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西农萨能奶山羊β酪蛋白基因5′侧序列通用表达载体的构建 被引量:2
1
作者 朱婧 梁克明 +2 位作者 童德文 陈苏民 窦忠英 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第12期1066-1069,共4页
目的:检测β酪蛋白基因5′侧序列的启动BglⅡ效果及构建真核表达载体pcDNA3.165.方法:采用SalⅠ和BamHⅠ对pMDT/65双酶切,得到6465bp的β酪蛋白基因5′侧序列;将启动子片段插入到XhoⅠ和BglⅡ双酶切后的pGL3Basic载体里;获得重组报告基... 目的:检测β酪蛋白基因5′侧序列的启动BglⅡ效果及构建真核表达载体pcDNA3.165.方法:采用SalⅠ和BamHⅠ对pMDT/65双酶切,得到6465bp的β酪蛋白基因5′侧序列;将启动子片段插入到XhoⅠ和BglⅡ双酶切后的pGL3Basic载体里;获得重组报告基因载体pGL3B65.瞬时转染西农萨能奶山羊原代培养的乳腺上皮细胞,检测β酪蛋白基因5′侧序列的启动效果.将β酪蛋白基因5′侧序列插入真核表达载体pcDNA3.1(-)的XhoⅠ和BamHⅠ位点之间,从而获得载体pcDNA3.165.结果:长度为6465bp的β酪蛋白基因5′侧序列能有效地启动荧光素酶报告基因,并正确构建了真核表达载体pcDNA3.165.结论:克隆的β酪蛋白基因5′侧序列在转录水平上具有生物学功能,为进一步建立转基因动物乳腺生物反应器奠定了坚实的基础. 展开更多
关键词 β-酪蛋白基因5’侧序列 西农萨能奶山羊 通用表达载体
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鳜鱼(Siniperca chuatsi)β-肌动蛋白基因cDNA全序列与5′侧翼区的克隆与分析 被引量:16
2
作者 刘秀霞 梁旭方 +3 位作者 王琳 端金霞 李光照 廖婉琴 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期102-108,共7页
采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5′调控区。序列分析结果表明,鳜鱼β-肌动蛋白基因全长1897bp,其中5′-UTR长94bp,3′-UTR长675bp,编码区长1128... 采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5′调控区。序列分析结果表明,鳜鱼β-肌动蛋白基因全长1897bp,其中5′-UTR长94bp,3′-UTR长675bp,编码区长1128bp,编码375个氨基酸。将所得序列与其它动物类群的β-肌动蛋白基因序列进行比较分析显示,鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类等不同类群脊椎动物β-肌动蛋白氨基酸序列同源性均在96%以上,说明该基因在生物进化过程中高度保守。通过鳜鱼与其它脊椎动物β-肌动蛋白基因的核苷酸序列构建的进化树显示,脊椎动物β-肌动蛋白聚类成3个分支,鱼类β-肌动蛋白基因形成一个独立的分化群,说明鱼类β-肌动蛋白基因起源于一个共同祖先。克隆得到的鳜鱼β-肌动蛋白基因5'侧翼序列长1399bp,对其进行序列分析,在其起始密码字ATG上游200bp范围内发现含有CAATbox、CC(A/T)6GG(CArGbox)、TATA box对转录调控起重要作用的顺式元件,同时在侧翼区也发现含有GC box、MYOD、YY1、SP1、GATA等多个潜在调控元件。鳜鱼β-肌动蛋白基因5′侧翼序列的克隆成功,为今后转基因鳜鱼的研究工作奠定了基础。 展开更多
关键词 β-肌动蛋白基因 CDNA序列 5′调控区 克隆 鳜鱼
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奶牛β-酪蛋白基因5′和3′调控区的克隆及序列分析 被引量:2
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作者 刘金龙 郑月茂 +1 位作者 王玉洁 张涌 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2004年第2期99-103,共5页
 利用普通及重组PCR技术克隆了奶牛β-酪蛋白基因(CSN2)5′调控成分(2826bp)和3′调控成分(620bp)。前者包括5′上游调控序列、第一外显子及部分第一内含子;后者主要包括最后一个不翻译的外显子和3′侧翼序列。纯化PCR产物通过pMD18-TV...  利用普通及重组PCR技术克隆了奶牛β-酪蛋白基因(CSN2)5′调控成分(2826bp)和3′调控成分(620bp)。前者包括5′上游调控序列、第一外显子及部分第一内含子;后者主要包括最后一个不翻译的外显子和3′侧翼序列。纯化PCR产物通过pMD18-TVector亚克隆后测序并进行软件分析的结果表明,2个克隆片断与奶牛CSN2相应区域同源性分别为99.0%和98.0%,并且包含有全部的CSN2表达核心调控序列和多个转录、翻译因子的结合位点。 展开更多
关键词 奶牛 β-酪蛋白基因 调控区 基因克隆 序列分析
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人肝刺激因子基因5′-侧翼序列克隆和结构分析 被引量:3
4
作者 王新楠 宋智刚 +3 位作者 吴媛 陈莉 赵彦艳 安威 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1171-1176,共6页
为探讨人肝刺激因子 (humanhepaticstimulatorsubstance ,hHSS)基因表达调控的分子机制 ,分离人了hHSS基因组DNA ,克隆其 5′ 侧翼序列 4 890bp ,与GenBank比对后 ,将hHSS基因定位于人 16号染色体。通过逆转录PCR(RT PCR)和 5′RACE确定... 为探讨人肝刺激因子 (humanhepaticstimulatorsubstance ,hHSS)基因表达调控的分子机制 ,分离人了hHSS基因组DNA ,克隆其 5′ 侧翼序列 4 890bp ,与GenBank比对后 ,将hHSS基因定位于人 16号染色体。通过逆转录PCR(RT PCR)和 5′RACE确定hHSS基因转录起始位点 。 展开更多
关键词 hHSS 5-序列 5′RACE 基因转录
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小鼠β-酪蛋白基因序列调控人-tPA突变体基因在小鼠乳腺的表达 被引量:2
5
作者 林福玉 程萱 +5 位作者 陈红星 谭晓红 程竞 杨晓 邓继先 黄培堂 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1057-1062,共6页
为验证克隆的小鼠 β -酪蛋白基因序列调控外源基因表达的能力 ,将人t PA突变体基因的信号肽 -前肽编码序列用小鼠 β -酪蛋白的信号肽编码序列替换 ,人t PA突变体成熟肽cDNA融合到小鼠 β -酪蛋白基因的第 2外显子中 ,从而构建成旨在... 为验证克隆的小鼠 β -酪蛋白基因序列调控外源基因表达的能力 ,将人t PA突变体基因的信号肽 -前肽编码序列用小鼠 β -酪蛋白的信号肽编码序列替换 ,人t PA突变体成熟肽cDNA融合到小鼠 β -酪蛋白基因的第 2外显子中 ,从而构建成旨在应用小鼠 β -酪蛋白基因序列调控人t PA突变体基因在小鼠乳腺中表达的载体。融合基因经显微注射至小鼠的受精卵中 ,2 85枚注射的受精卵移植到 13只受体小鼠。经PCR和Southern杂交鉴定 ,4 2只出生小鼠中有 12只为转基因阳性鼠。 7只转基因阳性鼠乳汁中表达人t PA突变体 ,最高表达水平为 3.6 5 93μg/ml,证明小鼠 β-酪蛋白基因序列能够调控人t PA突变体基因在转基因小鼠的乳汁中表达出具有生物活性的人t PA突变体 ,为进一步制备人t PA突变体基因敲入小鼠模型提供了理论和实验依据。 展开更多
关键词 小鼠 β-酪蛋白 基因序列 调控 人t-PA 突变体基因 乳腺 表达 组织型结溶酶原激活剂
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牛β-酪蛋白5′端上游调控序列的克隆和序列分析 被引量:1
6
作者 欧阳红生 孙燕 +5 位作者 张永亮 张玉静 赵建军 刘松财 李鹏 赵凤云 《生物技术》 CAS CSCD 1999年第5期1-4,共4页
该文用PCR扩增了牛β-酪蛋白基因5′-端上游调控序列,并对其进行了克隆和序列分析。采集成年母牛肝,提取DNA。在牛β-酪蛋白基因外显子1和上游调控区内设计引物,扩增其上游调控序列。两条引物长均为19个核苷酸,引物间跨度为635b... 该文用PCR扩增了牛β-酪蛋白基因5′-端上游调控序列,并对其进行了克隆和序列分析。采集成年母牛肝,提取DNA。在牛β-酪蛋白基因外显子1和上游调控区内设计引物,扩增其上游调控序列。两条引物长均为19个核苷酸,引物间跨度为635bp。以牛肝DNA为模板,进行PCR扩增,扩增产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,可见特异的目的条带。从凝胶中回收目的片段,克隆到pGEM-T载体中。重组质粒提取DNA,进行序列分析。测序结果与文献发表的类似序列相比,仅有4个碱基不同,同源性达99.4%。表明获得了牛β-酪蛋白基因5′-端上游调控序列的克隆。 展开更多
关键词 β-酪蛋白 基因上游 调控序列 克隆
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番茄LeNCED1基因5′-侧翼序列克隆及LeNCED1p:GUS融合基因构建 被引量:1
7
作者 万小荣 李玲 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期232-236,共5页
从番茄基因组中克隆LeNCED1基因5′-侧翼1456 bp调控序列,经生物信息学分析表明,LeNCED1基因上游调控序列中存在响应昼夜节律的顺式作用元件Circadian、光响应元件Box I、逆境胁迫响应元件(TC-rich repeats)、ABA响应元件ABRE等,构建了L... 从番茄基因组中克隆LeNCED1基因5′-侧翼1456 bp调控序列,经生物信息学分析表明,LeNCED1基因上游调控序列中存在响应昼夜节律的顺式作用元件Circadian、光响应元件Box I、逆境胁迫响应元件(TC-rich repeats)、ABA响应元件ABRE等,构建了LeNCED1基因上游调控序列与报告基因GUS融合的植物双元表达载体pLeNCED1p:GUS。 展开更多
关键词 番茄 NCED基因 5-序列克隆 融合基因构建
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绵羊β-乳球蛋白基因5′端及上游调控序列的PCR扩增的方法学研究
8
作者 李雪玲 郭继彤 +2 位作者 于海泉 王达珍 张肇英 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期79-82,共4页
本文对绵羊 β-乳球蛋白基因 5′端及上游调控序列的 PCR方法扩增进行了研究 .经比较分析 ,将从羊血中提取的绵羊基因组 DNA的模板用量定为 4μl( 0 .4μg/μl) ,Taq DNA聚合酶用量为 0 .83μl( 3u/μl) ,变性为 94℃ 1 min,退火为 64℃... 本文对绵羊 β-乳球蛋白基因 5′端及上游调控序列的 PCR方法扩增进行了研究 .经比较分析 ,将从羊血中提取的绵羊基因组 DNA的模板用量定为 4μl( 0 .4μg/μl) ,Taq DNA聚合酶用量为 0 .83μl( 3u/μl) ,变性为 94℃ 1 min,退火为 64℃ 1 m in,72℃延伸 2 min,循环次数为32次 ,获得的 PCR产物经电泳检测 ,条带明亮 ,特异性高 ,大小为 898bp.经序列分析发现 ,与已知基因组序列一致性达 99%以上 ,可用于指导外源基因在转基因动物乳腺中表达 . 展开更多
关键词 绵羊β-乳球蛋白基因(BLG)5′端及上游调控序列 PCR
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牛αS1-酪蛋白基因5’-调节区的分子克隆
9
作者 杨卫民 沈孝宙 +3 位作者 孙雪茵 彭红 劳为德 陈受宜 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期108-111,共4页
用牛αSl-酪蛋白cDNA作探针,从牛基因组文库中筛选出一段αSl-酪蛋白基因序列。由限制内切酶图谱和Southern印迹分析可以确定其中含有完整的αSl-酪蛋白基因的5’调节区。
关键词 牛αS1-酪蛋白 基因 5'调节区 分子克隆
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鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的胞嘧啶5-甲基转移酶基因结构及其序列分析 被引量:8
10
作者 何华虹 邓敏 +1 位作者 何建国 翁少萍 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期349-355,共7页
对鳜鱼传染性脾肾坏死病毒 (infectiousspleenandkidneynecrosisvirus,ISKNV)的胞嘧啶 5 -甲基转移酶(MTase)基因的结构及序列进行了分析。序列比较分析表明 ,ISKNVMTase编码区全长 6 84bp ,编码长 2 2 7个氨基酸的蛋白质 ,推测分子量为... 对鳜鱼传染性脾肾坏死病毒 (infectiousspleenandkidneynecrosisvirus,ISKNV)的胞嘧啶 5 -甲基转移酶(MTase)基因的结构及序列进行了分析。序列比较分析表明 ,ISKNVMTase编码区全长 6 84bp ,编码长 2 2 7个氨基酸的蛋白质 ,推测分子量为 2 5 85 5D。与一些细菌的MTase比较 ,ISKNVMTase也含有负责转移甲基的 4个保守区 ,但缺乏识别靶序列的保守区。比较ISKNV与其它 6种脊椎动物虹彩病毒的MTase序列并建立系统树 ,ISKNV显著不同于蛙病毒属和淋巴囊肿病毒属。 7种脊椎动物虹彩病毒MTase具有高度保守区 ,可以此设计引物用PCR方法鉴定脊椎动物虹彩病毒。 展开更多
关键词 鳜鱼 传染性脾肾坏死病毒 胞嘧啶5-甲基转移酶 序列分析 基因结构
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人β-防御素-2基因5′-端转录调控区DNA片段的克隆及序列初步分析 被引量:1
11
作者 汪宇辉 黄宁 +1 位作者 吴琦 王伯瑶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1565-1566,共2页
关键词 β-防御素-2基因 5-端转录调控区 DNA片段 克隆 序列分析 基因转录
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人β-防御素-2基因5′-端转录调控序列分析 被引量:2
12
作者 汪宇辉 王国兴 +2 位作者 黄宁 吴琦 王伯瑶 《四川生理科学杂志》 2002年第4期160-163,共4页
目的 :对在LPS、TNF α刺激下 ,人 β 防御素 2基因 5′ 端转录调控机制进行初步分析。 方法 :将HBD 2基因 5′ 端上游序列连接入无启动子的pEGFP 1质粒 ,构建了系列 5′端缺失的 pEGFP 1 /HBD 2报告质粒。pEGFP 1 /HBD 2质粒转染细胞... 目的 :对在LPS、TNF α刺激下 ,人 β 防御素 2基因 5′ 端转录调控机制进行初步分析。 方法 :将HBD 2基因 5′ 端上游序列连接入无启动子的pEGFP 1质粒 ,构建了系列 5′端缺失的 pEGFP 1 /HBD 2报告质粒。pEGFP 1 /HBD 2质粒转染细胞后给予LPS、TNF α刺激 ,用RT PCR检测 pEGFP的mRNA浓度。 结果 :显示HBD 2基因上游 2 41段有较强的启动子活性 ;LPS、TNF α刺激后 ,即使上游序列缩短至 2 41位点时 ,报告基因 pEGFP的mRNA表达量仍明显增高。说明HBD 2基因上游 2 41区域含有LPS、TNF α刺激后激活的转录因子作用位点。计算机分析表明 2 3 2 / 2 2 2区域有一同源性极高的NF kB结合元件 ,提示NF kB结合元件可能调控HBD 展开更多
关键词 β-防御素-2基因5- 转录调控 序列分析 NF-kB结合元件 LPS TNF-Α 抗菌肽
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5-HT_(1A)受体基因PCR产物的直接测序及序列分析
13
作者 林宁 宁方勇 +1 位作者 王光圣 白秀娟 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第12期97-98,共2页
关键词 5-HT1A 受体基因 PCR产物 序列分析 直接测序 受体亚型 5-羟色胺
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一个遗传性凝血因子XⅢ缺乏症家系FXⅢA链基因5’-端短串联重复序列[AAAG]n多态性分析
14
作者 肖德乾 王巍 +1 位作者 蔡望伟 周克元 《海南医学院学报》 CAS 2004年第4期223-225,共3页
目的:分析一个遗传性凝血因子XⅢ缺乏症家系FXⅢA基因5’-端非翻译区STR多态性,对该亚基的突变位点进行遗传分离分析。方法:应用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法技术分析一个经测序确诊的凝血因子XⅢ基因缺乏的家系的凝血因子X... 目的:分析一个遗传性凝血因子XⅢ缺乏症家系FXⅢA基因5’-端非翻译区STR多态性,对该亚基的突变位点进行遗传分离分析。方法:应用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法技术分析一个经测序确诊的凝血因子XⅢ基因缺乏的家系的凝血因子XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn。结果:在该家系中检测出两种基因型,先证者及其弟XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn的基因型为L2/L2基因型,先证者的父亲、母亲及其妹的基因型为L1/L2,先证者的XⅢA链基因的突变位点分别与父源的L2和母源的L2位点连锁。结论:根据家系XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn与FXⅢA基因突变位点的连锁关系可确定突变的遗传分离特点。 展开更多
关键词 遗传性凝血因子XⅢ缺乏症 家系 FXⅢA链基因5’- 短串联 重复序列 [AAAG]n 基因多态性
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利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体
15
作者 辛艳丽 贾玉艳 +1 位作者 王恒梁 邓继先 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期45-50,共6页
采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-... 采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换。最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除。经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1BAC克隆。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 λ RED重组系统 β-酪蛋白基因 FLP Southern 同源重组 BAC克隆 同源序列
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棉花GhFAD2-1基因5’UTR内含子的克隆与序列分析
16
作者 孙亮 文凤 +2 位作者 刘峰 张新宇 孙杰 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期1-8,共8页
【目的】对棉花^(Δ12)-油酸去饱和酶基因Gh FAD2-1 5'UTR区的内含子进行克隆和序列分析,为研究Gh FAD2-1的表达调控奠定基础。【方法】利用5'RACE技术,克隆Gh FAD2-1的5'UTR序列,结合棉花基因组序列,克隆Gh FAD2-1 5'... 【目的】对棉花^(Δ12)-油酸去饱和酶基因Gh FAD2-1 5'UTR区的内含子进行克隆和序列分析,为研究Gh FAD2-1的表达调控奠定基础。【方法】利用5'RACE技术,克隆Gh FAD2-1的5'UTR序列,结合棉花基因组序列,克隆Gh FAD2-1 5'UTR内含子,并利用PLACE等生物信息学软件对其顺式作用原件进行分析。【结果】棉花A、D基因组的Gh FAD2-1 5'UTR中各含一内含子序列,全长分别为1 103 bp、1 111 bp;Gh FAD2-1成熟mRNA的5'UTR为77bp,转录的起点碱基为T;5'UTR内含子两个剪切位点分别AA-GG、CA-GC。该内含子包括一些典型的与光响应相关的作用元件,以及与激素和胁迫因素相关的应答元件等。【结论】克隆获得了棉花A、D基因组的Gh FAD2-1基因5'UTR内含子序列;明确其转录的起点碱基及5'UTR内含子的剪切位点,为进一步在分子水平上研究Gh FAD2-1功能及其表达调控规律,为植物的遗传改良奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花 GhFAD2-1基因 5'UTR内含子 克隆 序列分析
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高等植物类黄酮3′5′-羟化酶基因cDNA及其氨基酸序列的生物信息学分析 被引量:2
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作者 杨晓娜 陈自宏 +1 位作者 陈宏艳 谢雯颖 《保山学院学报》 2021年第2期24-32,共9页
用生物信息学方法对GenBank中的23种高等植物的类黄酮3´5´-羟化酶基因(F3'5'H)的cDNA序列及其编码氨基酸序列的结构、理化性质、信号肽、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜结构域、功能域和进化关系进行了初步预测分析... 用生物信息学方法对GenBank中的23种高等植物的类黄酮3´5´-羟化酶基因(F3'5'H)的cDNA序列及其编码氨基酸序列的结构、理化性质、信号肽、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜结构域、功能域和进化关系进行了初步预测分析;结果表明:不同植物F3'5'H基因cDNA序列起始密码子均为ATG,终止密码子均为TAA、TAG或TGA,包括5’,3’非翻译区和一个开放阅读框;不同植物F3'5'H基因cDNA序列编码的氨基酸序列的理化性质基本一致,有3段保守序列“PPGP”“AGTDT”“FGAGRRICAG”,不同植物F3'5'H具有三个跨膜结构域,定位于细胞质上,并有一段与细胞色素P450功能区相匹配的功能域;类黄酮3´5´-羟化酶属具转运肽的亲水性稳定分泌蛋白,α-螺旋和无规卷曲为最主要的二级结构元件,延伸链和β-转角散布于整个结构。 展开更多
关键词 高等植物 类黄酮3´5´-羟化酶基因 CDNA序列 氨基酸序列 生物信息学分析
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巴夫杜氏藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因的克隆和分析 被引量:7
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作者 尚常花 朱顺妮 +2 位作者 袁振宏 吕鹏梅 王忠铭 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期668-674,共7页
1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是光合作用中的一个关键酶,其小亚基rbcS具有调控羧化反应催化效率和影响该酶对二氧化碳/氧气底物特异性的功能。从巴夫杜氏藻中克隆rbcS基因及其5′-上游序列,并对基因及5′-上游序列进行了分... 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是光合作用中的一个关键酶,其小亚基rbcS具有调控羧化反应催化效率和影响该酶对二氧化碳/氧气底物特异性的功能。从巴夫杜氏藻中克隆rbcS基因及其5′-上游序列,并对基因及5′-上游序列进行了分析。根据已知rbcS基因保守核苷酸序列设计引物,分别克隆到1 841 bp的DNA和380 bp的cDNA序列。以此为基础,使用染色体步移(Genome walking)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了799bp的5′端DNA序列和500 bp的3′端cDNA序列。序列分析发现,巴夫杜氏藻rbcS DNA全长为2 031 bp(不包括476 bp 5′-上游序列),cDNA全长包括570 bp开放读码框(GenBank登录号:HQ315783)和294 bp 3′端非翻译区。5′-上游序列区域存在一系列预测的顺式作用元件。该研究旨在为后继的rbcS基因的功能和表达研究、Rubisco的遗传改造奠定基础。同时,rbcS启动子因其可驱动基因高效表达而引起广泛关注,因此获得的rbcS 5′-上游序列经验证和优化后,可用于在嗜盐微藻中驱动转基因的高效表达以及完善微藻转化系统。 展开更多
关键词 巴夫杜氏藻 基因克隆 5-上游序列分析 RBCS 1 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶
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中国猪瘟兔化弱毒(兔血源毒)NS_3 5′端基因的克隆与序列分析
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作者 蒋帅 刘湘涛 +2 位作者 李健强 李红卫 殷震 《中国病毒学》 CSCD 2000年第1期83-87,共5页
The NS 3 5′ terminal gene was amplified by reverse transcription polymerase reaction (RT PCR), and half nest polymerase reaction. The amplified fragments were cloned and sequenced. Comparing and analysing the nucleot... The NS 3 5′ terminal gene was amplified by reverse transcription polymerase reaction (RT PCR), and half nest polymerase reaction. The amplified fragments were cloned and sequenced. Comparing and analysing the nucleotide sequences and deduced amino acid sequences of the HCLV isolated from blood and other HCV strains were performed on the computer with Goldkey software. The results showed that the highest degree of nucleotide homology exists between HCLV isolated from blood and “C” strain (sk 6 cellular virus). The homology of amino acid sequence was all at or over 98% between each pair strains. It reveals that HCLV has very close relationship with “C” strain, and also proves that NS 3 gene is highly conservative in pestiviruses. 展开更多
关键词 中国 猪瘟 兔化弱毒 NS3-5'端基因 序列分析
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节旋藻FACHB341 Rubisco基因部分序列的克隆和分析 被引量:8
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作者 刘金姐 茅云翔 +2 位作者 臧晓南 隋正红 张学成 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期87-93,共7页
以节旋藻FACHB341为材料,对所克隆Rubisco基因进行了核苷酸序列测定和分析,由此推导出相应的氨基酸序列,并与部分其他蓝藻的同源基因进行了同源性分析。结果表明:所克隆DNA片段包含Rubisoo大小亚基基因部分序列及rbcX基因序列,长度为207... 以节旋藻FACHB341为材料,对所克隆Rubisco基因进行了核苷酸序列测定和分析,由此推导出相应的氨基酸序列,并与部分其他蓝藻的同源基因进行了同源性分析。结果表明:所克隆DNA片段包含Rubisoo大小亚基基因部分序列及rbcX基因序列,长度为2073 bp,其中rbcL和rbcX基因之间存在两个转录茎环结构;大小亚基酸性氨基酸和碱性氨基酸的比例分别为13.14%和14.51%,疏水氨基酸的比例为42.16%;rbcL核苷酸序列与集胞藻PCC6803、Prochlorothrix hollandica、聚球藻PCC6301、Agmenellum quadruplicatum和鱼腥藻PCC7120同源序列的相似性分别为91.7%、79.9%、74.8%、77.2%和76.1%;rbcS核苷酸序列与鱼腥藻PCC7120同源序列的相似性为67.6%,而与PCC6301和集胞藻PCC7002同源序列的相似性分别为30.1%和63.8%。 展开更多
关键词 节旋藻 基因序列 克隆 “l 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶” 核苷酸 同源性分析 氨基酸 RUBISCO基因 密码子
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