法舒地尔缓解β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

背景:法舒地尔对阿尔茨海默病小鼠脑内的线粒体动力学有调节作用,并且可以抑制神经炎症,但能否调节线粒体自噬和NLRP3炎症小体进而减轻β-淀粉样蛋白毒性尚不清楚。目的:探究法舒地尔对β-淀粉样蛋白1-42诱导的人源神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y凋亡和线粒体自噬以及NLRP3炎症小体的调节作用。方法:将SH-SY5Y细胞接种于孔板内,细胞贴壁后分3组干预:对照组不加入任何药物,模型组加入20μmol/L β-淀粉样蛋白1-42,法舒地尔组同时加入20μmol/L β-淀粉样蛋白1-42与15 mg/L法舒地尔,干预24 h后,采用MTT法检测细胞活性,TUNEL染色检测细胞凋亡,qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关蛋白表达,免疫荧光染色和Western blot检测线粒体自噬相关蛋白表达,免疫荧光染色和Western blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白表达。结果与结论:(1)与对照组比较,模型组细胞活性降低、凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,法舒地尔组细胞活性升高、凋亡率降低(P<0.05);(2)qRT-PCR和Western blot检测结果显示,与对照组比较,模型组细胞Bax mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,法舒地尔组细胞Bax mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);(3)免疫荧光染色和Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组细胞PINK1、帕金森病蛋白和LC3蛋白表达降低(P<0.05),p62蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,法舒地尔组细胞PINK1、帕金森病蛋白和LC3蛋白表达升高(P<0.05),p62蛋白表达降低(P<0.05);(4)免疫荧光染色和Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1和白细胞介素1β蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,法舒地尔组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1和白细胞介素1β蛋白表达降低(P<0.05);(5)结果表明,法舒地尔可以减轻β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体自噬且抑制NLRP3炎症小体激活有关。

基于阿尔茨海默病β-淀粉样蛋白发病机制探讨典型中药防治概况

阿尔茨海默病(AD)是一种临床表现为学习记忆障碍、认知功能障碍、语言功能障碍的疾病,其发病机制复杂,其中β-淀粉样蛋白(Aβ)学说涵盖了氧化应激、炎症、细胞凋亡等多方面机制。该文基于Aβ机制以及相关信号通路,探讨典型中药及其有效成分预防和治疗AD的概况,以期为研发防治AD的中药提供思路和参考。

当归多糖对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及β-淀粉样蛋白代谢的影响

目的观察当归多糖对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆、海马β-淀粉样蛋白前体(APP)、β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42及血清乙酰胆碱(Ach)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响,探讨其防治AD的作用机制。方法 70只SPF级Wistar大鼠经水迷宫学习记忆能力筛选合格后,随机选取10只大鼠(雌雄各半)为假手术组,其余大鼠以脑立体定位注射Aβ25-35复制AD大鼠模型,以水迷宫学习记忆能力筛选造模成功的50只大鼠随机分为模型组、阳性药组和当归多糖低、中、高剂量组,每组10只。模型组和假手术组大鼠给予生理盐水灌胃,各给药组大鼠给予相应药液灌胃,每日给药体积均为2 m L/100 g,连续28 d。给药25~28 d Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,然后取材检测血清Ach、ChAT、AChE、SOD、MDA及海马APP、Aβ1-42。结果与假手术组比较,模型组大鼠定位航行实验逃避潜伏期明显延长,目标象限滞留时间缩短,空间探索实验首次到达原逃生平台位置潜伏时间延长,穿越原平台位置及目标象限滞留的时间缩短,血清Ach含量与ChAT、SOD活性明显降低,AChE活性及MDA水平明显升高,海马APP、Aβ1-42含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠逃避潜伏期均不同程度缩短,目标象限滞留时间延长,首次到达原逃生平台位置潜伏时间缩短,跨原平台次数增加,血清Ach含量和ChAT、SOD活性升高,AChE活性及MDA水平明降低,海马APP、Aβ1-42含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论当归多糖可能通过改善胆碱能神经递质、提高抗自由基氧化能力及促进Aβ的代谢,改善AD模型大鼠学习记忆能力,对AD有一定的防治作用。

β淀粉样蛋白1-40和氯化铝双干预阿尔茨海默病大鼠模型的建立

背景:目前已建立的各种阿尔茨海默病动物模型均存在一定的局限性。目的:以β淀粉样蛋白1-40和氯化铝双干预的方式,建立一种较为理想而实用的阿尔茨海默病大鼠模型。方法:健康雄性老年SD大鼠,经Morris水迷宫训练和筛选后,随机分为模型组、生理盐水组和对照组。采用单侧侧脑室一次性注射β淀粉样蛋白1-40和腹腔连续4周隔天注射3%氯化铝的方式建立阿尔茨海默病大鼠模型。以Morris水迷宫实验和跳台实验检测模型大鼠的行为学变化。以刚果红和苏木精-伊红染色检测大鼠海马淀粉样蛋白沉积以及病理学改变。结果与结论:与对照组及生理盐水组相比,模型组大鼠水迷宫实验逃避潜伏期明显延长(P<0.05);跳台实验反应时间、基础错误次数和错误次数显著增加(P<0.05),潜伏期明显缩短(P<0.05)。模型组大鼠海马可见淀粉样蛋白物质沉积,细胞形态发生明显的损伤改变且细胞数量减少。以上结果提示,以β淀粉样蛋白1-40和氯化铝双干预的方式能够成功复制出一种比较理想而实用的阿尔茨海默病大鼠模型。

白介素-6、降钙素原和血清淀粉样蛋白A联合检测在脓毒症患者中的应用价值

目的探讨白介素6(IL-6)、降钙素原(PCT)和血清淀粉样蛋白A(SAA)联合检测在脓毒症患者中的应用价值。方法选取脓毒症患者86例为观察组,其中脓毒症性休克32例(休克组),未发生休克患者为普通组(n=45),未发生脓毒症的普通感染患者87例作为对照组,检测患者的IL-6、PCT及SAA水平,采用受试者工作曲线(ROC)分析3项指标,探讨其在脓毒症患者中的应用价值。结果脓毒症组患者的IL-6、PCTSAA水平及APACHEⅡ评分、SOFA评分均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);休克组IL-6,PCT,SAA水平及APACHEⅡ评分、SOFA评分均高于普通组,差异有统计学意义(P<0.05);单用IL-6诊断脓毒症灵敏度为75.3%、特异度为65.7%、AUC值为0.763;单用PCT诊断脓毒症灵敏度为70.6%、特异度为78.2%、AUC值为0.787;单用SAA诊断脓毒症的灵敏度为73.45%、特异度为64.62%、AUC值为0.765;IL-6、PCT及SAA三者联合应用诊断脓毒症灵敏度为91.79%、特异度为96.98%、AUC值为0.931。结论IL-6,PCT,SAA联合检测对于早期诊断脓毒症,观察病情变化,判断预后有一定的运用价值。

补肾益智方对Alzheimer病模型大鼠脑内β-淀粉样前体蛋白的影响

目的 :观察补肾益智方对Alzheimer病 (AD)模型大鼠脑内 β 淀粉样前体蛋白 (β APP)的影响。方法 :以D 半乳糖致亚急性衰老合并Meynert核损毁作为AD大鼠模型 ,用免疫组织化学检测及体视学分析方法观察大鼠脑内β APP的变化。 结果 :补肾益智方能显著降低AD模型大鼠脑内顶叶皮质、海马CA1区、齿状回β APP免疫阳性神经元的细胞数、积分光密度值 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。 结论 :补肾益智方能减少或抑制β APP的过度产生 ,这可能是其减少β淀粉样蛋白 (β AP)沉积 ,改善AD模型大鼠学习记忆的作用机制之一。

跑轮和跑台运动干预模式对AD动物模型脑内β-淀粉样蛋白的影响

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)是一种发生于老年前期、进行性起病的神经退行性疾病。AD的病因学机制非常复杂,大脑皮质和脑边缘系统(主要是海马区)β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积形成老年斑是AD发病的最主要病理因素。分析主动跑轮运动和被动跑台运动干预模式对AD动物模型脑内Aβ的影响。结果显示:主动跑轮和被动跑台运动不同程度地抑制了AD动物模型脑内Aβ的水平,进而改善AD动物的认知功能和病症,对防治AD具有积极效应。

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马区蛋白激酶C和β-淀粉样蛋白表达的影响

目的探讨电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力改善的机制。方法将雄性SD大鼠60只随机分成正常组、模型对照组、模型组、西药组和电针组,每组12只。除正常组、模型对照组外,其余3组侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)制备动物模型,模型对照组以同等剂量注射生理盐水。电针组治疗3个疗程。以Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,用免疫组化法观测大鼠海马区蛋白激酶C(PKC)、β-淀粉样蛋白(Aβ)积分光密度值(IOD)和阳性细胞表达情况。结果电针组大鼠海马区等神经元PKC光密度值、阳性细胞增多,Aβ光密度、阳性细胞数减少,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。结论电针治疗显著改善AD模型大鼠学习记忆能力,其机制可能通过激活PKC减少脑内Aβ沉积。

β-淀粉样蛋白诱导HT22细胞建立阿尔茨海默病细胞模型

目的 探讨β-淀粉样蛋白（Aβ25-35诱导HT22细胞建立阿尔茨海默病（AD）细胞模型。方法 将HT22细胞分为未分化组和分化组,未分化组加入完全培养基培养48 h,分化组为完全培养基贴壁生长24 h后加入分化液（Neurobasal培养基和N2添加剂）培养24 h,Western印迹检测两组细胞ATF6、PERK、IRE1蛋白表达量的变化。不同浓度的Aβ25-35别作用于两组HT22细胞24 h,用MTT测定细胞活力变化。结果ATF6、PERK、IRE1蛋白在未分化组的表达量明显高于分化组。Aβ25-35未分化组细胞虽有损伤作用,但各组间无明显差异,且无剂量依赖关系。Aβ25-35以诱导分化组HT22细胞发生损伤,且呈剂量依赖关系,Aβ25-3520μmol/L、40μmol/L）作用于分化组HT22细胞24 h,细胞存活率分别为66%、60%,AD模型最佳。结论 Aβ25-3520μmol/L）诱导分化型HT22细胞可建立最佳AD细胞模型。

β淀粉样蛋白1～42与D-半乳糖联合作用建立复合阿尔茨海默病样模型

目的探讨β淀粉样蛋白1～42(Aβ1-42)及D-半乳糖(D-gal)联合应用构建复合阿尔茨海默病(AD)样模型的可行性。方法采用44只2月龄雄性SD大鼠,共分4组,即腹腔及侧脑室注射生理盐水的假手术组,腹腔注射D-gal或侧脑室注射Aβ1-42分别建立的D-gal组和Aβ1-42组,腹腔注射D-gal联合侧脑室注射Aβ1-42建立的复合AD模型组。Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,尼氏染色观察神经元数量和形态变化,生物化学方法检测血浆及脑组织匀浆中总抗氧化能力(T-AOC),免疫组织化学方法检测晚期糖基化终产物受体(AGER)在脑组织中的表达。结果与假手术组、Aβ1-42组、D-gal组相比,复合模型组大鼠水迷宫实验的潜伏期延长,认知记忆能力下降;海马和大脑皮质中神经元数量减少,可见胞体缩小、胞膜皱缩、胞核固缩浓染的细胞;血浆和脑组织匀浆中T-AOC下降;大脑皮质、海马、小脑皮质和小脑核AGER阳性表达细胞增多,呈棕褐色深染。结论在应用D-gal建立记忆缺失模型的基础上,联合注射Aβ1-42可建立复合AD样模型,较全面地模拟AD行为学、组织学及生物化学特征。

补肾活血化痰中药复方对D-半乳糖诱发衰老模型大鼠中枢神经递质及β-淀粉样蛋白的影响

目的:研究补肾活血化痰中药对皮质乙酰胆碱酯酶(AchE)活性和β-淀粉样蛋白(-βAP)含量的影响,阐释传统中药复方改善老年性痴呆的作用机制。方法:腹腔注射D-半乳糖合并脑内双侧Meynert基底核注射鹅膏蕈胺酸(IBO)建立AD大鼠模型,用放射免疫技术、免疫组化检测皮质AchE的活性和脑内-βAP蛋白含量。结果:补肾活血化痰中药大剂量组皮质AchE的活性显著较模型组高(P<0.01),而脑内-βAP含量低于模型组(P<0.05)。结论:中药大剂量组通过降低海马-βAP含量(P<0.05),提高AchE活性来恢复记忆能力。

β-淀粉样蛋白对衰老模型大鼠行为及海马SOD、MDA含量的影响

目的 探讨β-淀粉样蛋白 (βAP)和 D-半乳糖 (D- gal)对大鼠学习记忆行为的影响及作用机制。方法 检测各组大鼠学习记忆行为 ,包括开场行为、Y-迷宫分辨学习和一次被动回避反应 ,并测定海马中 SOD活性和 MDA含量。结果 D- gal组、D- gal+βAP组大鼠在新异环境中自发活动和探究行为减少 ,学习记忆减退 ;同时海马 SOD活性降低、MDA含量明显增加 ,与对照组比较有显著性差异 (P<0 .0 5,P<0 .0 1 )。结论 β-AP和 D- gal两者联合可导致大鼠海马内自由基损伤效应加重 。

运动训练对D-半乳糖造阿尔茨海默病模型大鼠海马β位淀粉样蛋白42和裂解酶1的影响

目的:探讨游泳+跑台的混合运动训练对D-半乳糖所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内β位淀粉样蛋白42和裂解酶1(Aβ42、BACE1)的影响。方法:将16只雄性SD大鼠随机分为安静注射组(C组)和运动注射组(T组),所有大鼠连续8周腹腔注射D-gal造阿尔茨海默病模型大鼠,同时,T组大鼠连续进行8周的游泳和跑台(均每周3次,交替进行)相结合的混合运动训练。运用WesternBlot法检测大鼠海马Aβ42蛋白表达量,运用RT-PCR法检测大鼠海马BACE1mRNA和IGF-1mRNA的表达量。结果:①与C组相比,T组大鼠海马内Aβ42蛋白表达量显著减少,具有极显著性差异(P<0.01);②C组比T组大鼠海马内BACE1mRNA表达量多,具有显著性差异(P<0.05);③与C组相比,T组大鼠海马内胰岛素源生长因子(IGF)-1mRNA表达增加,具有极显著性差异(P<0.01)。结论:游泳和跑步混合运动训练能延缓AD的发展进程,这可能与运动训练上调了AD大鼠海马内IGF-1mRNA表达有关。

呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的探讨呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因表达的影响。方法22月龄SD大鼠采用海人酸破坏脑基底核法造成学习和记忆功能障碍的痴呆动物模型。造模后的大鼠随机分为痴呆模型组、呆聪液(低、中、高剂量)组,同时设正常对照组,每组10只。呆聪液低、中、高剂量组每日呆聪液灌胃(低5g/kg、中10g/kg、高20g/kg),痴呆模型组和正常对照组每天用生理盐水(10ml/kg)灌胃,共1个月。通过水迷宫法和反转录聚合酶链反应观察呆聪液对痴呆模型大鼠学习记忆能力和脑内β-APP基因表达的影响。结果老龄痴呆模型大鼠学习记忆能力下降,脑内β-APP基因表达增强。呆聪液高、中、低剂量组能明显提高学习记忆能力,降低脑内β-APPmRNA含量,并有一定的量效关系,与痴呆模型组比较差异有显著性(P<0.05)。结论呆聪液能改善老龄痴呆大鼠的学习和记忆功能,下调β-APP基因的表达。

PPAR-γ调控脑胆固醇代谢清除β-淀粉样蛋白改善阿尔茨海默病的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor gamma,PPAR-γ)是配体激活的核转录因子超家族成员之一。活化的PPAR-γ参与调节许多中枢神经系统(central nervous system,CNS)事件,通过诱导或抑制一系列基因、蛋白等途径参与脑胆固醇代谢,从而抑制β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)沉积,在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)中发挥着重要的神经保护作用,改善AD的记忆和认知能力,是AD的一个有潜力的靶点。旨在恢复脑胆固醇稳态的药物开发可能是抵消AD的潜在策略。该文通过分析PPAR-γ的分布、结构,聚焦PPAR-γ介导的脑胆固醇代谢与AD的生物学相关性,阐述了PPAR-γ对关键蛋白、基因及其相应分子的机制调控,为AD的治疗提供了新的参考。

β-淀粉样蛋白对衰老模型大鼠脑海马神经元的毒害作用

研究 β 淀粉样蛋白 (β AP)对衰老大鼠海马神经元的影响。采用D 半乳糖 (D gal)建立衰老动物模型 ,海马内微注射 β AP ,检测各组大鼠Y 迷宫分辨学习和一次性被动回避反应的变化 ,并测定海马超氧化物歧化酶 (SOD)活性、丙二醛 (MDA)含量、Na+ K+ ATP酶活性和海马线粒体膜流动性。可见 β AP加上D gal组大鼠学习记忆能力 ,与只用 β AP或D gal组比较有显著性差异 ;与 β AP或D gal组比较Na+ K+ ATP酶活性显著降低、MDA含量显著增加、海马线粒体膜流动性显著降低。结果表明 ,β AP与D gal联合使用可导致衰老大鼠脑海马自由基损伤加重 ,学习记忆能力显著减弱 ,

β-淀粉样蛋白致大鼠Alzheimer病模型的研究

目的 :模拟人类Alzheimer病 (AD)的大鼠病理模型 ,观察其学习记忆及病理性改变。方法 :大鼠双侧海马微量注射聚合态Aβ1 40 制备AD动物模型 ,Y 型迷宫测定大鼠学习记忆能力 ,HE染色、刚果红染色和银染检测病理变化。结果 :海马内注射Aβ1 40 可引起大鼠学习记忆能力下降 ,注射区Aβ沉积 ,神经元丢失及胶质细胞增生 ,神经原纤维缠结。结论 :Aβ1 40 海马内注射能较好的模拟AD的学习记忆障碍、神经元损伤等行为学和病理学等方面的特征 ,作为AD研究较好的动物模型。

β淀粉样蛋白25-35对BV2细胞TREM2/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨不同浓度β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)对小胶质细胞髓样细胞触发受体2(TREM2)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将BV2细胞随机分为5组,分别加入0、5、10、20、40μmol/L的Aβ25-35,作用24、48 h,镜下观察细胞形态,CCK-8法测定细胞活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定NF-κBp65、TREM2 mRNA表达。结果:显微镜下观察干预48 h后Aβ25-35≥10μmol/L细胞成片死亡,干预24 h后,CCK-8检测显示,不同浓度Aβ25-35干预BV2细胞的存活率均>70%,ELISA和RT-PCR检测显示,Aβ25-3520μmol/L和40μmol/L组促炎因子TNF-α和TREM2 mRNA的表达均明显升高,Aβ25-3520μmol/L的NF-κB p65 mRNA表达明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Aβ25-35浓度20μmol/L作用24 h,能够激活小胶质细胞发生炎症反应,可能与TREM2/NF-κB信号通路的激活有关。

β-淀粉样蛋白致大鼠衰老模型及单胺类递质改变

目的 :建立β-淀粉样蛋白 (β- AP)致大鼠衰老模型 ,并观察大鼠学习、记忆功能及单胺类递质的改变。方法 :2 0只 SD大鼠被随机分为β- AP组 (10只 )和照组 (10只 )。在β- AP组大鼠双侧海马内各注射β- AP10μg,对照组注射等量生理盐水。 1周后用三等分迷宫测大鼠的学习、记忆功能 ;进行旷场实验观察其探究活动能力和紧张度 ;随后处死大鼠 ,检测海马内单胺类神经递质的浓度。结果 :β- AP组的学习、记忆功能和探究活动与对照组相比明显降低 (P<0 .0 5或 P<0 .0 0 1)。海马内 3-甲基 4-羟基苯乙醇 (MHPG)、 5羟吲哚乙酸 (5 - HIAA)水平比照组明显下降 (均 P<0 .0 1) ,但高香草酸 (HVA)水平无明显下降。结论 :β- AP致大鼠衰老模型是一种较成功的 Alzheimer病 (AD)

血清白介素-12p70、淀粉样蛋白A水平变化与慢性阻塞性肺疾病患者并发冠心病的关系

目的分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清白介素-12p70(IL-12p70)、淀粉样蛋白A(SAA)水平变化及其与并发冠心病(CHD)的关系。方法选取2019年5月—2023年5月山西医科大学附属汾阳医院呼吸与危重症医学科诊治COPD患者150例,其中并发CHD患者58例纳入COPD-CHD组,未并发CHD患者92例纳入COPD组。检测血清IL-12p70、SAA水平;比较不同血清IL-12p70、SAA水平COPD患者并发CHD发生率;Logistic回归模型分析血清IL-12p70、SAA与COPD患者并发CHD的独立关系,受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清IL-12p70、SAA预测COPD患者并发CHD的价值。结果COPD-CHD组吸烟史比例、糖尿病比例、纤维蛋白原及血清IL-12p70、SAA水平高于COPD组[χ^(2)(t)/P=4.696/0.030、4.801/0.029、2.629/0.010、6.111/<0.001、5.744/<0.001];随着血清IL-12p70、SAA水平升高,COPD患者并发CHD发生率呈升高趋势(χ^(2)/P=27.864/<0.001、31.346/<0.001);血清IL-12p70、SAA升高均是COPD患者并发CHD的独立危险因素[OR(95%CI)=3.350(2.002~5.607),3.658(2.268~5.899)];ROC曲线分析显示,血清IL-12p70、SAA联合预测COPD患者并发CHD的AUC为0.835,优于各自单独预测效能(Z/P=2.180/0.029,2.244/0.025)。结论COPD患者血清IL-12p70、SAA水平升高,尤其是并发CHD时升高更显著,二者均为COPD患者并发CHD的独立危险因素,临床可通过检测两指标水平判断COPD患者并发CHD风险。