Toll样受体4信号通路中髓样分化因子88和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白在皮肤恶性黑素瘤中的表达及意义

目的探讨Toll样受体4(tol-likereceptor4,TLR4)信号通路下游的髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白(toll-like receptor-associated activator of interferon,TRIF)在皮肤恶性黑素瘤(cutaneous malignant melano ma,CMM)中的表达及与临床特征之间的关联。方法应用免疫组化方法检测40例CMM患者肿瘤组织、10例痣细胞痣患者皮损组织和10例健康皮肤组织中MyD88和TRIF的表达水平,采用SPSS22.0统计学软件进行t检验及Pearson检验处理分析。结果CMM中的MyD88及TRIF的表达强度显著高于痣细胞痣与正常皮肤组织(P<0.05);MyD88、TRIF的表达与CMM患者的年龄、性别等因素无明显相关性,而与发病部位、Clark分级、Breslow厚度、溃疡等因素相关,其中发生于肢端相较于非肢端的恶性黑素瘤表达更显著(P-0.002,0.001);随着Clark分级的增加,原位与浸润肿瘤之间,MyD88、TRIF的表达水平也增加(P=0.001,0.012);随着Breslow厚度的增加,两者表达水平也增加(P=0.004,0.026);合并溃疡的CMM中,MyD88表达增加,有统计学意义(P=0.019);TRIF表达强度无统计学差异(P>0.05);MyD88和TRIF均与CMM患者的淋巴结转移无相关性(P0.05)。结论TLR4下游的MyD88和TRIF相互协同,共同参与CMM的发生与发展。

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

基于TLR3/TRIF通路分析重组人干扰素α2b联合炎琥宁对病毒性肺炎患儿的疗效与作用机制

目的基于Toll样受体3(TLR3)/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)通路分析重组人干扰素α2b联合炎琥宁对病毒性肺炎(VP)患儿的疗效与作用机制。方法选取2020年1-5月收治的VP患儿200例,根据治疗方法不同分为观察组和对照组,每组100例。对照组给予重组人干扰素α2b治疗,观察组在对照组基础上加用炎琥宁治疗。治疗7 d后,比较2组临床疗效、临床症状改善时间、住院时间及不良反应发生情况,比较2组治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)中TLR3/TRIF通路相关因子[TLR3、TRIF、核因子-κBp65(NF-κBp65)]mRNA表达量、血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)水平及呼吸功能[呼吸频率(RR)、潮气量(VT)、呼气达峰时间(TPTEF)/呼气时间(TE)]。结果观察组临床总有效率高于对照组,退热时间、咳嗽消失时间、呼吸困难消失时间、肺啰音消失时间及住院时间均短于对照组(P<0.01)。治疗7 d后,观察组PBMC中TLR3、TRIF、NF-κBp65 mRNA表达量以及RR低于对照组,血清IgG、IgA、IgM水平以及VT、TPTEF/TE高于对照组(P<0.05)。2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人干扰素α2b联合炎琥宁治疗VP患儿的效果显著,可改善临床症状、呼吸功能,提高免疫球蛋白含量,其作用机制与抑制TLR3/TRIF通路活化有关。

针刺负调控TLR4/TRIF信号通路关键因子对脑出血大鼠炎性反应表达的影响

目的探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠TLR4/TRIF信号通路关键因子Toll样受体4(TLR4)、TRIF(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-βTRIF)、TRAM(TRIF-related Adaptor Molecule,TRAM)、NF-κB(核因子κB)表达的影响。方法将72只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺+模型组(简称针刺组)、TAK242组,每组按1 d、3 d、7 d时间节点分为3个亚组,每组6只。自体血注入法建立脑出血大鼠模型。采用针刺“百会”透“曲鬓”穴干预,Longa评分法对脑出血后大鼠神经功能进行评估;Western-blot法检测血肿组织TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达。结果神经行为学:与模型组比较,针刺组于3 d、7 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.05);TAK242组于3 d、7 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.01);与针刺组比较,TAK242组于3 d时间节点大鼠神经功能评分差异显著(P<0.05)。Western-blot结果:针刺组、TAK242组各时间节点TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达水平均显著低于模型组(P<0.01);TAK242组各时间节点TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白表达水平均显著低于针刺组(P<0.01)。结论针刺可能通过负调控TLR4/TRIF信号通路中TLR-4、TRIF、TRAM、NF-κB蛋白的表达,减轻脑出血后炎性损伤,改善大鼠神经功能缺损症状,发挥脑保护作用。

miR-27a-3p介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用

目的分析miR-27a-3p介导Toll样受体(TLR)4/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用。方法选取80只SD级雄性大鼠,20只作为正常组,其余60只建立大鼠脑出血模型后随机分为模型组、上调组、下调组各20只,做miR-27a-3p转染,鉴定miR-27a-3p转染率、脑组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β含量、神经功能缺损情况、TLR4/TRIF信号通路蛋白表达情况。结果与模型组相比,上调组miR-27a-3p表达量升高,下调组miR-27a-3p表达量降低,具有统计学差异(P<0.05),证明miR-27a-3p转染成功。相比于正常组,模型组、上调组、下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,具有统计学差异(P<0.05);相比于模型组,下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,上调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量降低,具有统计学差异(P<0.05);且下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量高于上调组,具有统计学差异(P<0.05)。结论miR-27a-3p可介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经起到保护作用。减少大鼠脑内炎症反应。

鼠李糖乳杆菌GR-1介导TRIF/NF-κB信号通路抗大肠杆菌诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤

为探讨鼠李糖乳杆菌GR-1(Lactobacillus rhamnosus GR-1,L.rhamnosus GR-1)对大肠杆菌(Escherichia coli)诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(Bovineendometrialepithelialcells,BEECs)炎性损伤的保护作用及其机制,本研究建立BEECs细胞炎性损伤模型,利用Real-time qPCR和Western blot技术,观察在BAY11-7082或siRNA干预前后,L.rhamnosus GR-1对E.coli触发的信号通路及炎性因子表达的影响。结果显示,L.rhamnosusGR-1可以显著抑制由E.coli引起的NF-κB和TRIF通路的激活及炎性因子的表达,在BAY11-7082干预后,E.coli诱导的NF-κB通路的激活及炎性因子的表达得到了显著的抑制。同样,在添加TRIF siRNA后,E.coli诱导的TRIF mRNA及炎性因子的表达水平也显著下降,产生和L.rhamnosus GR-1一致的抗炎效果。本研究表明L.rhamnosus GR-1可通过介导NF-κB和TRIF通路调节E.coli诱导的BEECs的炎性损伤,为奶牛子宫内膜炎的防治提供有益参考。

dsRNA激活肝癌细胞中TLR3-TRIF信号介导的凋亡作用

目的 :利用RNAi技术下调Toll样受体(Toll-like receptor 3,TLR3)信号通路中β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β,TRIF)的表达,探讨双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)激活肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞株(SMMC-7721)中TLR3-TRIF信号通路介导的凋亡作用。方法:分别构建靶向TRIF的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)(si TRIF),激活TLR3的ds RNA(BM-06)。用BM-06和BM-06联合si TRIF(BM-06+si TRIF)分别转染SMMC-7721细胞作为实验组,同时用Poly(I:C)作为阳性对照组、未处理细胞作为阴性对照组。Western Blot检测各组靶基因TRIF的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测凋亡相关基因Caspase3、8、9的表达,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测和Hoechst染色检测细胞凋亡率。结果:与未处理细胞相比,BM-06组和Poly(I:C)组中靶基因TRIF蛋白表达均显著增高(P<0.05),凋亡相关基因Caspase3、8 m RNA水平和细胞凋亡率显著增加(均P<0.05);Caspase9 m RNA水平略有增加,但差异无统计学意义(P>0.05);上述各结果在BM-06组和Poly(I:C)组间差异无统计学意义(P>0.05),在BM-06+si TRIF组和未处理细胞间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ds RNA激活HCC细胞中TLR3信号通路介导的细胞凋亡作用依赖于TRIF。

伊伐布雷定联合常规药物治疗小儿病毒性心肌炎的临床效果分析

目的:分析伊伐布雷定联合常规药物治疗小儿病毒性心肌炎(VMC)的临床效果。方法:选取2020年7月—2022年7月淮安市妇幼保健院收治的VMC患儿94例作为研究对象,依据随机数字表法分为观察组与对照组,各47例。对照组给予常规治疗,观察组在对照组基础上应用盐酸伊伐布雷定治疗。比较两组治疗效果。结果:观察组治疗总有效率、白细胞介素-4水平高于对照组,血清γ干扰素、单核细胞趋化蛋白-1、血清淀粉样蛋白、心肌肌钙蛋白T、B型钠尿肽前体水平以及外周血Toll样受体3(TLR3)、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、核因子-κBp65表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:伊伐布雷定联合常规药物治疗VMC的效果较好,可通过抑制TLR3/TRIF信号通路减轻炎性反应,改善患者心功能,且安全性高。

MyD88和TRIF在新生儿脑损伤中的表达及其与炎症反应的关系

目的探讨髓样分化因子88(MyD88)和β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)在新生儿脑损伤中的表达及其与炎症反应的关系。方法前瞻性选取2021年10月至2023年9月入同济大学附属妇产科医院诊断并接受治疗的新生儿脑损伤患儿103例为研究对象,作为新生儿损伤组。同时选择同期无神经系统疾病的正常新生儿80例,作为对照组。收集所有新生儿的临床资料,并采集外周静脉血3 mL,检测两组新生儿血清中降钙素原、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-2、IL-1β、IL-8和IL-6水平,采用实时荧光定量PCR检测血清中MyD88和TRIF mRNA表达,采用Pearson相关性分析对MyD88和TRIF mRNA表达与炎症反应的关系进行分析,并采用受试者操作特征(ROC)曲线评估MyD88和TRIF mRNA表达在新生儿脑损伤中的诊断价值。结果两组新生儿的胎龄、年龄、出生体重、男性占比、生产方式比较,差异均无统计学意义(P>0.05);脑损伤组Apgar评分为(7.42±1.87)分,明显低于对照组[(8.78±4.72)分],差异有统计学意义(P<0.05)。脑损伤组新生儿血清降钙素原、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8和IL-6水平分别为(6.21±0.73)ng/L、(5.94±1.83)pg/mL、(8.93±2.95)pg/mL、(3.17±1.02)pg/mL、(32.98±9.83)pg/mL、(14.51±4.37)pg/mL,均明显高于对照组[(0.59±0.18)ng/L、(2.68±0.79)pg/mL、(4.19±1.36)pg/mL、(1.29±0.73)pg/mL、(7.37±2.91)pg/mL、(2.97±0.85)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。脑损伤组新生儿血清中MyD88和TRIF mRNA表达水平分别为2.46±0.73、2.11±0.65,均明显高于对照组(1.03±0.29、0.79±0.22),差异均有统计学意义(P<0.05)。MyD88和TRIF mRNA表达均与炎症反应指标降钙素原、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8和IL-6均呈正相关(P<0.05)。血清MyD88 mRNA检测诊断新生儿脑损伤的最佳临界值为1.561,敏感度和特异度分别为77.50%和86.25%,ROC曲线下面积(AUC)为0.868(95%CI:0.804~0.932);血清TRIF mRNA检测诊断新生儿脑损伤的最佳临界值为1.249,敏感度和特异度分别为78.75%和87.64%,AUC为0.883(95%CI:0.823~0.938);MyD88联合TRIF mRNA诊断的敏感度和特异度分别为88.75%和93.64%,AUC为0.903(95%CI:0.852~0.955),MyD88联合TRIF mRNA诊断的AUC明显优于血清MyD88和TRIF单独检测的AUC(P<0.05)。结论脑损伤新生儿血清中MyD88和TRIF表达升高,且与炎症反应因子呈正相关,血清MyD88和TRIF检测对新生儿脑损伤具有一定的诊断价值,二者联合检测诊断价值更高。

Toll样受体4接头分子对乳酸诱导巨噬细胞M2极化的促进作用及其机制

目的:探讨Toll样受体4 (TLR4)接头分子髓样分化因子88 (MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1 (IL)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,定向敲除MyD88和TRIF基因(MyD88-KO组和TRIF-KO组),设未感染的Raw264.7细胞为对照组,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测基因敲除效果。实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组。15 mmol·L^(-1)乳酸诱导24 h后进行各指标检测。RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1(Arg1) mRNA表达水平,光学显微镜下观察各组细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、γ干扰素(INF-γ)和白细胞介素10 (IL0)水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子κB (NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。采用Autodock软件将乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF分子对接并观察其结合情况。结果:采用CRISPR/Cas9技术进行基因定向敲除后,与对照组比较,MyD88-KO组和TRIF-KO组细胞中MyD88和TRIF mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。乳酸作用24 h后,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中M2极化标志物CD206和Arg1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均降低(P<0.05)。细胞形态表现,Raw264.7+乳酸组细胞表现出M2极化形态,即体积增大、明显突起伪足和偏锥形细胞比例增加;MyD88-KO+乳酸组细胞同样表现出M2极化形态变化;TRIF-KO+乳酸组细胞形态变化不明显。ELISA法检测,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ水平差异无统计学意义(P>0.05),IL0水平明显升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显升高(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting法检测,与未处理Raw264.7组比较,Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组细胞中TLR4蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),Raw264.7+乳酸组细胞中核因子κB抑制蛋白α (IκB-α)和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。分子对接,乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF形成氢键数为2、4和4,结合能分别为-2.72、-3.24和-3.66。结结论论:乳酸作用巨噬细胞后,可通过调控TRIF抑制IκB-α活性进而抑制NF-κB,促进M2极化。

桔梗汤总黄酮对慢性阻塞性肺病大鼠TLR4/TRIF/IRF3通路的影响

目的考察桔梗汤总黄酮(FPG)对慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠的治疗作用,研究其对TLR4/TRIF/IRF3和TLR4/MyD88通路的影响,探讨其治疗COPD可能的分子机制。方法建立COPD大鼠模型,将60只SD大鼠分为空白组、模型组、阳性对照组及不同剂量的桔梗汤总黄酮治疗组,经过3周治疗后,通过分析大鼠肺功能指标、肺灌洗液中IL-6、IL-12、TNF-α的含量、血清中IFN-α、IFN-β的含量、肺组织病理切片及MyD88、TLR4、TRAM、TRIF、TRAF6、IRF3、P-IRF3蛋白表达量变化,探讨桔梗汤总黄酮防治COPD的分子机制。结果各个剂量组的桔梗汤总黄酮均可明显缓解COPD模型大鼠的肺部通气功能,可显著抑制COPD大鼠肺灌洗液中IL-6、IL-12、TNF-α的含量,抑制其血清中IFN-α、IFN-β的含量,以上结果均呈现明显的剂量依赖性;Western blot实验结果表明,桔梗汤总黄酮对COPD大鼠肺组织中的MyD88无显著影响,但可显著降低其中TLR4、TRAM、TRIF、TRAF6、IRF3、P-IRF3蛋白表达,差异具有统计学意义。结论桔梗汤总黄酮治疗COPD可能是通过抑制TLR4/TRIF/IRF3通路发挥作用,不是通过TLR4/MyD88经典通路实现的。

MyD88和TRIF在乳房和乳房外Paget病皮损组织中的表达

目的 研究髓样分化因子88(MyD88)和β-干扰素TIR结构域衔接因子(TRIF)在乳房和乳房外Paget病(MPD和EMPD)中的表达,并在显微镜下观察染色阳性细胞;采用Pearson相关性分析法分析MyD88与TRIF的相关性。方法 采集20例MPD和20例EMPD患者皮损组织石蜡标本并经临床及组织病理学确诊。以10例手术患者切除的良性组织病灶外2 cm并经病理学确认为正常皮肤组织作对照,采用免疫组化法检测MyD88和TRIF表达水平。结果 MPD和EMPD中MyD88和TRIF的表达均明显高于正常皮肤组织,差异均有统计学意义(均P<0.05);MyD88和TRIF的表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。显微镜下可见:Pearson相关性分析显示MyD88和TRIF的表达均无相关性(r分别为-0.114和0.185,P分别为0.632和0.436)。结论 MyD88和TRIF通过不同信号通路在MPD和EMPD的发生发展中发挥重要作用。

双歧杆菌在过敏性哮喘治疗中的作用机制研究进展

过敏性哮喘是一种由多种炎性因子介导的气道慢性炎症,以气道高反应和可逆性呼气气流受限为临床特征。肠道菌群失调可能与过敏性哮喘的发生有关。双歧杆菌是一种肠道有益菌。双歧杆菌可以通过色氨酸代谢途径,促进芳基烃受体(AHR)配体表达,调节辅助性T细胞/调节性T细胞平衡,抑制气道的炎症反应;AHR可通过抑制活性氧簇(ROS)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路,减轻气道炎症反应及黏液分泌,缓解过敏性哮喘的发展。双歧杆菌可促进短链脂肪酸的生成,下调核因子-κB信号通路、抑制转化生长因子/Smads信号通路及上调G蛋白受体41和G蛋白受体43表达,减轻气道炎症、降低气道高反应,缓解过敏性哮喘的发展。双歧杆菌可抑制Toll样受体3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白信号通路,减轻气道炎症及结构重塑,缓解过敏性哮喘的发展。

高强度聚焦超声通过TRIF介导的ERK通路增强乳腺癌的顺铂化疗敏感性

目的探究高强度聚焦超声(HIFU)通过β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)介导的细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路增强乳腺癌顺铂(DDP)化疗敏感性的作用机制。方法依次增加DDP浓度间歇作用的方法诱导乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)/DDP耐药细胞;将MDA-MB-231/DDP、MCF-7/DDP细胞分为control组、HIFU组、HIFU+二甲基亚砜(DMSO)组、HIFU+漆黄素(fisetin)组。CCK-8检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞TRIF蛋白、耐药相关蛋白及ERK通路蛋白表达;体内成瘤实验检测肿瘤生长情况;免疫组化染色法检测肿瘤组织Ki-67的表达。结果与亲本MDA-MB-231及MCF-7细胞相比,在相同浓度DDP处理下MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞活力更高,且半数抑制浓度(IC50)显著增加(P<0.05),成功建立了稳定的DPP耐药细胞系;与control组相比,HIFU组MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、TRIF、p-糖蛋白(p-gp)、多药耐药基因1(MDR1)、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著降低,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平显著增加(P<0.05);与HIFU组相比,HIFU+fisetin组细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、Bcl-2、TRIF、pgp、MDR1、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著增加,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bax表达水平显著降低(P<0.05)。与control组相比,HIFU组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著降低(P<0.05);与HIFU组相比,HIFU+fisetin组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著增加(P<0.05)。结论HIFU通过抑制TRIF表达来抑制其介导的ERK通路,从而增强乳腺癌DDP化疗敏感性。

Rho激酶抑制剂对脑梗死模型大鼠抗炎作用及TLR4/TRIF通路的影响

目的研究Rho激酶抑制剂对脑梗死模型大鼠抗炎作用及Toll样受体4/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TLR4/TRIF)通路的影响。方法选取SPF级SD健康大鼠45只,随机选取其中15只作为空白组;另30只采用线栓法建立脑梗死模型,最终30只大鼠中27只模型建立成功;将其随机分为模型组14只、给药组13只。给药组大鼠腹腔注射Rho激酶抑制剂(法舒地尔)15mg/kg,空白组和模型组腹腔注射等容量生理盐水。评价大鼠神经功能、TNF-α、ICAM-1、IL-1β、TLR4/TRIF通路蛋白水平变化。结果模型组、给药组大鼠NSE、GFAP、TNF-α、ICAM-1、IL-1β水平、TLR4、TRIF、TRAM蛋白表达量高于空白组,BDNF水平低于空白组(P<0.05)。给药组大鼠NSE、GFAP、TNF-α、ICAM-1、IL-1β水平、TLR4、TRIF、TRAM蛋白表达量低于模型组,BDNF水平高于模型组(P<0.05)。结论Rho激酶抑制剂可显著改善脑梗死大鼠神经功能、抑制炎症反应,其机制可能与TLR4/TRIF信号通路相关。

黄芩总黄酮改善哮喘模型小鼠气道炎症及对TLR3/TRIF通路表达的影响

目的探讨黄芩总黄酮对哮喘小鼠气道炎症的改善作用及对Toll样受体3(Toll-likereceptor3,TLR3)/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIRdomain-containing adaptorinducing interferon-beta,TRIF)通路表达的影响。方法随机将50只4~6周龄雌性Balb/c小鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组(地塞米松,1mg/kg)、黄芩总黄酮低剂量组(25mg/kg)、黄芩总黄酮高剂量组(50mg/kg),每组各10只小鼠。除正常对照组外,其余各组构建支气管哮喘(以下简称为哮喘)小鼠模型。苏木精-伊红(hematoxylin-eosinstaining,HE)染色法观察小鼠肺组织病理改变,并根据病理图片分析小鼠气道重塑情况,计算支气管壁面积/内周长(W/Pi)、支气管平滑肌面积/内周长(S/Pi)和平滑肌细胞核数/内周长(N/Pi)值。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorben tassay,ELISA)法检测肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavagefluid,BALF)中白细胞介素6(interleukin6,IL-6)和IL-8水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-timepolymerase chain reaction,qPCR)检测小鼠肺组织中TLR3、TRIFmRNA表达水平。Westernbolt检测小鼠肺组织中TLR3、TRIF蛋白表达水平。结果病理结果显示,正常对照组的支气管腔和肺泡均保持良好的完整性;模型组的小鼠表现出黏膜水肿、炎性细胞浸润(黏膜下层和黏膜层)以及气道壁炎性细胞浸润数量增加,给予黄芩总黄酮后小鼠支气管腔和肺泡炎性细胞浸润减少,且黄芩总黄酮高剂量组炎性细胞数少于黄芩总黄酮低剂量组。与正常对照组相比,模型组W/Pi、S/Pi、N/Pi,IL-6、IL-8,TLR3、TRIFmRNA和蛋白水平,均显著增加(P均<0.05);与模型组相比,黄芩总黄酮低、高剂量组和阳性对照组W/Pi、S/Pi、N/Pi,IL-6、IL-8,TLR3、TRIFmRNA和蛋白水平,均显著降低(P均<0.05);黄芩总黄酮低剂量组W/Pi、S/Pi、N/Pi,IL-6、IL-8,TLR3、TRIFmRNA和蛋白水平,均显著高于黄芩总黄酮高剂量组(P均<0.05);黄芩总黄酮高剂量组与阳性对照组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论黄芩总黄酮可有效改善哮喘模型小鼠的气道炎症,其机制可能与抑制TLR3/TRIF信号通路,降低炎症反应,缓解气道重塑有关。

逍遥散对非酒精性脂肪性肝炎肝郁脾虚证大鼠TLR-4/TRIF信号转导通路的影响

目的：观察逍遥散对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）肝郁脾虚证大鼠肝细胞Toll样受体-4（TLR-4）佃干扰素TIR结构域衔接蛋白（TRIF）信号转导通路活性的影响。方法：选取32只SPF级SD雄性大鼠，随机分为正常组、模型组、逍遥散治疗组和甘氨酸治疗组（n=8）。除正常组大鼠给与基础饲料常规饲养外，其余实验组均按“高糖高脂饲料＋饥饱失常＋慢性束缚应激”法饲养14周以建立NASH肝郁脾虚证大鼠模型，并分别给与生理盐水2mL·kg-·d。灌胃，1g·mL。逍遥散溶液按3．24mL·kg-1·d-1剂量灌胃，2．5g·mL-1“甘氨酸溶液按2mL·kg-1·d-1剂量灌胃，给药4周后处死。大鼠处死前均计算其肝郁脾虚证证侯积分和检测尿D一木糖排泄率，无菌低温条件下提取肝脏及脑组织。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠脑组织内去甲肾上腺素（NE），5羟色胺（5-HT）的含量，苏木素一伊红（HE）染色检测肝细胞脂肪变性及炎细胞浸润程度，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real—timePCR）和蛋白免疫印迹法（Westernblot）技术检测大鼠肝组织TLR-4，TRIF蛋白的表达。结果：与正常组比较，模型大鼠肝郁脾虚证证侯积分明显升高，而尿D．木糖排泄率和脑组织内5-HT，NE含量明显降低，肝组织HE染色可见肝细胞胞质内出现大量脂肪空泡及肝小叶内可见散在的点状坏死和炎细胞浸润，TLR-4和TRIFmRNA表达以及TLR-d和TRIF蛋白表达量明显升高（P〈0．05）；与模型组比较，逍遥散治疗组和甘氨酸治疗组明显降低大鼠肝郁脾虚证证侯积分，明显升高尿D-木糖排泄率和脑组织内5-HT，NE的含量，明显减轻肝细胞脂肪变性程度及炎细胞浸润程度，明显降低TLR-4和TRIFmRNA表达以及TLR-4和TRIF蛋白表达量（P〈0．05）。结论：逍遥散可通过调节TLR-d／TRIF信号转导通路的活性以发挥“疏肝健脾”之功效，从而参与NASH肝郁脾虚证的治疗。

UHPLC-ESI-QE-Orbitrap-MS结合TRIF/p-IκBα/NF-κB/NLRP3信号通路的蛤蚧定喘丸抗炎机制与活性成分探讨

目的探讨蛤蚧定喘丸的抗炎机制,推测蛤蚧定喘丸发挥抗炎功效的关键活性成分。方法依次采用石油醚、无水乙醇、超纯水对蛤蚧定喘丸不同极性的化学成分进行提取;利用2、4、8、16、32、64、128μg·mL^(-1)的醚提物、醇提物、水提物处理RAW264.7细胞,分别通过CellTiter-Lumi(CTL)发光法和钙黄绿素/碘化丙啶(Calcein/PI)染色法检测细胞活力,确定提取物的安全浓度;利用各提取物处理脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型,通过格里斯试剂(Griess)测定一氧化氮(NO)释放量,通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌,筛选具有抗炎活性的提取物。利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-ESI-QE-OrbitrapMS)对有抗炎活性的提取物进行物质分析,推测抗炎活性物质及作用机制,并利用蛋白免疫印迹法(Western blotting)进一步验证其对硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/p-核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路相关蛋白表达的影响。结果醚提物、醇提物、水提物在质量浓度低于64μg·mL-1时均未影响细胞活力。与模型组相比,醇提物在质量浓度大于8μg·mL-1时显著降低NO释放量(P<0.05),醚提物和醇提物在质量浓度高达64μg·mL-1时仍未产生抗炎效果;醇提物显著降低了TNF-α、IL-1β的释放量(P<0.05)。醇提物中共分析出36种主要化学成分。经Western blotting实验验证,与模型组比较,蛤蚧定喘丸醇提物对RAW264.7细胞炎症模型内NLRP3炎症小体、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、p-IκBα的表达均有显著降低作用(P<0.05),而对TXNIP、Toll样受体4(TLR4)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白的影响并不显著。结论蛤蚧定喘丸通过抑制TRIF/p-IκBα/NF-κB/NLRP3信号通路以及iNOS、MCP-1的合成发挥抗炎功效,推测巴马汀、麻黄碱、伪麻黄碱、小檗碱、甘草素、药根碱、小檗红碱为其抗炎活性成分。

石荠苧总黄酮对流感病毒性肺炎小鼠肺组织的保护作用

目的探讨石荠苧总黄酮(TFS)对流感病毒性肺炎小鼠肺组织的保护作用。方法用流感病毒FM1稀释液滴鼻感染的方法诱导构建流感病毒性肺炎小鼠模型,将建立成功的模型小鼠随机分为模型组(n=18)、实验组(n=18)和阳性对照组(n=18),另取18只小鼠予以滴鼻等量0.9%NaCl作为空白组。实验组小鼠予以灌胃TFS(150 mg·kg^-1·d^-1),阳性对照组小鼠予以灌胃利巴韦林(0.02 g·kg^-1·d^-1),空白组与模型组予以灌胃等量0.9%NaCl,连续干预10 d。测定各组小鼠的肺指数;用蛋白免疫印迹法检测肺组织Toll样受体3(TLR3)和β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)蛋白表达情况。结果空白组、模型组、实验组和阳性对照组小鼠肺指数分别为0.67±0.04,1.65±0.31,1.17±0.26,0.89±0.08;TLR3蛋白相对表达量分别为0.15±0.07,0.86±0.14,0.62±0.11,0.31±0.08;TRIF蛋白相对表达量分别为0.29±0.12,0.93±0.07,0.74±0.09,0.42±0.11。模型组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组、阳性对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论TFS可有效抑制流感病毒性肺炎小鼠炎症反应,同时改善肺组织病理性损伤,保护肺组织,其作用机制可能与抑制肺组织TLR3/TRIF通路的信号转导有关。

金振口服液抑制小鼠流感病毒性肺炎的药效及机制研究

目的 研究金振口服液抑制小鼠流感病毒性肺炎的药效及作用机制。方法 将ICR小鼠随机分为对照组、模型组,金振口服液高、中、低剂量(4.4、2.2、1.1 g/kg)组和磷酸奥司他韦胶囊(0.05 g/kg)组。除对照组外,其余各组小鼠滴鼻感染甲型H1N1流感病毒构建小鼠病毒性肺炎模型,测定各组小鼠存活时间和肺指数;苏木素–伊红(HE)染色法观察肺组织病理变化;流式细胞术检测外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞水平;ELISA法检测血清及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-10(IL-10)水平;Western blotting法检测肺组织Toll样受体3(TLR3)、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果 与模型组相比,金振口服液给药组和磷酸奥司他韦胶囊组能显著延长小鼠存活时间,降低肺指数(P<0.05、0.01);减轻肺组织病理损伤;显著上调外周血CD3^(+)、CD4^(+)T淋巴细胞水平及CD4^(+)/CD8^(+)值,下调CD8^(+)T淋巴细胞水平(P<0.05、0.01);明显降低血清及肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平,升高IL-10水平(P<0.05、0.01);显著抑制肺组织TLR3、TRIF及NF-κB蛋白表达(P<0.05、0.01)。结论 金振口服液能够延长病毒性肺炎小鼠存活时间、降低肺指数,减轻肺部炎性损伤,其抑制小鼠流感病毒性肺炎的机制可能与抑制TLR3/TRIF信号传导、调节抗炎–促炎失衡和改善T细胞免疫有关。