β-连环素互作蛋白1参与PPARγ转录活性调控及在高糖诱导系膜细胞表型转化中的作用

目的探讨β-连环素互作蛋白1(β-catenin-interacting protein 1,ICAT)在过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)转录活性调控中的作用及在高糖诱导系膜细胞表型转化中的意义。方法将人肾小球系膜细胞分别用常规葡萄糖浓度(5.5 mmol/L,对照组)和高糖(30 mmol/L,高糖组)培养48 h,检测PPARγ、ICAT和β-catenin的mRNA及蛋白质表达变化。观察过表达ICAT和敲减ICAT及β-catenin对上述培养条件下系膜细胞PPARγ转录活性的影响。利用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹技术检测不同分组中细胞表型转化标志物平滑肌动蛋白α(α-smooth muscular actin,α-SMA)表达水平。利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖水平。结果与对照组比较,高糖培养可诱导系膜细胞表型标志蛋白α-SMA的表达上调以及系膜细胞增殖;高糖培养虽对系膜细胞PPARγ蛋白表达水平无影响(P>0.05),但可使PPARγ转录活性明显降低(P<0.01),同时,可抑制系膜细胞ICAT表达和促进β-catenin表达;过表达ICAT可部分升高高糖培养的系膜细胞PPARγ的转录活性(P<0.01);在常规糖浓度条件下,敲减ICAT可降低PPARγ的转录活性(P<0.01),敲减β-catenin表达,同样可降低PPARγ的转录活性(P<0.01);高糖培养条件下,过表达ICAT可抑制系膜细胞α-SMA的表达与细胞增殖。结论 ICAT可能是PPARγ转录活性的重要调控分子之一,并参与介导了高糖诱导系膜细胞表型转化。

羟基-α-山椒素与肌原纤维蛋白互作及其麻味感知机制

花椒中的酰胺类物质羟基-α-山椒素(α-SOH)与蛋白质的相互作用可增强川菜中肉类菜肴的麻味。为明晰肉类加工中二者的结构变化及附着情况,探究热诱导(60,70,90℃)的猪肉肌原纤维蛋白(MPs)与α-SOH的互作机制,并通过分子对接解析α-SOH的麻味激活机制。结果表明,α-SOH可增加α-SOH/MPs复合物的表面疏水性,促进热处理MPs的解聚。α-SOH酰胺基团中的N-H键易与氨基酸残基之间形成稳定氢键,改变蛋白的亚基聚集状态,从而显著减弱SDS-PAGE上大于45 ku的条带。荧光图谱和圆二色谱结果证实α-SOH导致蛋白二级结构由规则向无序状态转变。适度热处理(60℃和70℃)的MPs更易与α-SOH形成复合物,从而降低游离α-SOH含量。分子对接结果显示,α-SOH激活麻味是通过与TRPV1受体上的L681结合产生。本试验阐明MPs与α-SOH的互作机制以及激活麻味的机理,可为肉制品加工中的麻味调控提供理论依据。

草鱼TAB2与TAK1蛋白互作鉴定及其对两种抗菌肽基因表达的影响

为了探究草鱼TAB2(Ci TAB2)与Ci TAK1能否互作及其对2种草鱼抗菌肽基因(Cihepcidin与Ciβ-defensin1)表达的影响,实验首先采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析拟态弧菌感染后Citab2和Citak1在草鱼免疫相关组织中的时空表达模式。然后利用荧光共定位、免疫共沉淀及Western blot技术鉴定Ci TAB2与Ci TAK1在细胞内共定位及相互作用情况。最后将过表达质粒pEGFP-N1-Citak1与pEGFP-N1-Citab2共同转染草鱼肾细胞(CIK细胞),检测Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平。结果显示,拟态弧菌感染能够显著改变Citab2和Citak1的相对表达水平,前者于感染后不同时间在各检测组织中表现出不同的时空表达模式,而后者均呈现先上调后下调的表达模式;荧光显微镜下观察到Ci TAB2与Ci TAK1共定位于转染后的HEK293T和CIK细胞的胞质中,且在HEK293T细胞内能够形成Ci TAB2-Ci TAK1蛋白复合物;共同过表达Ci TAB2与Ci TAK1后,CIK细胞内Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平在各检测时间点均显著上调。结果表明,Ci TAB2与Ci TAK1存在互作关系且二者互作能够促进上述两种抗菌肽的转录表达。本研究从蛋白互作调控抗菌肽表达的角度为防治鱼类弧菌病提供了新策略。

三氧化二砷通过降低Pin1表达及调节Wnt/β-连环素通路抑制肝癌细胞增殖

目的探讨三氧化二砷(ATO)在肝癌中对肽基脯氨酰基顺反异构酶NIMA相互作用蛋白1(Pin1)表达的抑制作用及其分子机制。方法使用DepMap数据库和GEPIA数据库中的数据分析Pin1在人肝癌细胞系和肝癌组织中的表达情况。以人肝癌细胞系Huh7和小鼠肝癌细胞系H22为细胞模型,通过ATP法检测ATO对肿瘤细胞活力的影响;通过蛋白质印迹法、免疫荧光染色和qPCR检测ATO对Pin1在蛋白质水平和转录水平表达的作用。用氯喹预处理Huh7细胞抑制溶酶体途径后,通过蛋白质印迹法和免疫荧光染色检测ATO对Pin1表达的调控作用。通过皮下荷瘤小鼠模型和免疫组织化学染色验证ATO在体内对肝癌细胞生长和Pin1表达的影响。采用RNA测序分析ATO可能影响的信号通路,并通过蛋白质印迹法和qPCR验证。结果在DepMap数据库23种人肝癌细胞系和GEPIA数据库人肝癌组织中,Pin1的表达均呈现较高水平。在体外实验中,ATO处理后Huh7和H22细胞的细胞活力均降低,细胞中Pin1在蛋白质和转录水平的表达均降低,但用氯喹抑制溶酶体途径逆转了ATO对Pin1表达的影响。在皮下荷瘤小鼠模型中,ATO表现出一定的抗肿瘤效果,免疫组织化学染色显示ATO处理后Pin1表达和肿瘤细胞增殖受到抑制。在ATO处理的H22细胞中Wnt/β-连环素通路相关基因富集,抑制H22细胞中Pin1的表达后β-连环素表达减少。结论ATO通过溶酶体途径抑制Pin1表达,以及影响Wnt/β-连环素信号通路来抑制肝癌细胞增殖。

小麦硝酸盐转运蛋白TaNRT1.1-1A转录活性检测及互作蛋白筛选

为了进一步解析小麦硝酸盐转运蛋白TaNRT1.1-1A的调控机制,本研究对其进行了自激活性检测。利用已构建好的小麦酵母cDNA文库,以TaNRT1.1-1A为诱饵,通过酵母双杂交技术筛选其互作蛋白,回转试验进一步验证其互作关系。结果表明,TaNRT1.1-1A无自激活活性,酵母双杂技术筛选小麦cDNA文库,共获得2个候选互作蛋白,候选蛋白Sdr I-like主要参与植物病害有关的应答响应。Sdr I-like的回转验证结果表明,该蛋白可能与TaNRT1.1-1A存在互作关系。该结果可为进一步研究TaNRT1.1-1A调控小麦硝酸盐吸收有关的分子机制奠定基础。

盐胁迫下小偃麦酵母双杂交文库构建及TtLEA2-1互作蛋白筛选

【目的】构建小偃麦酵母双杂交(Y2H)文库,筛选胚胎发育晚期丰富蛋白(TtLEA2-1)的互作蛋白,为探究该基因的功能和表达调控机理提供理论参考。【方法】以小偃麦Y1805为材料,经提取RNA、分离mRNA、cDNA合成和均一化(DSN)处理后进行BP(attB和attP位点)重组反应,把重组产物转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建cDNA初级文库。抽提初级文库质粒,以pGADT7-DEST载体进行LR(attL或attR位点)重组反应,再转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建Y2H文库。【结果】对初级文库和Y2H文库进行质量分析,其滴度分别是3.98×10^(6) CFU/mL和6.14×10^(6) CFU/mL,库容量分别为7.96×10^(6) CFU和1.23×10^(7) CFU,重组率均为100%。从Y2H文库中挑取的24个单克隆的插入片段长度为850~4000 bp,平均片段长度大于1000 bp。采用Y2H技术和回转验证试验,从小偃麦Y2H文库中筛选了48个可能与TtLEA2-1互作的蛋白。48个TtLEA2-1互作蛋白中,有7个互作蛋白富集在遗传信息处理通路,4个蛋白富集在蛋白质家族:遗传信息过程通路,4个蛋白富集在核苷酸代谢通路,3个蛋白富集在甘氨酸生物合成和代谢通路,2个蛋白富集在碳水化合物代谢通路;富集在蛋白质家族:代谢、细胞过程、环境信息处理、氨基酸代谢通路的蛋白各有1个。【结论】构建的Y2H文库质量高、完整性好和覆盖面广,成功用于小偃麦盐胁迫响应基因互作蛋白的筛选试验,也为新基因发掘及其表达调控机理研究提供高效、便捷途径。

甲状腺功能亢进激活心肌细胞β-catenin/FoxO1诱导大鼠心室重构的作用

【目的】探究甲亢激活心肌细胞β-catenin/FoxO1诱导大鼠心室重构的作用和机制。【方法】通过甲状腺激素(T40.1 mg/kg/day;腹腔注射)连续给药30 d构建甲亢诱导心室重构大鼠体内模型。利用β-catenin抑制剂MSAB(14 mg/kg)同时给药30 d,通过Western-blot检测心肌肥厚主要标志物ANP以及β-catenin、FoxO1等蛋白的表达情况;免疫荧光检测β-catenin、FoxO1的核内外表达及分布情况。利用原代培养的乳鼠心肌细胞,使用甲状腺激素(T320 nmol/L)处理心肌细胞24 h构建体外甲亢诱导心肌细胞肥厚模型,利用β-cateninsiRNA(30 nmol/L)转染心肌细胞敲低β-catenin,Western-blot和免疫荧光检测抑制β-catenin对甲亢诱导乳鼠心肌细胞肥厚的影响。【结果】Wnt/β-catenin通路激活后β-catenin入核增多并于细胞核内的转录因子结合发挥转录调控作用。β-catenin在甲亢诱导的大鼠心室重构模型心肌细胞核内表达显著增加,而其经典下游转录因子TCF7l2表达无显著差异。我们的结果显示,MSAB抑制β-catenin明显改善甲亢诱导的大鼠心室重构。进一步研究表明甲亢诱导大鼠心肌肥厚过程中心肌细胞β-catenin/FoxO1表达明显增强,抑制心肌细胞β-catenin/FoxO1改善甲亢诱导大鼠心肌肥厚。【结论】甲亢性心肌肥厚心肌细胞β-catenin/FoxO1活化,抑制β-catenin/FoxO1改善甲状腺激素诱导的心肌细胞肥大。

上皮钙粘素、β-连环蛋白、细胞周期素D1在进行期寻常型银屑病皮损的表达

目的通过检测银屑病患者皮损处上皮钙粘素、β-连环蛋白和细胞周期素D1的表达,探讨其在银屑病角质形成细胞高度增殖中的意义。方法用免疫组化方法检测正常组织及进行期银屑病皮损处上皮钙粘素、β-连环蛋白和细胞周期素D1蛋白的表达。结果银屑病患者皮损增生的表皮细胞上皮钙粘素和β-连环蛋白在颗粒层和基底细胞层表达明显降低,与正常人相比有显著性差异(P<0.01)。而细胞周期素D1在银屑病患者皮损基底细胞层表达显著升高,并与β-连环蛋白的异常表达相关。结论上皮钙粘素和β-连环蛋白表达的下调可能与银屑病角质形成细胞高度增殖有关,Wnt信号转导系统异常可能参与银屑病的发病机制。

结直肠癌组织中硫氧还蛋白-1与硫氧还蛋白互作蛋白的表达及其临床意义

目的探讨硫氧还蛋白-1(TRX-1)以及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法选取2019年1~12月河北北方学院附属第一医院收治的结直肠癌患者72例,另选取同时期在该院接受治疗的结直肠息肉患者40例作为对照组。采用免疫组化法检测手术切除的病理标本中TRX-1和TXNIP的表达情况,分析结直肠癌组织中TRX-1和TXNIP的表达和临床病理特征的关系,分析结直肠癌组织中TRX-1和TXNIP表达的相关性,接受者工作特征曲线(ROC)分析TRX-1和TXNIP对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组织中TRX-1的阳性表达率为66.67%,高于结直肠息肉组织中的25.00%,差异有统计学意义(χ^(2)=17.880,P=0.000),结直肠癌组织中TXNIP的阳性表达率为30.56%,低于结直肠息肉组织中的77.50%,差异有统计学意义(χ^(2)=22.733,P=0.000)。结直肠癌组织中TRX-1的表达与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小以及分化程度有关(χ^(2)=4.114~4.938,P=0.026~0.043);结直肠癌组织中TXNIP的表达与TNM分期、淋巴结转移有关(χ^(2)=4.675,5.531,P=0.019,0.031)。结直肠癌组织中TRX-1和TXNIP的表达呈负相关(r=-0.298,P=0.011)。TRX-1和TXNIP对结直肠癌有一定的诊断价值,曲线下面积分别为0.708和0.735,而二者联合可进一步提高诊断价值,曲线下面积为0.792。结论TRX-1在结直肠癌组织中异常高表达,TXNIP异常低表达,二者的表达水平均与部分临床病理参数有关,且对结直肠癌均有一定的诊断价值。

上皮型钙黏素、细胞周期素D1和β-连环蛋白表达与胃癌的关系

目的探讨上皮型钙黏素E(E-cad)、细胞周期素D1(Cyclin D1)和β-连环蛋白(β-cat)与胃癌发生及胃癌生物学行为的关系。方法应用免疫组化法检测E-cad、Cyclin D1和β-cat在50例胃癌组织标本、10例正常胃黏膜标本及20例胃癌前病变组织标本中的表达。结果胃癌前病变的E-cad、Cyclin D1和β-cat异常表达率分别为50%、60%、60%,分别与胃癌E-cad(84.0%)、Cyclin D1(72.0%)、β-cat(78.0%)的异常表达率相比差异有统计学意义(P<0.05)。低分化胃癌的E-cad、Cyclin D1和β-cat异常表达率分别为80%、90%、73.4%,分别比高分化胃癌E-cad(50%)、Cyclin D1(55%)、β-cat(40%)的异常表达更明显(P<0.05)。胃癌浸润到浆膜外及伴淋巴结转移时E-cad的异常表达率较高(P<0.01)。肿瘤直径≥5.0cm的胃癌组E-cad的异常表达率较高(P<0.05)。90%的胃癌及60%的胃癌前病变E-cad系统中至少有一项表达异常,二者差异有统计学意义(P<0.05),且至少有一项为表达异常患者的淋巴结转移率明显高于无蛋白异常表达者(P<0.05)。结论E-cad和β-cat的异常表达与胃癌的分化和转移密切相关,β-cat异常表达影响Cyclin D1的激活而引起细胞增殖和分化失控。E-cad、Cyclin D1和β-cat在由胃不典型增生转化为胃癌的过程中起作用。联合检测E-cad、β-cat和Cyclin D1可提高检测结果的参考价值。E-cad、β-cat和Cyclin D1可作为反映胃癌生物学行为的指标。

细胞周期素D1和β-连环蛋白表达与胃癌的关系

目的:探讨细胞周期素D1(Cyclin D1)和β-连环蛋白(β-cat)在胃癌表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法:应用免疫组化法检测50例胃癌组织、10例正常胃组织、20例胃腺瘤标本中细胞周期素D1和β-连环蛋白在胃癌中的表达。结果:胃癌β-cat的异常表达率(78.0%)高于胃腺瘤(60.0%),β-cat的表达异常与胃癌的分化程度、淋巴结转移密切相关,与胃癌的浸润深度、肿瘤大小无相关性。胃癌Cyclin D1的异常表达率(72.0%)高于胃腺瘤(60.0%),Cyclin D1的表达异常与胃癌的分化程度相关,而与胃癌的浸润、转移无相关性。结论:β-cat的异常表达与胃癌的分化和转移密切相关,β-cat异常表达导致Cyclin D1的激活而引起细胞增殖和分化失控。β-cat和Cyclin D1可作为反映胃癌生物学行为的指标。

p-IRE1、β-catenin及XIAP在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤临床诊断及预后评估中的意义

目的探讨磷酸化需肌醇酶1蛋白(p-IRE1)、β-连环素(β-catenin)及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(SNIP)中的表达及其在临床诊断和预后评估中的意义。方法选取2017年1月至2022年1月平顶山市第一人民医院收治的SNIP患者102例为SNIP组;另选取本院同时间段因鼻中隔偏曲对侧下鼻甲代偿性肥大而行下鼻甲黏膜部分切除术的患者99例,经病理确诊为正常鼻腔黏膜组织(设为对照组)。比较两组组织中p-IRE1、β-catenin及XIAP的表达强度情况;102例SNIP患者出院后,行2年门诊复查随访,比较SNIP组不同预后情况患者一般资料及p-IRE1、β-catenin及XIAP阳性表达;采用多元Logistic回归模型分析影响SNIP患者预后的危险因素。结果两组间p-IRE1、β-catenin及XIAP表达强度比较,差异具有统计学意义(P<0.05);且SNIP组p-IRE1、β-catenin及XIAP阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。据随访统计,预后良好组81例,预后不良好组21例。两组性别、年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组Krouse临床分期、病理分化程度、p-IRE1、β-catenin及XIAP阳性表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。多元Logistic回归模型结果显示,Krouse临床分期为T_3期-T_4期、病理分化程度伴恶变SNIP、p-IRE1、β-catenin及XIAP表达为阳性均是影响SNIP患者的预后不良的危险因素(P<0.05)。结论在SNIP组织中,p-IRE1、β-catenin及XIAP的表达强度及阳性表达率均显著高于正常鼻腔黏膜组织;通过检测上述指标阳性表达,可以预测SNIP预后情况,有利于SNIP后续治疗。

胰升血糖素样肽1对新诊断糖尿病患者分泌型卷曲相关蛋白1和β-连环蛋白表达水平的影响

目的观察新诊断糖尿病患者经胰升血糖素样肽1(GLP-1)治疗后分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)和β-连环蛋白(β-catenin)表达水平的变化。方法选取2015年1~12月于该院内分泌门诊就诊或病房住院治疗的新诊断T2DM患者(T2DM组)72例和同期体检健康者(NC组)80例,收集两组入组时的临床资料和生化指标并比较。采用酶联吸附免疫法(ELISA)检测两组入组时、T2DM组经利拉鲁肽治疗12周和停药12周后的SFRP1和β-catenin的水平变化。结果 (1)T2DM组BMI、FPG、Fins、Hb A1c、HOMAIR、SFRP1及β-catenin均高于NC组,HOMA-β低于NC组;(2)与入组时比较,T2DM组治疗12周和停药12周时BMI、FPG、Hb A1c、TC、HDL-C、HOMA-IR均降低,HOMA-β升高;(3)T2DM组不同时间SFRP1和β-catenin水平比较,差异有统计学意义(F=120.633和376.649,均P=0.000),利拉鲁肽治疗12周时和停药12周时SFRP1均高于入组时(t=-9.294和-9.927,均P=0.000),β-catenin低于入组时(t=18.468和6.956,均P=0.000),且停药12周时SFRP1低于治疗12周时(t=6.355,P=0.000),β-catenin水平高于治疗12周时(t=18.129,P=0.000)。结论 GLP-1治疗新诊断T2DM患者可改善胰岛β细胞功能改善,升高SFRP1水平,降低β-catenin的水平,其原因可能与影响Wnt信号通路有关。

星形胶质细胞U251稳转FOXO1基因细胞系构建及其蛋白互作生物素验证

蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interactions,PPIs)是细胞生命活动的基础,以BioID和APEX为代表的蛋白质邻近标记技术逐渐被应用于蛋白质相互作用研究[1,2]。由于蛋白的相互作用大多是依靠氢键、盐键和疏水相互作用力进行,它们的空间距离都非常的短,所以通常认为互作的蛋白必定相互邻近[3]。TurboID是一种比BioID或APEX具有更高催化效率的蛋白质(标记时间从18 h缩短至10 min),由于很多蛋白发挥的结合与催化作用是很短暂的,理论上利用这个技术可以找到一些比较新颖的结合蛋白[4]。大量研究表明,FOXO1调控许多靶点,如参与细胞凋亡和自噬的基因、抗氧化酶、细胞周期阻滞基因以及代谢和免疫调节因子[5-6],被认为是一种具有复杂活性的超级转录因子。因此,我们将利用TurboID的高效性来寻找FOXO1的互作蛋白。

血栓素A2、AP-2α、ET-1及β-catenin在子痫前期的意义和作用研究

目的研究血栓素A2(TXA2)、转录因子激活蛋白(AP-2α)、内皮素-1(ET-1)和β-连环素(β-catenin)在子痫前期的作用和意义。方法选取该院2015年5月至2017年5月收治的子痫前期孕妇60例,其中轻度子痫前期组、早发重度子痫前期组和晚发重度子痫前期组各20例,另选取健康孕妇30例为对照组。收集受试者血清并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中TXA2、AP-2α、ET-1和β-catenin的表达;采用RealTime PCR法检测血清中TXA2、AP-2α、ET-1和β-catenin基因表达。结果与对照组比较,轻度子痫前期组、早发重度子痫前期组和晚发重度子痫前期组患者TXA2、AP-2α、ET-1和β-catenin血清内水平和mRNA表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与轻度子痫前期组比较,早发重度子痫前期组和晚发重度子痫前期组患者TXA2、AP-2α、ET-1和β-catenin血液内水平和mRNA表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与早发重度子痫前期组比较,晚发重度子痫前期组患者TXA2和β-catenin血清内水平和mRNA表达明显升高,AP-2α和ET-1血清内水平和mRNA表达明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。轻度子痫前期组、早发重度子痫前期组和晚发重度子痫前期组患者血清内TXA2、AP-2α、ET-1和β-catenin呈显著正相关关系(P<0.05)。结论子痫前期患者体内TXA2、AP-2α、ET-1和β-catenin呈异常过表达状态,且TXA2、AP-2α、ET-1和β-catenin与早发型子痫的严重程度具有明显的相关性。

非小细胞肺癌组织中β-连环蛋白、Cyclin D1的表达及意义

目的观察非小细胞肺癌组织中的β-连环蛋白和Cyclin D1的表达变化及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测42例非小细胞肺癌及10例肺良性病变组织中的β-连环蛋白和Cyclin D1蛋白。结果在10例肺良性病变组织中β-连环蛋白表达正常,Cyclin D1均呈阴性表达;而在42例非小细胞肺癌组织中β-连环蛋白异常表达率为71.4%,Cyclin D1阳性表达率为76.2%。β-连环蛋白异常表达率与非小细胞肺癌的淋巴结转移情况和生存期有关(P均<0.05)。Cyclin D1表达阳性率与非小细胞肺癌的分化程度和增殖活性密切相关(P均<0.05);β-连环蛋白异常表达与Cyclin D1阳性表达在非小细胞肺癌中呈显著的正相关性(r=0.324,P<0.05)。结论非小细胞肺癌中β-连环蛋白表达异常、Cyclin D1蛋白表达上调。β-连环蛋白的异常表达可能是非小细胞肺癌转移的分子机制之一。

氟伐他汀对冠心病患者白介素-6、白介素-10和基质金属蛋白酶-1水平的影响

目的探讨氟伐他汀对冠心病患者白细胞介互素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)水平的影响。方法冠心病患者51例:急性心肌梗死(AMI)13例、不稳定型心绞痛(UAP)18例、稳定型心绞痛(SAP)20例;健康对照者20名。所有试验对象当天采集空腹静脉血5ml。冠心病患者随机分为2组:氟伐他汀40mg治疗组(26例)和80mg治疗组(25例),30d时再次采血5ml,测定IL-6、IL-10和MMP-1浓度。结果治疗前AMI、UAP组IL-6和MMP-1显著升高(P<0.01);两组治疗后IL-6和MMP-1均有明显下降(P<0.01),但80mg组下降更甚(P<0.01)。血清IL-6水平与血清MMP-1水平呈显著正相关(r=0.847,P<0.01)。IL-10在治疗前、后均无明显变化。结论IL-6、MMP-1在ACS患者中血清水平明显升高,可能与炎症反应、斑块不稳定相关,从而促进了冠心病患者发展为临床上的ACS;IL-10在冠心病患者血清水平中无明显变化;IL-6、MMP-1和IL-10与冠脉病变支数无关;氟伐他汀可能通过抑制IL-6、MMP-1的水平而发挥抗炎作用,其效用与药物浓度相关。

胃癌淋巴管E钙黏蛋白、β连环素的表达与癌转移的关系

目的:探讨胃癌淋巴管E钙黏蛋白、β连环素的表达与癌转移的相关性。方法:胃癌标本32例,正常胃组织标本2例。通过免疫组织化学方法,用淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)标记定位,观察胃癌淋巴管E钙黏蛋白和β连环素的表达。结果:LYVE-1在淋巴管阳性表达,正常组织淋巴管E钙黏蛋白、β连环素表达阴性。胃癌组织淋巴管的E钙黏蛋白表达阴性。β连环素在淋巴管的表达,低分化组表达率为56.5%,与高分化癌淋巴管的表达率(43.3%)有明显差异;有淋巴结转移组表达率58.5%,和无转移癌表达率(43.3%)也有明显差异。结论:E钙黏蛋白/β连环素复合物在介导肿瘤细胞进入淋巴管中起一定的作用,β连环素弱阳性表达与癌的转移有正相关性。

重楼皂苷促成骨样细胞MC3T3-E1增殖作用及其机制

目的 研究重楼皂苷对成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖的作用及其机制.方法 培养成骨样细胞MC3T3-E1,加入不同浓度的重楼皂苷（3、10、30、100 μg/ml）,采用MTT比色试验法、EdU试剂盒、碱性磷酸酶（ALP）活性检测法观察MC3T3-E1的增殖情况,以Western blot方法观察重楼皂苷 （30、100 μg/ml）对成骨样细胞中β-连环素（β-catenin）和骨形成蛋白-2 （BMP-2）表达的影响.结果 重楼皂苷可有效促进成骨样细胞MC3T3-E1的增殖（增殖率117.67～153.33）,浓度依赖性地升高β-catenin与BMP-2的表达.结论 重楼皂苷可能通过调节β-catenin与BMP-2信号通路促进MC3T3-E1细胞增殖与分化.

小麦γ-醇溶蛋白1基因克隆及其互作蛋白筛选

为进一步研究γ-醇溶蛋白1基因调控小麦面粉品质的分子机制,以郑麦158(低蛋白质含量、高面团强度)为研究材料,克隆小麦γ-醇溶蛋白1基因,构建诱饵载体pGBKT7-γ-醇溶蛋白1,利用酵母双杂交技术从郑麦158的cDNA文库中筛选γ-醇溶蛋白1的候选互作蛋白,并通过回转验证试验进一步验证其互作关系。结果表明,成功克隆了γ-醇溶蛋白1基因,其cDNA全长为1 020 bp。利用酵母双杂交技术共筛选到117个蓝色单克隆菌落,经菌液PCR检测、测序以及NCBI的BLAST比对分析,共获得10个与γ-醇溶蛋白1互作的候选蛋白,它们分别是富含半胱氨酸和跨膜结构域蛋白1(XM_044546254.1)、α-淀粉酶抑制剂(XM_044509330.1)、特异性内切-1,3:1,4-β-D-葡聚糖酶2(XM_044550285.1、XM_044594213.1)、蔗糖果糖基转移酶(XM_044554537.1)、支链淀粉酶1(XM_044577151.1)和半胱氨酸蛋白酶B-like(XM_044577994.1),还有与植物生殖生长尤其是果实或者籽粒生长有关的细胞数目调控因子CNR8-like(XM_044483337.1、XM_044491902.1)、CNR2-like(XM_044468782.1)以及参与蛋白质修饰的泛素结构域蛋白DSK2b-like(Dominant suppressor of KAR 2b like,XM_044546840.1)和CIP73(CCa MK-interacting protein of 73 ku,XM_044554473.1)。候选互作蛋白的回转验证试验结果表明,富含半胱氨酸和跨膜结构域蛋白1、α-淀粉酶抑制剂、特异性内切-1,3:1,4-β-D-葡聚糖酶2和半胱氨酸蛋白酶B-like等4个蛋白质可能与γ-醇溶蛋白1存在互作关系。推测γ-醇溶蛋白1可能与这些蛋白质相互作用参与小麦种子中贮藏蛋白(如半胱氨酸)和淀粉的合成与降解等过程。