白念珠菌β-葡萄糖苷酶2的原核细胞表达、鉴定及免疫反应性

目的构建白念珠菌β-葡萄糖苷酶2(BGL2)的原核细胞表达质粒,诱导其表达后加以鉴定,并初步判定重组蛋白质的免疫反应性。方法 PCR法获取白念珠菌SC5314的bgl2基因,插入原核细胞表达载体pET30a中,以重组质粒转染感受态细胞大肠埃希菌(E.coli)BL21,经IPTG诱导表达后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测蛋白质的表达情况,梯度透析法对包涵体蛋白质复性,用抗His标签单克隆抗体鉴定。用临床侵袭性念珠菌病(IC)患者血清判定重组蛋白质的免疫反应性。结果成功构建原核细胞表达质粒pET30a-bgl2,诱导后的重组蛋白质以包涵体形式表达,经梯度透析复性成功。重组蛋白质能被抗His标签抗体识别,并与IC患者血清有良好的反应性。结论用原核细胞表达体系成功表达了白念珠菌BGL2,该蛋白质具有良好的免疫反应性,为进一步研究其在IC诊断中的作用打下基础。

用系统性念珠菌感染小鼠模型评价白念珠菌蛋白Eno1、Bgl2、Pgk1的免疫反应性

目的用系统性念珠菌感染小鼠模型评价白念珠菌蛋白烯醇化酶1（Eno1）、β-葡萄糖苷酶2（Bgl2）、磷酸甘油激酶1（Pgk1）的免疫反应性。方法腹腔注射环磷酰胺致小鼠免疫力低下后,再腹腔注射白念珠菌SC5314以制备系统性念珠菌感染小鼠模型;用ELISA法和western blot法分析重组Eno1、Bgl2和Pgk1蛋白与模型小鼠血清抗体的免疫反应性。结果建模小鼠肠系膜边缘有米黄色细小颗粒,腹腔中有菌丝样生长的念珠菌,肾脏中可检测到念珠菌生长。小鼠感染白念珠菌6-8 d后出现抗Eno1、抗Bgl2和抗Pgk1的Ig G类抗体,效价峰值出现在感染后第20-24天。抗Eno1抗体效价最高,其次为抗Pgk1,抗Bgl2最低。Eno1与小鼠血清免疫反应性最强,Bgl2免疫反应性较弱。结论念珠菌可有效刺激小鼠产生抗Eno1、抗Bgl2和抗Pgk1的Ig G类抗体。重组Eno1蛋白免疫反应性最强,可用于后续研究。