EAE大鼠不同时间β-淀粉样前体蛋白与Nogo蛋白受体表达的相关性

目的探讨β-淀粉样前体蛋白(β-APP)及Nogo蛋白受体(NgR)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠病程中的表达变化及相互关系。方法建立EAE动物模型,于致敏第8天、致敏第21天、致敏第35天利用免疫组织化学方法观察脑组织中β-APP及NgR表达,并进行相关性分析。结果 EAE致敏第8天、第21天及第35天组及空白对照组脑组织中β-APP表达灰度值分别为67.94±7.23、29.86±4.02、74.94±8.16和117.25±10.11,四组间比较差异有统计学意义(F=76.1,P<0.05),各实验组β-APP表达灰度值均低于对照组(均P<0.05),致敏第21天组低于致敏第8天组(P=0.008),致敏第35天组高于致敏第21天组(P=0.005),与致敏第8天组差异无统计学意义(P=0.379);相应时间点脑组织中NgR表达灰度值分别为90.28±8.74、76.75±6.59、77.64±9.58及45.33±5.26,四组间比较差异有统计学意义(F=11.56,P<0.05),各实验组NgR表达灰度值均高于对照组(均P<0.05),致敏第35天组低于致敏第8天组(P=0.049),致敏第8天组、致敏第35天组与致敏第21天组比较差异均无统计学意义(P=0.055,P=0.975)。β-APP及NgR表达水平呈负相关(r=-0.207,P<0.05)。结论轴索损伤可能在EAE早期即已出现,并呈动态变化。β-APP与NgR表达在EAE的病理进展过程中呈负相关。

天然产物来源的β位淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1抑制剂的研究进展

目的 对天然产物来源的β位淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1(BACE1,又称β-分泌酶)抑制剂的研究进展进行总结。方法 通过收集文献中报道的具有抑制BACE1活性的天然产物信息,对其BACE1抑制活性进行总结,根据化学结构、来源植物、半抑制浓度等信息对化合物进行分类。结果 根据结构类型将文献中报道的天然产物来源的BACE1抑制剂分为黄酮类、三萜及甾体类、香豆素类、蒽醌类、鞣质多酚类及生物碱类。结论 梳理天然产物来源的BACE1抑制剂的研究进展,为基于该靶点的创新药物研发奠定基础。

γ-分泌酶抑制剂的研发现状

β淀粉样蛋白沉积是阿尔茨海默病的主要病理特征之一 ,β淀粉样蛋白是经β 和γ 分泌酶水解 β淀粉样蛋白前体蛋白而产生 ,故 β 和γ 分泌酶是 β淀粉样蛋白前体蛋白代谢的关键性酶 ,因而成为治疗阿尔茨海默病的很有潜力的靶点。根据 β淀粉样蛋白前体蛋白的代谢、β淀粉样蛋白的形成过程及γ 分泌酶的结构、特性和作用机制 ,分类综述γ 分泌酶抑制剂抑制 β淀粉样蛋白前体蛋白的活性及构效关系。

Aβ蛋白分泌酶抑制剂研究进展

Aβ蛋白是淀粉样前体蛋白的代谢产物 ,它在脑组织中含量的异常增加可能是诱发AD的主要因素。应用分泌酶抑制剂可有效减少Aβ的生成 ,缓解患者症状。本文综述了其中的 β分泌酶抑制剂的研究进展。

联芳基氨基噻嗪类BACE1抑制剂的3D-QSAR分析与分子对接研究

目的:为新型高效联芳基氨基噻嗪类β-淀粉样前体蛋白水解酶1(BACE1)抑制剂的设计合成与新型AD治疗药物研发提供理论基础。方法:选取41个联芳基氨基噻嗪类BACE1抑制剂分子,运用SYBYL-X 2.0软件包,以比较分子场分析法(CoMFA)与比较分子相似性指数分析法(CoMSIA)构建该类衍生化合物的三维定量构效关系(3D-QSAR)模型,并以Surflex-dock分子对接方法分析该类化合物与BACE1的结合模式。结果:以CoMFA法和CoMSIA法构建的3D-QSAR模型的交叉验证系数(q^2)均大于0.5,表明其预测能力良好;所建三维等势图能直观反映不同位置引入取代基对化合物活性的影响。Surflex-dock对接分析显示,联芳基氨基噻嗪类分子与BACE1中的ASP80、ASP276、TYR246等氨基酸残基具有氢键作用。结论:基于联芳基氨基噻嗪类衍生化合物所构建的3D-QSAR模型具有良好的预测能力,可指导该类化合物的结构优化;TYR246可能是联芳基氨基噻嗪类抑制剂化合物分子与BACE1结合的另一潜在活性功能残基。通过3D-QSAR分析与分子对接,可进行新型高效联芳基氨基噻嗪类BACE1抑制剂的设计合成,进而用于研发新型AD治疗药物。

β分泌酶抑制剂对冈田酸诱导PC12细胞淀粉样蛋白前体蛋白代谢的影响

目的探索β分泌酶抑制剂对冈田酸（OA）诱导的PC12细胞淀粉样蛋白前体蛋白（APP）代谢的影响。方法10nmol／L OA作用4h、8h、16h、24h及48h诱导PC12细胞tau磷酸化，加β分泌酶抑制剂干预，MTT法测定细胞抑制率，免疫细胞化学法及Western blot检测全长APP和β-C末端片段（βCTF）。结果10nmol／L OA对PC12细胞的抑制作用呈时间依赖性，β分泌酶抑制剂可明显减轻该作用。OA诱导PC12细胞内全长APP和βCTF含量增加，β分泌酶抑制剂进一步增加细胞内全长APP含量，并减少βCTF含量。结论OA诱导PC12细胞中APP主要经β分泌酶途径代谢，生成具有神经毒性的βCTF。β分泌酶抑制剂通过维持细胞存活和减少βCTF从而减轻OA诱导的神经毒性，但使细胞内APP进一步增多。

淀粉样脑血管病26例尸检标本免疫组化病理研究

目的探讨β淀粉样蛋白(Aβ1-40、Aβ1-42)、β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)以及半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C,CC)在淀粉样脑血管病(cerebral amyloid angiopathy,CAA)脑组织中的表达情况。方法采用免疫组化方法,检测26例CAA患者尸检脑组织中Aβ1-40、Aβ1-42、βAPP和CC的表达情况。结果 Aβ1-40表达广泛见于枕叶、颞叶、顶叶、额叶,Aβ1-42、βAPP表达可见于颞叶、枕叶和顶叶,CC表达仅见于1例顶叶和枕叶;Aβ1-40、Aβ1-42、βAPP染色阳性主要见于中、小血管的血管壁外层,CC染色阳性多见于血管壁外膜,均可见脑血管壁增厚,透明样变性。结论 Aβ1-40是CAA血管壁内沉积淀粉样蛋白的主要成分,在CAA发生机制中起重要作用,并为CAA治疗目标Aβ从血管的靶向清除提供指导意义。

鹿茸多肽对轻度认知功能障碍模型大鼠海马组织中ADAM10、BACE-1表达的影响

目的观察鹿茸多肽对轻度认知功能障碍模型大鼠学习记忆功能及海马组织中解聚素和金属蛋白酶10(A DisintegrinAnd Metalloproteinase 10,ADAM10)、β-淀粉样前体蛋白水解酶1(β-site APP cleavage enzyme-1,BACE-1)表达的影响,探讨鹿茸改善MCI学习记忆障碍的相关作用机制。方法 Wistar大鼠60只随机分为6组,即空白对照组、模型组、阳性对照组、鹿茸多肽高、中、低剂量组,连续给药21 d,末次给药后1 h,腹腔注射氢溴酸东莨菪碱复制MCI大鼠模型。Morris水迷宫观察各组大鼠行为学变化,Elisa法检测各组大鼠海马组织中ADAM10和BACE-1含量,RT-PCR法检测各组大鼠海马组织中m RNA表达水平。结果 Morris水迷宫结果表明,与模型组比较,鹿茸多肽可以延长模型动物的平台穿越次数,增加有效区停留时间(P <0.05或P <0.01)。Elisa检测结果表明,与模型组比较,鹿茸多肽可明显提高模型动物海马组织中的AMAM10、降低BACE-1含量(P <0.05)。RT-PCR检测结果表明,与模型组比较,鹿茸多肽可明显提高模型动物海马组织中的AMAM10、降低BACE-1 mRNA表达水平(P <0.05或P <0.01)。结论鹿茸多肽可以提高氢溴酸东莨菪碱所致的MCI模型大鼠的学习记忆能力,其作用机制与提高海马组织中ADAM10m RNA表达水平,抑制BACE-1 mRNA表达有关。

β-分泌酶与阿尔茨海默病

β-分泌酶(β-site APP cleaving enzyme,BACE)在β位点裂解β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)并产生β淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ),Aβ的聚集是形成阿尔茨海默病(Alzhemier’s disease,AD)患者脑中老年斑的主要原因,引起神经元损伤和认知功能减退,在AD的发病过程中起到中心和共同通道的作用。BACE的抑制剂部分抑制BACE,可使Aβ水平下降,取得明显疗效。进一步研究BACE抑制剂的作用机制,对AD治疗具有良好的前景。

rhKD/APPvar毕赤酵母分泌表达质粒的构建及其重组蛋白的表达和纯化

目的:构建高效分泌表达重组人淀粉样蛋白前体Kunitz型蛋白酶抑制剂结构域变异体(rhKD/APPvar)的毕氏酵母工程菌,建立适合大规模发酵、纯化rhKD/APPvar的工艺。方法:利用已构建的rhKD/APP表达质粒,在其活性中心两侧设计2个酶切位点(ApaⅠ和SacⅡ),实现人KD/APP活性中心RAM与BPTI活性中心KAR的替换,构建rhKD/APPvar表达质粒。将重组质粒转化到酵母菌X-33中,优化rhKD/APPvar表达最佳pH值,使rhKD/APPvar获得高效表达。利用阳离子交换树脂和超滤除盐对重组蛋白进行纯化。结果:酶切鉴定和测序分析显示成功构建了KD/APPvar-pPICZαC重组质粒。经电转化成功地将重组质粒转化至酵母菌X-33中。SDS-PAGE分析,甲醇诱导表达后在相对分子质量约6 700处出现蛋白条带,pH 6.0、甲醇诱导120h蛋白表达水平最高,经纯化获得纯度达95%的重组蛋白。结论:成功构建KD/APPvar-pPICZαC重组质粒,经毕赤酵母表达和纯化获得了rhKD/APPvar蛋白。

γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路对银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞表达的影响

目的探讨γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路对银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞表达的影响.方法将45只健康雄性SPF级BALB/c小鼠按照简单随机抽样法等分为对照组、模型组和干预组,模型组和干预组小鼠背部脱毛区均每日外涂5%咪喹莫特乳膏62.5 mg,干预组还在外用咪喹莫特后立即接受γ分泌酶抑制剂(DAPT)10 mg/kg腹腔注射,每日1次;对照组仅每日外涂等剂量白凡士林.共处理6d,采用银屑病皮损严重程度指数(PASI)评估皮损变化.第7天麻醉小鼠心脏取血,取脾脏及皮肤组织,制备单细胞悬液,比较计算各组小鼠脾指数,苏木精-伊红染色观察皮肤组织病理学改变.流式细胞仪检测脾脏及皮肤组织中γδT17细胞比例,实时定量反转录PCR检测脾细胞悬液中Hes1 mRNA表达水平,酶联免疫吸附实验检测血清中白细胞介素17A(IL-17A)含量.采用单因素方差分析和重复测量的方差分析比较各组间指标差异,Pearson相关分析评价不同指标间的相关性.结果末次处理24h后,肉眼观察显示,干预组小鼠银屑病样皮炎改变明显轻于模型组,PASI显著低于模型组,且表皮增厚及真皮炎细胞浸润程度明显轻于模型组.模型组小鼠脾指数(12.534±1.636)、脾脏(24.659%±4.603%)及皮肤组织γδT17细胞比例(22.127%±5.670%)、脾脏Hes1 mRNA表达水平(4.867±0.543)、血清IL-17A含量[(22.478±2.776)ng/L]均明显高于对照组(P<0.01);干预组上述指标分别为9.449±1.040、14.966%±5.770%、13.631%±5.946%、2.541±0.347、(18.639±1.816)ng/L,均显著低于模型组(P<0.01).模型组及干预组小鼠脾脏γδT17细胞比例与血清IL-17A含量均呈正相关(r值分别为0.56和0.53,均P<0.05),皮损γδT17细胞比例与PASI均呈正相关(r值分别为0.56和0.52,均P<0.05),脾脏Hes1 mRNA表达水平与γδT17细胞比例(r值分别为0.61和0.58)、血清IL-17A含量(r值分别为0.60和0.54)均呈正相关(P<0.05).结论γ分泌酶抑制剂阻断Notch-Hes1信号通路能够明显抑制银屑病样皮炎小鼠γδT17细胞的表达,减轻银屑病样皮炎损害.

阿尔采末病APP分泌酶及其靶向干预研究进展

α、β和γ3种分泌酶是淀粉样前体蛋白(APP)加工及代谢的关键酶,选择性地激活α分泌酶或抑制β和γ分泌酶,将有助于减少β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生,并可能成为治疗AD的有效靶点。该文主要对APP 3种分泌酶活性表达的影响因素及其靶向干预研究的进展做一综述。

BACE抑制剂verubecestat的合成

目的:改进verubecestat的制备工艺。方法:以对甲氧基苯甲醛为起始原料通过10步反应合成了BACE(β-淀粉样前体蛋白水解酶)抑制剂verubecestat(N-{3-[(5R)-2H-1,1-二氧代-2,5-二甲基3-氨基-5,6-二氢-1,2,4-噻二嗪基]-4-氟苯基}-5-氟-2-吡啶甲酰胺)。结果:目标产物经1H-NMR和ESI-MS确认结构正确。结论:改进后的制备工艺反应条件温和,适合于实验室研究的小规模制备。

阿尔茨海默病相关基因研究进展

本文归纳了目前认为与阿尔茨海默病密切相关的遗传因素,包括淀粉样蛋白前体、载脂蛋白E、早老素1和2、组织蛋白D、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C和白介素1基因,这些基因本身的频率或突变在阿尔茨海默病病因上有重要意义。

阿尔茨海默病重要分泌酶BACE1及其抑制剂

阿尔茨海默病（AD）是一种最为普遍的痴呆。其病理特征是神经细胞外不溶性淀粉样蛋白Aβ以及胞内由过磷酸化tau形成的纤维缠结。这种胞外聚合物主要由Aβ4两组成，它是由淀粉样前体蛋白APP依次经β分泌酶（β-secretase）和γ分泌酶（γ～secretase）剪切所产生的。因此，通过抑制此两种酶很有可能能够减少Aβ的产生从而延缓病程。由于γ分泌酶有众多重要的生理功能，被抑制后会产生很多较为严重的副作用，因此β分泌酶的抑制剂可能是对抗AD药物研发的更有效切入点。本文主要对影响BACE1的表达及活性的相关因素和最新研制成功的β分泌酶抑制剂做简要综述。

脱氧鸭嘴花酮碱二聚体的设计合成及生物活性研究

目的设计合成乙酰胆碱酯酶(AChE)双位点抑制剂。方法以天然活性化合物脱氧鸭嘴花酮碱为先导化合物,根据AChE的晶体结构特征,设计合成了22个脱氧鸭嘴花酮碱二聚体,通过1H-NMR、13C-NMR和HRMS谱对目标化合物结构进行了确证,并测试了化合物对AChE和Aβ1-42聚集的抑制活性。结果与结论合成的22个二聚体化合物均未见文献报道,其中19个化合物对AChE的抑制活性明显优于脱氧鸭嘴花酮碱,10个化合物对AChE的抑制活性优于阳性对照他克林,2个化合物对Aβ1-42聚集的抑制活性优于阳性对照姜黄素,特别是化合物9b,对AChE(IC50=8.2 nmol·L-1)和Aβ1-42(IC50=12.7μmol·L-1)聚集的抑制活性分别强于阳性对照多奈哌齐(IC50=17.4 nmol·L-1)和姜黄素(IC50=14.4μmol·L-1),具有深入研究价值。

多奈哌齐治疗阿尔茨海默病对患者血小板α和β分泌酶活性的影响

目的研究胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐对阿尔茨海默病（AD）患者的血小板α和β分泌酶活性的影响。方法选取2007年8月至2010年10月在河南省人民医院神经内科诊治的76例AD患者，随机数字表法分为多奈哌齐治疗组和对照治疗组，每组38例。多奈哌齐治疗组给予多奈哌齐，每晚5mg口服；对照治疗组给予常规改善脑代谢药物。另设本院同期非痴呆疾病组40例，分别给予相应的治疗。12周后分别测定两组AD患者的AD评定量表认知分量表（ADAS-Cog）、日常生活能力评定量表（ADL）；分别测定非痴呆疾病组和两组AD患者血小板中d和母分泌酶的活性，并用Western印迹检测血小板d分泌酶的产物sAPPα的含量。结果多奈哌齐治疗组降低ADAS-Cog评分（5．3±4．4）分，与对照治疗组的（1．74-1．6）分相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；12周后多奈哌齐治组的ADL评分（41±7）分明显低于对照治疗组（48±6）分，差异有统计学意义（P〈0．05）；与治疗前（50±6）分相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。12周后多奈哌齐治疗组的α分泌酶活性（91％±9％）明显高于对照治疗组（64％±8％，P〈0．01），13分泌酶活性（119％±11％）明显低于对照治疗组（178％±17％，P〈0．01）；与治疗前相比差异均有统计学意义（均P〈0．01）。对照治疗组血小板sAPPα含量（26％±8％）明显低于非痴呆疾病组（100％4-12％）（P〈0．001），多奈哌齐治疗组12周sAPPoL含量（64％4-14％）明显高于对照治疗组（P〈0．01）。结论多奈哌齐治疗显著提高了AD患者的认知功能和日常生活能力，表现为降低ADAS-Cog和ADL评分；多奈哌齐治疗提高了AD患者血小板α分泌酶活性并降低了β分泌酶的活性；多奈哌齐对AD患者的认知功能的改善可能与其对血小板分泌酶的活性调节有关。

老年痴呆症与医药

随着人类寿命的延长,老年痴呆症(AD)已成为老年人健康的一大克星,根据世界卫生组织估计,世界范围内65岁以上老年人中,老年痴呆症患者已占5%,美国老年痴呆症是仅次于心血管病,脑血管和恶性肿瘤居第四位死因。一、老年痴呆症的一般概况老年痴呆症是一种慢性神经退行性变化疾病,最常见的是痴呆,临床上特点是进行性失去记忆及智力,这些症状是脑海马区及新皮层区正常神经周围受到破坏的结果。老年痴呆症病人尸检脑皮质萎缩标志老年痴呆症神经病理特点的是病人脑内有淀粉样蛋白斑块及神经纤维缠绕,以及失去突触及神经元。