婚育人群了解重型地贫的危害性及严重性,对开展地贫群体干预和促进优生优育具有重要意义。

中国广西、广东、四川三省区β-地中海贫血基因突变类型及产前基因诊断研究

本文采用聚合酶链反应(PCR)技术及特异寡核苷酸探针斑点杂交,分析研究广西、广东、四川三省区95例β-地中海贫血患者150 条染色体的基因突变。发现发生率最高的前两种突变各有不同。广西的是编码子41-42框架位移与17(A→T)突变。广东的是编码子41-42框架位移与IVS-Ⅱ-654突变,四川的则是17与41-42(17稍高于41-42)。-29位突变在四川也很常见,但广东、广西不多。-30位的T→C突变,IVS-Ⅰ-1的G→T以及IVS-Ⅰ-5的G→C三种突变,在本研究的病例中没有发现。并在此基础上完成了14例β-地中海贫血病危胎儿的产前基因诊断。

高效液相色谱法检测血红蛋白A_2诊断β-地中海贫血携带者的最佳阈值

目的确定高效液相色谱法(HPLC)检测血红蛋白A2(HbA2)诊断β-地中海贫血(β地贫)携带者的最佳阈值,以提高HbA2作为β地贫携带者诊断指标的应用价值,减少漏诊与误诊。方法以反向点杂交技术(RDB)为金标准方法,将近两年来已确诊的1007例β地贫携带者和606例正常对照采用HPLC检测HbA2的结果按不同阈值界定的范围分为真阳性、假阳性、真阴性和假阴性,并评估出敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、尤登(Youden)指数等评价指标,同时绘制受试者工作特征曲线(ROC),确定HPLC诊断β地贫携带者HbA2的最佳阈值。结果以HbA2≥4.0%作为HPLC诊断β地贫携带者的阈值时,其敏感度为99.21%,特异度为99.34%,阳性似然比为150.30,阴性似然比为0.008,尤登指数为0.99,其中尤登指数优于其它阈值,且对应的切点在ROC曲线上最靠近左上方。结论HbA2≥4.0%为HPLC诊断β地贫携带者的最佳阈值,其敏感度与特异度的综合评价性能最理想,诊断试验的真实性最好。

红细胞参数对轻型β-地中海贫血与缺铁性贫血鉴别诊断的价值

目的探讨红细胞参数在轻型β-地中海贫血(简称β-地贫)和缺铁性贫血鉴别诊断中的价值。方法对210例轻型β-地贫患者、100例缺铁性贫血患者和100例健康成人血细胞进行检测分析,并对红细胞参数中RBC、Hb、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、红细胞体积分布宽度(RDW)、RBC/MCV等指标进行比较。结果轻型β-地贫组RBC、RBC/MCV高于缺铁性贫血组和健康对照组,缺铁性贫血组RBC、Hb显著低于健康对照组和轻型β-地贫组,RDW显著增高。两贫血组MCV和MCH均显著低于对照组。将RBC、Hb、MCV、MCH、RDW、RBC/MCV同时作为筛查指标评价轻型β-地贫和缺铁性贫血的灵敏度分别为93.6%、97.7%,符合率分别为77.2%、80.0%。结论同时检测RBC、Hb、MCV、MCH、RDW、RBC/MCV等指标有助于鉴别诊断轻型β-地贫和缺铁性贫血,是筛查轻型β-地贫经济、有效的方法。

胎血血红蛋白电泳在α-地中海贫血产前诊断中的应用

目的:通过对胎血行血红蛋白(Hb)电泳检查,建立快速、简便、准确的α-地贫产前诊断方法。方法:对夫妇双方均为α-地贫携带者的高危妊娠于妊娠中期抽取脐带血行Hb电泳分析。结果:110例夫妇双方均为α-地贫的产前诊断病例中,检出Bart’s水肿胎62例,占56.36%;HbH病3例,占2.73%;α-轻型(静止型和标准型)地贫26例,占23.64%;正常18例,占16.36%。其中16例进行α-地贫基因复查,结果相符。2例夫妇双方为β-地贫,Hb电泳结果为Bart’s水肿胎,提示夫妇双方同时复合α-地贫。结论:Hb电泳产前诊断α-地贫具有简便、快速且经济、准确的优点,可作为孕中、晚期α-地贫产前诊断的常规方法。

红细胞参数的运算公式对缺铁性贫血与β-地中海贫血鉴别诊断价值探讨

目的探讨红细胞参数的运算公式对缺铁性贫血与β-地中海贫血鉴别诊断的实用价值。方法使用全自动血细胞分析仪对160例缺铁性贫血和172例β-地中海贫血患者的红细胞相关参数进行检测,以文献报道的5个红细胞参数的运算公式作为缺铁性贫血与β-地中海贫血的鉴别指标,分析它们的灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率、阳性预测值、阴性预测值、约登指数、阳性似然比、阴性似然比、对应的ROC曲线以及曲线下面积。结果在诊断IDA时,MI、S&BI、SI、和EI灵敏度在72.5%-81.88%,但特异度较低,在22.09%-26.74%之间;S&LI特异度为62.79%,但灵敏度仅为9.38%。在诊断β-地中海贫血时结果相反。各红细胞参数运算公式的约登指数和阳性似然比都较低。ROC曲线下面积最高的S&LI仅为0.753。结论上述5个红细胞参数运算公式对IDA和β-TT的鉴别诊断效能不高。

PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的应用价值

目的:探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的临床价值。方法:选取2016年1月-2019年8月在中山大学附属第一医院进行常规产前检查或优生遗传咨询的孕妇及其配偶1 001例,受检夫妻双方均为地中海贫血基因携带者,适时抽取羊水等样本,提取基因组DNA,采用PCR-流式荧光杂交技术和传统多重Gap-PCR和PCR-RDB技术对样本进行α和β-地中海贫血基因平行检测,分析基因诊断结果,评估两者在地中海贫血基因诊断中的一致性。结果:2种方法均检出正常基因型389 (占38.86%,389/1001)例,异常基因型59种,共612 (占61.14%,612/1001)例,包括α-地中海贫血416例、β-地中海贫血162例和αβ-复合地中海贫血34例。α-地中海贫血基因型主要为--SEA、-α3.7和-α4.2;β-地中海贫血中检出Cd41-42突变频率最高,其次是IVS-Ⅱ-654和CD17。检出罕见型HKαα/--SEA1例。与Gap-PCR和PCR-RDB技术相比,PCR-流式荧光杂交法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,这2种检测方法结果一致性很好。结论:PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速,与传统技术联合平行检测有助于提高地中海贫血孕妇产前诊断的准确性。

一种罕见的同义突变导致的β-地中海贫血的基因诊断和表型分析

目的:对血常规和血红蛋白电泳筛查结果提示疑为β-地中海贫血携带者的孕妇及其丈夫进行β-地中海贫血基因诊断,鉴定其表型并对胎儿进行产前基因诊断。方法:采用聚合酶链式反应-反向点杂交(PCR-RDB)方法及DNA测序方法分析并鉴定孕妇及其丈夫的外周血和孕妇的羊水样本的β-珠蛋白基因突变。结果:检测到孕妇本人为常见的β-珠蛋白基因IVS-Ⅱ-654(C>T)位点杂合突变,其丈夫携带一种罕见β-珠蛋白基因CD29(c.90C>T)位点杂合突变,产前基因诊断出胎儿基因型为βIVS-Ⅱ-654/βCD29。结论:本研究在中国人群中确切基因鉴定出β-珠蛋白基因CD29(c.90 C>T)突变,此突变类型虽为同义突变但其携带者表现为β+-地中海贫血表型。考虑遗传风险应对此类同义突变给予重视,尤其对指导遗传咨询和产前基因诊断有重要意义。

妊娠12-25周超声诊断重型α-地中海贫血胎儿

α-地中海贫血(简称α-地贫)是常见的单基因遗传病.夫妇双方均为α-地贫基因携带者时,将会有25%的危险娩出一个重型α-地贫儿.

新改良PCR／LDR／毛细管电泳技术产前诊断胎儿β-地中海贫血的可行性研究

目的研究采用新改良聚合酶链反应(PCR)/连接酶检测反应(LDR)/毛细管电泳技术产前诊断胎儿β-地中海贫血的可行性。方法使用不同浓度梯度的正常DNA与微量β-地中海贫血突变杂合子DNA混合后进行PCR扩增,扩增产物进行LDR反应后通过毛细管电泳技术检测其连接产物。采用CEQ8000型遗传分析仪分析LDR产物,并观察其灵敏度。结果将含有相同浓度CD17(A→T)突变的扩增产物作为LDR模板,采用8U DNA连接酶进行连接反应,检测灵敏度可达1:5000,产物峰的面积随着正常人外周血DNA浓度的增加而减少,至1:10 000处不能与杂峰区分,且无CD17(A→T)突变扩增产物的阴性对照未检测到LDR产物。正常孕妇血浆DNA中加入20pg CD17(A→T)突变杂合子外周血DNA扩增产物,LDR产物峰可明显与杂峰区分。结论新改良PCR/LDR/毛细管电泳技术有望通过孕妇血浆DNA检测进行β-地中海贫血的产前诊断。

α-地中海贫血种植前基因诊断妊娠成功

【目的】探讨种植前基因诊断的临床应用。【方法】对 1例夫妇均为东南亚缺失型α 地中海贫血携带者 ,经超排取卵、卵母细胞单精子显微注射受精及胚胎细胞活检 ,吸取的单个卵裂球采用针对α SEA基因的 gap PCR引物和荧光探针用荧光定量PCR技术进行诊断 ,将诊断为不致病的 3个胚胎进行宫腔内移植。【结果】胚胎移植后 7周B超诊断单胎妊娠 ,18周羊膜腔穿刺产前诊断证实为不致病胎儿。【结论】应用成熟的显微操作技术进行胚胎细胞活检 ,活检的单个卵裂球用荧光定量PCR技术进行诊断 ,获得国内首例α 地中海贫血胚胎种植前基因诊断后妊娠成功。

南宁市2685例贫血患儿α-地中海贫血基因诊断分析

目的了解南宁地区贫血患儿α-地中海贫血(地贫)发生情况、基因类型及频率。方法采用单管多重PCR体系扩增结合琼脂糖凝胶电泳和反向点杂交技术,对诊断为贫血的患儿2685例进行常见α-地贫基因检测,对HbA2和HbF升高者再进行β-地贫基因检测。结果 2685例患儿中,检出α-地贫1243例(46.29%),22种基因类型,主要为--sea/αα(23.76%),其次为-α3.7/αα(4.69%),--sea/-α3.7(3.84%),--sea/αCSα(3.17%);包括6种等位基因1563个,主要为--sea(56.62%),其次为-α3.7(15.74%)和αCSα(14.52%);α复合β地贫检出率为5.18%。结论南宁地区贫血患儿α-地贫基因突变率、中间型α-地贫及复合β地贫发生率均较高,应在该类患儿中进行基因诊断,为该类患者的病因诊断和治疗提供依据。