热带念珠菌β-葡聚糖合成酶KRE9基因原核表达及其比活力测定

【目的】原核表达热带念珠菌(Candida tropicalis MYA-3404)β-葡聚糖合成酶(KRE9),并进行酶比活力测定,为研究其结构和生物学功能提供参考。【方法】提取热带念珠菌DNA,PCR扩增KRE9基因,构建其原核表达载体pET28a-KRE9后转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达及组氨酸(His)标签纯化树脂亲和柱纯化获得融合蛋白KRE9,并利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)显色法测定其比活力。【结果】克隆获得的KRE9基因全长816 bp,编码271个氨基酸,与参考基因序列(GenBank登录号XM_002547984)的相似性高达99.75%。将其原核表达载体pET28a-KRE9转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过诱导表达及纯化获得重组蛋白KRE9,经SDS-PAGE检测,发现其纯度较高,大小约35 k D。Western blotting鉴定结果显示,重组蛋白KRE9能与抗His抗体发生特异性结合。重组蛋白KRE9比活力为9.169×10~4U/mg。【结论】重组蛋白KRE9具有良好的特异性和较高β-葡聚糖合成酶活性,可用于其结构和生物学功能研究。

燕麦β-葡聚糖的合成与积累

燕麦β-葡聚糖具有明显的保健功效,这方面的研究已引起国内外越来越多科学家的关注。燕麦β-葡聚糖具有-β(1,3)(1,4)两种糖苷键,而且排列有序,主要分布于籽粒糊粉层,通常与其它物质结合存在。燕麦β-葡聚糖是在高尔基体中合成的,但β-葡聚糖的合成过程目前还不清楚,β-葡聚糖合成酶(或复合体)可能是合成过程的关键酶。除遗传因素外,水分供应、总辐射、矿质营养、籽粒成熟期温度等环境因素均对β-葡聚糖含量有显著影响。

新颖β-1,3-葡聚糖合成酶抑制剂类抗真菌抗生素

本文概述了β-1,3-葡聚糖合成酶抑制剂———一类新抗真菌抗生素的研究进展,详细介绍了其中的FR901469及其结构优化衍生物的体内外抗菌活性和溶血活性,同时叙述了FR901469的来源、理化特性、构效关系、抗菌活性、作用机制、药代动力学和临床研究进展。

玫瑰β-1,3-葡聚糖合成酶基因(RrCalS)克隆与生物信息学分析

为了探明胼胝质对玫瑰授粉亲和性的影响,本研究以‘唐红’玫瑰花柱为试材,采用RT-PCR和RACE方法获得了玫瑰β-1,3-葡聚糖合成酶基因的cDNA全长,命名为RrCalS。该基因全长5742 bp,开放阅读框5295 bp,编码1764个氨基酸。推导编码蛋白的分子量为204.7kD, PI值为9.00,在164-265位具有pfam14288结构域,在869-1642位具有pfam02364保守结构域,属于葡聚糖合成酶超家族;该蛋白属于疏水性、非分泌型蛋白,具有16个跨膜结构域,含有32个Ser磷酸化位点、21个Thr磷酸化位点、12个Tyr磷酸化位点;该蛋白的α-螺旋占49.49%,无规则卷曲占22.68%,β-转角占7.94%;该蛋白与Fragaria vesca等8种植物的Cals氨基酸序列同源性达73%以上,且它们的系统进化关系与传统分类结果一致。本研究为进一步深入研究玫瑰授粉不亲和机理,提高玫瑰育种理论和技术水平奠定了基础。

酵母杀手毒素的作用机制及应用研究进展

杀手毒素的作用机制与抑制酵母细胞壁 β 葡聚糖合成有关。甘露糖蛋白可能是HM 1的受体之一 ,其抗性的产生是N 糖基化减少所致。HM 1是 88个氨基酸组成的亲水蛋白质 ,C 末端 82和 86位精氨酸对其杀手活性至关重要。

微生物来源的抗真菌抗生素研究进展

新的微生物来源的抗真菌抗生素不断涌现。本文就近 2年来研究及开发或进行临床试验的化合物 ,依据它们作用的靶向部位不同 ,按真菌细胞膜、细胞壁以及蛋白质合成

抗真菌药物研究进展

本文概述了抗真菌药物的现状和近年来剂型、结构改造和筛选等方面的研究进展,着重介绍了-β1,3-D-葡聚糖合成酶抑制剂和抗真菌靶位的新进展,并对抗真菌药物研究开发中存在的问题和发展方向进行了探讨。

地锦草提取物对红色毛癣菌酶活性的影响

目的研究地锦草提取物对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的影响,探讨其抗真菌作用机制。方法药物干预红色毛癣菌后分离菌体,按试剂盒要求处理样品,利用酶联免疫法和荧光分光光度法,研究地锦草提取物对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶活性的作用。结果地锦草提取物256μg.m l-1时,可显著降低红色毛癣菌中角鲨烯环氧化酶的活性(P<0.01);不同浓度的地锦草提取物,均可降低红色毛癣菌β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的活性(P<0.01)。结论地锦草提取物抗真菌机制可能与抑制角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的活性有关。

微生物来源的抗真菌药物

近几年来 ,新的微生物来源的抗真菌药物不断涌现。一些抗真菌抗生素经过制剂加工后 ,毒性显著降低 ,而一些新化合物则有较强的抗真菌活性。依据其作用靶向部位的不同 ,微生物来源的抗真菌药物可分为三类 :真菌细胞膜抑制剂、细胞壁抑制剂以及蛋白质合成抑制剂。

香鳞毛蕨提取物对红色毛癣菌的抑制作用研究

目的:研究香鳞毛蕨醇提取物对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的抑制作用,初步探讨其抗真菌作用机制。方法采用 ELISA测定角鲨烯环氧化酶活性,还原糖法测定β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶活性。结果香鳞毛蕨提取物不同浓度组均能降低红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶的活性,差异有统计学意义(P<0.05),随香鳞毛蕨提取物浓度增加,红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶的活性逐渐降低,香鳞毛蕨提取物中浓度组和高浓度组能降低β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶活性,差异有统计学意义(P=0.002,P=0.000)。结论香鳞毛蕨提取物抗真菌作用机制可能和角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶活性受到抑制有关。

脂肽类抗真菌新药及其结构改造

新型脂肽类抗真菌药物棘白菌素类似物是-β1,3-D-葡聚糖合成酶的非竞争性抑制剂,主要作用于念珠菌属和曲霉菌属,不良反应较少,具有临床应用前景。通过对该类化合物有关结构改造研究及上市产品的介绍,提供药物研发的一种视角和思路。