关于高效液相色谱-串联质谱法测定牛肉中β-激动剂类药物残留的研究

本研究采用高效液相色谱-串联质谱法,对牛肉中的3种β-受体激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗进行检测,重点开展酶解提取与净化优化实验。结果显示,该方法具备良好的线性关系与较高的加标回收率,可检测牛肉中的“瘦肉精”药剂残留,能够为相关人员开展肉制品中β-受体激动剂的检测提供参考。

β-激动剂多组分残留的酶免疫分析方法

制备并筛选能和多种β-激动剂反应的簇特异性抗体,建立能同时检测多种药物的酶免疫分析方法,为研制多组分残留检测试剂盒奠定基础。选取沙丁胺醇、克伦特罗和多巴胺3种代表性β-受体激动剂,分别与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联作为免疫抗原,与牛血清白蛋白(BSA)偶联作为检测抗原,免疫家兔获取抗血清,ELISA检测抗血清交叉反应率,筛选交叉反应性最大的抗体作为簇特异性抗体,用于建立ELISA方法并制作标准曲线。经测定获得的3种抗血清,其中的抗沙丁胺醇抗血清除对沙丁胺醇具有100%的反应之外,还对克伦特罗具有128%的交叉反应性,具有部分簇特异性。用沙丁胺醇抗血清建立了同时适用于沙丁胺醇和克伦特罗的ELISA分析方法,为多组分残留检测试剂盒的研制奠定了基础。

β-激动剂对鸭Ca、Mn、Zn代谢的影响

用芬茗和克仑特罗饲喂肉鸭２１ｄ，二者对鸭生产性能的影响基本一致。此时，鸭血清碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性和肌浆Ｃａ含量明显增高，而血清和肌浆Ｍｎ含量明显减少。在相同日粮条件下，芬茗处理鸭肌浆Ｃａ、Ｍｎ、Ｚｎ含量均高于克仑特罗处理者（Ｃａ、Ｍｎ达到Ｐ＜０．０５）。克仑特罗处理后引起鸭体内Ｍｎ、Ｚｎ元素丢失增加，这可能是畜禽的后肢乏力、跛行和蹄裂的原因之一。

β-激动剂的作用机理及其在动物组织内的放射性残留

作者简要介绍了β-激动剂 (β- agonist)的药理、毒性及作用机理 ,综述了其在动物组织内的放射性残留 ,指出今后研究的重点方向 ,为我国β-激动剂的药物残留监控提供参考。

生物材料中β-激动剂的测定方法综述

β-激动剂是能与细胞膜上β受体结合、直接产生生理效应(如增加心率)的天然儿茶酚胺的人工衍生物,作用机理类似于肾上腺素和去甲肾上腺素.它们是自主神经系统作用过程的重要神经递质,而自主神经系统控制着许多器官(心血管,胃肠道)和代谢过程.欲使自主神经系统起作用,需要能量,要求心率和通过冠状血管和骨骼肌的血液流速加快.这些反应是通过儿茶酚胺、肾上腺素和去甲肾上腺素介导的,图1给出了β-激动剂的结构通式和部分化合物的组成.

β-激动剂的作用机理及其在畜禽体内的组织残留

简要介绍了β-激动剂的作用机理,综述了其在猪、牛、鸡、羊等畜禽体内的组织残留,为我国β-激动剂的药物残留监控提供参考。

β-激动剂对体外培养的瘤胃微生物活力的影响

β-激动剂在提高反刍动物饲料转化率和胴体瘦肉率等方面比对其它动物的作用更明显。为探讨其作用是否与瘤胃代谢有关 ,本实验研究了 β-激动剂对瘤胃微生物活力的影响。实验选用了3种 β-激动剂———盐酸肾上腺素、克伦特罗(Clenbuterol)和塞曼特罗(Cimaterol) ,各设5个不同剂量(0.125 ,0.250 ,0.500 ,1.000 ,2.000mg/kg) ,研究不同剂量的β-激动剂对体外培养的瘤胃微生物产气量、微生物蛋白含量、底物消失率的影响。结果表明 :产气量、微生物蛋白含量和底物消失率与 β-激动剂之间存在着显著的量效关系。盐酸肾上腺素在0.5mg/kg 时微生物蛋白浓度最高(0.0917mg/ml) ,底物消失率最大(37.79 %) ,气体累计产量最大(269.06ml)。克伦特罗在0.5mg/kg 时微生物蛋白浓度最高(0.1167mg/ml),底物消失率最大(39.63 %) ,气体累计产量最大(269.38ml)。塞曼特罗在0.5mg/kg时 ,微生物蛋白浓度最高(0.1125mg/ml) ,1mg/kg 时气体累计产量最大(265.39ml)。3种 β-激动剂都显著促进了瘤胃微生物体外培养的活力(对照组微生物蛋白浓度为0.087mg/ml,底物消失率31.53 %,气体累计产量209.3ml) ,其中克伦特罗的作用最显著。本实验提示瘤胃微生物细胞本身可能存在 β-受体。

高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉和猪肝中22种β-激动剂

目的：建立一种用高效液相色谱-串联质谱法检测猪肉和猪肝中22种β-激动剂(特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗、喷布特罗、福莫特罗、异丙喘宁、苯乙醇胺A、沙美特罗、马喷特罗、马布特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、班布特罗、溴代克伦特罗、克仑潘特、赛布特罗和卡布特罗)的方法。方法样品粉碎后,在pH 5.2的乙酸铵缓冲液中,用β-盐酸葡萄糖醛苷酶-芳基硫酸酯酶水解,水解液经正己烷除脂后,用阳离子交换柱净化,再浓缩复溶后用高效液相色谱-串联质谱测定。采用内标法对克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、西马特罗、马布特罗、马喷特罗、赛布特罗和沙美特罗进行定量,其余化合物采用外标法进行定量。结果目标化合物的回收率为80%~125%,线性范围为0.5~100μg/kg,相关系数均大于0.992。方法的定量限均不大于0.5μg/kg。结论本方法灵敏、快速、简便,适合于同时定量检测猪肉和猪肝中多种β-激动剂。

生物材料中β-激动剂的测定方法综述

近年来,食品动物生产使用违禁药物“瘦肉精”——盐酸克仑特罗已受到了社会各个层面的广泛关注,实际上这并不是中国所特有的问题,早在上个世纪80年代末,欧洲和美国就陆续宣布禁用,但在90年代初却在欧洲许多国家都出现了多次严重的中毒事件,事后虽然它一直是欧盟和美国的监控重点,但至今使用仍未绝迹,还演绎出10多种类似作用的β-激动剂类药物。经验提示我们,食品安全是一个系统工程,它既需要政府明确的法令法规,又要有有效的监测机制和手段,特别是监测手段和方法起着十分重要的作用。一个典型的实例就是香港,香港1998年5月发生著名的“β-兴奋剂事件”。同年8月农业、渔业保护部颁布GC-MS定量检测克仑特罗残留量方法,至2000年1月19日克仑特罗检出率已从12.5％降至1.1％。为配合我国违禁药物检测标准的制定,我们选译了1996年“Analyst”上由Damien Boyd和Michael O’Keeflea(爱尔兰国家食品中心)及Malcolm R.Smyth(爱尔兰都伯林大学化学科学学院)撰写的《生物材料中β-激动剂的测定方法综述》一文译,文章作者从β-激动剂的作用机制、结构特点和取样部位,到该类药物的分析方法作了全面的详细阐述,特别是对分析过程的几个关键步骤作了权威性综述与评论,其中包括了许多近年发展起来的新技术和新方法。

生物材料中β-激动剂的测定方法综述

2.样品提取与净化 样品预处理的目的是让其变成易于β-激动剂提取的形态。样品经粗提后,还要经过不同类型的净化处理,如常规的液液分配、固相萃取(SPE)、免疫亲和色谱和基质固相分散(MSPD)等。有些情况下可将这些方法联合应用,以得到较高纯度的提取液。

酶联免疫法检测乳与乳制品中的β-激动剂

β-受体激动剂类药物在动物饲养过程中具有促进动物生长和动物营养再分配的功效，但其易住动物体内及可食性组织中残留，影响动物源性食品安全并危害人体健康。β-受体激动削类药物在我国和欧盟等旧家和地区已被禁止用作动物促生长剂β-激动剂，本方法使用β-激动剂EIA微孔板禽12个板条，每个板条8孔。用羊抗免抗体IgG包被。特异性抗体（兔抗沙丁胺醇和兔抗克伦特罗）、辣根过氧化物酶标记的沙丁胺醇（酶结合物）和沙丁胺醇标准品或样品被加入到微孔后，经过1h孵育，特异性抗体被牢固地结合在板条上的羊抗免抗体IgG上，与此同时，游离的β-激动剂（存在于标准溶液或样品中）和酶结合物相互竞争与特异性抗体的结合位点结合（即竞争性酶联免疫检测）。然后在洗涤过程中除去未结合的酶结合物试剂，加入色原底物（四甲基联苯胺TMB），结合的酶结合物将无色的咬物转化为蓝色的产物。滴加终止液（硫酸）终止显色反应，颜色由蓝色变为黄色，在450nm波长下检测吸光度，吸光度值与样品中β-激动剂浓度成反比。本方法为半定量检测，乳及乳制品中β-激动剂灵敏度是0．06ng／mL（ppb），本方法为快速检测方法，检测结果超出标准，必要时，需用国家标准中规定的仲裁方法进行验证。

超高效液相色谱-串联质谱测定动物肌肉组织中32种β-激动剂、β-阻滞剂和糖肽类抗生素药物残留

建立了同时测定动物肌肉组织中27种β-激动剂、3种β-阻滞剂和2种糖肽类抗生素的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）方法。样品经酶解、蛋白沉淀后,以乙酸乙酯-异丙醇（6∶4,V/V）提取,StarataX-C固相萃取净化,BEH C18色谱柱分离,乙腈-0.1%甲酸梯度洗脱,串联质谱ESI＋电离,多反应监测模式检测,外标法定量。结果表明,32种目标物在线性范围内相关性良好（R2〉0.995）,多巴胺、瑞普特罗、万古霉素和去甲万古霉素的方法检出限为5μg/kg,其它目标物的检出限为3μg/kg;平均加标回收率为83.6%~103%,相对标准偏差（n=6）为3.9%~10.4%,日间精密度为4.5%~9.8%。结果表明,本方法准确、灵敏,适用于动物肌肉组织中β-激动剂、β-阻滞剂,以及糖肽类抗生素的高通量测定。

3种市售β-激动剂类药物检测试剂盒的质量评价

试验通过对50%抑制质量浓度、板内及板间变异系数及回收率等参数考察,对不同β-激动剂类试剂盒进行质量评价。

离子液体分散萃取技术在β-激动剂检测中的应用研究

将离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐（[BMIM儿PF6]）作为萃取试剂并建立离子液体分散液一液萃取方法，代替常规的固相萃取过程。对动物源性制品中沙丁胺醇进行萃取，净化。并配合高效液相色谱，荧光检测器进行检测。对动物源性制品中提取的样品前处理条件为：以盐酸溶液＋氯化钠溶液＋甲醇为样品提取液，离子液体为萃取，净化试剂。采用分散液一液萃取。结果显示离子液体对沙丁胺醇的富集效果良好，药物添加回收率为92．4％～95．8％，方法稳定性强，RSD=1％。灵敏度高，方法栓出限为Ing／g。

LC-MS/MS检测动物源性食品中β-激动剂类是否需要酶解

本实验对β-激动剂是否需要酶解进行了实验说明,结果表明克伦特罗和沙丁胺醇不需要酶解就能被提取出,而莱克多巴胺在不酶解时提取效率低。本实验对酶解时间和酶解温度进行了优化,在40℃下酶解2h时,三种瘦肉精的回收率和精密度均能满足实验要求,提高了检验效率。

用酶联免疫试剂盒检测猪肉中的β-激动剂类药物

β-激动剂类药物,又名β-兴奋剂类药物,俗称瘦肉精,因具有吸收快的特性,可提高胴体瘦肉率,被广泛用于饲料中。人食用含有“瘦肉精”的肉或内脏,15~20min起作用且维持时间持久,会造成群体性的恶性食物中毒,严重的可致人死亡。因此,国家规定通过酶联免疫法检测猪肉中β-激动剂类药物为不得检出。本文用酶联免疫试剂盒检测猪肉中β-激动剂类药物的含量,其原理是待测样品中的β-激动剂类药物残留与微孔包被的抗原共同竞争特异性抗体,当样品中β-激动剂类药物含量少时,更多的抗体就会与酶标板微孔上的抗原结合而被固定在酶标板上,通过酶催化底物显色反应,颜色为深蓝色;样品中β-激动剂类药物含量多时,颜色为浅蓝色。

β-激动剂Clenbuterol微量添加对生长猪育肥的影响

选择体重约40 kg 的健康三元杂交猪21 头, 随机分为试Ⅰ、试Ⅱ和对照3 个组进行对比育肥试验, 整个试验除两个试验组饲料微量添加Clenbuterol(试Ⅰ:0.5 m g/kg; 试Ⅱ:1.0 m g/kg)外,饲料配方、营养水平、饲养管理条件完全相同。试验期97 d 体重约100 kg 时屠宰测定结果表明:饲料微量添加Clenbuterol能有效提高猪瘦肉率,试Ⅰ、试Ⅱ分别比对照组瘦肉率(53.80% )提高3.22(P< 0.05)和5.99(P< 0.01)个百分点,降低脂肪1.25 (P> 0.05)和4.61(P< 0.05)个百分点,对日增重、饲料利用率有一定效应,但不显著,对肉质未发现不良影响。

药物安全性监察：04091 β-激动剂增加慢性心衰恶化的风险

据美国研究者报道：服用较高剂量的β-肾上腺素能受体激动剂(Ⅰ)可能与有慢性心衰史的患者因慢性心衰而住院治疗的风险增高相关。

酸碱度对酶联免疫法检测牛奶中β-激动剂含量的影响

对牛奶样品在不同pH值时，使用酶联免疫法进行检测，根据检测结果分析不同酸碱环境对测定结果的影响，本论文利用荷兰EP公司β-激动剂酶联免疫试剂盒对不同pH值的牛奶进行研究分析，主要研究pH值区间为6．4-7．5之间的结果变化趋势，研究表明在pH值为6．8～7．2之间结果比较稳定，样品pH值过高或过低都将导致测定结果偏高。

β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法研究进展

开展动物性食品中β-受体激动剂监测,对保障食品安全具有重要意义。免疫分析技术操作快速、灵敏度高、检测成本低,被广泛用于大批量畜禽产品的快速筛查。抗体特性是免疫检测的核心,而人工抗原合成的质量直接影响特异性抗体性能。本文主要综述了碳二亚胺法、活泼酯法、混合酸酐法、重氮化法、戊二醛法等β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法,以及紫外光谱法、核磁共振法等人工抗原鉴定方法,以期为免疫分析等相关工作研究提供参考。