广西巴马小型猪β-干扰素基因的克隆、序列分析和蛋白结构预测

从刀豆素A刺激12 h和15 h的巴马小型猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出β-干扰素(IFN-β)基因,将其克隆到PMD18-T载体上,进行序列分析和蛋白结构预测。结果表明,克隆的巴马猪IFN-β基因氨基酸序列与GenBank上登录的梅山猪和长白猪的IFN-β基因氨基酸同源性为98.4%和98.9%,与人、牛、马的IFN-β氨基酸同源性分别为65.1%,65.1%,66.1%。人和猪IFN-β基因在5个螺旋结构序列上同源性很高,而且在维持蛋白结构和生物学活性上的氨基酸位点也非常保守。

用于转导猪β-干扰素基因的高滴度逆转录病毒的制备

通过 DNA重组技术 ,将卵清蛋白 5′调控序列和猪 β-干扰素基因重组到逆转录病毒载体 p L NHX中。通过瞬时转染法 ,将构建好的逆转录病毒重组载体和表达 VSV- G膜蛋白的表达载体 p VSV共转染 GP2 2 93包装细胞。病毒滴度测定表明 ,利用瞬时转染法可以产生高滴度的逆转录病毒 ,最高滴度可达 10 7CFU/ m L。