目的探索肺结核患者血清甲壳质酶蛋白40(chitinase protein 40,YKL-40)、β-防御素-2(human beta defensin 2,HBD-2)水平及其对肺结核的诊断价值。方法选取2021年6月—2023年6月山东省立医院收治的86例肺结核患者为肺结核组,根据痰涂片...目的探索肺结核患者血清甲壳质酶蛋白40(chitinase protein 40,YKL-40)、β-防御素-2(human beta defensin 2,HBD-2)水平及其对肺结核的诊断价值。方法选取2021年6月—2023年6月山东省立医院收治的86例肺结核患者为肺结核组,根据痰涂片结果分为活动性肺结核组(n=50)和非活动性肺结核组(n=36),另选取86例来自我院体检中心的健康受试者作为对照组。检测所有受试者血清中YKL-40、HBD-2水平并分析肺结核患者血清中YKL-40与HBD-2的相关性;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清中YKL-40、HBD-2水平对肺结核及活动性肺结核的诊断价值。结果肺结核组血清YKL-40、HBD-2水平高于对照组(P均<0.05);活动性肺结核组血清YKL-40、HBD-2水平高于非活动性肺结核组(P均<0.05)。肺结核患者血清中YKL-40与HBD-2的水平呈正相关(r=0.601)。YKL-40、HBD-2及2者联合诊断肺结核的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.895、0.922、0.962,2者联合诊断优于单独诊断;YKL-40、HBD-2及2者联合诊断活动性肺结核的AUC分别为0.891、0.881、0.959,2者联合诊断优于单独诊断。结论肺结核患者血清YKL-40、HBD-2水平显著升高,且随病情加重而升高,2者对肺结核及活动性肺结核的具有一定的诊断价值。展开更多
β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β-防御素 - 2 (r BD2 )重组质粒 p BK- CMV- r BD2和 p CDNA- 3.1- Myc- His(+) - r BD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测...β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β-防御素 - 2 (r BD2 )重组质粒 p BK- CMV- r BD2和 p CDNA- 3.1- Myc- His(+) - r BD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到 r BD2 - His融合蛋白基因 m RNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β-防御素 - 2 p BK- CMV- r BD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒 p BK-CMV- r BD2气道转染与对照相比可显著提高肺组织对绿脓杆菌的清除率 (n(8,p(0 .0 1)。本研究表明 β-防御素基因气道转染可提高呼吸道天然抗感染防御功能 ,可能在呼吸道感染的防治实践中具有潜在应用价值。展开更多
目的探讨梓醇、左旋紫草素、丹皮酚通过影响JNK信号通路发挥调控HBD-2的作用。方法用IL-1β和TNF-α各100ng/m L的混合物刺激Ha Ca T细胞18h建立HBD-2高表达及JNK信号通路活化的细胞学体外模型,配制含合适浓度的梓醇、左旋紫草素、丹皮...目的探讨梓醇、左旋紫草素、丹皮酚通过影响JNK信号通路发挥调控HBD-2的作用。方法用IL-1β和TNF-α各100ng/m L的混合物刺激Ha Ca T细胞18h建立HBD-2高表达及JNK信号通路活化的细胞学体外模型,配制含合适浓度的梓醇、左旋紫草素、丹皮酚培养基干预细胞模型,并设阴性及阳性对照。用实时荧光定量PCR法检测各组中HBD-2 m RNA的表达;用ELISA法检测培养上清中HBD-2蛋白的表达;用Western blot法检测各组中JNK蛋白的表达。结果左旋紫草素、丹皮酚和JNK抑制剂(阳性对照药物)可以明显下调细胞学体外模型中HBD-2基因及蛋白的表达(P<0.05),左旋紫草素与JNK抑制剂相当(P>0.05),丹皮酚弱于JNK抑制剂(P<0.05)。梓醇则明显上调细胞学体外模型中HBD-2基因及蛋白的表达(P<0.05)。左旋紫草素、丹皮酚和JNK抑制剂可以明显下调P-JNK2蛋白的相对含量,梓醇对P-JNK2蛋白无抑制作用,反而上调其表达。结论紫草、丹皮可能通过抑制JNK2MAPK信号通路的活化,下调HBD-2的表达,从而发挥其治疗银屑病的作用。地黄治疗银屑病的机制尚需从其他方面继续探讨。展开更多
内源性抗菌多肽防御素是机体先天性免疫系统的重要组成部分,可帮助机体防御外界病原微生物的入侵。鸡β-防御素-1(G a llinac in-1,G a l-1)对许多致病菌都具有杀菌作用,具有很好的研究开发价值。本研究利用PCR技术从重组质粒pGEM-TE as...内源性抗菌多肽防御素是机体先天性免疫系统的重要组成部分,可帮助机体防御外界病原微生物的入侵。鸡β-防御素-1(G a llinac in-1,G a l-1)对许多致病菌都具有杀菌作用,具有很好的研究开发价值。本研究利用PCR技术从重组质粒pGEM-TE asy-ga l-1中克隆出G a l-1基因成熟肽区,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a(+)-ga l-1,然后用重组质粒转化大肠杆菌BL-21。挑选阳性克隆菌,用浓度为0.5 mm o l/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳显示在目标位置约25kD处出现了条带并用W erstern B lot进行了鉴定。表明G a l-1基因在大肠杆菌以融合形式得到了表达。经灰度扫描显示重组蛋白表达量占细菌总蛋白的15.54%。用50%N i-NTA纯化树脂进行层析纯化,在洗脱液E中出现单一条带。G a l-1多肽在pET-32a(+)质粒表达体系中成功表达为鸡防御素多肽下一步的研究奠定基础。展开更多
文摘目的探索肺结核患者血清甲壳质酶蛋白40(chitinase protein 40,YKL-40)、β-防御素-2(human beta defensin 2,HBD-2)水平及其对肺结核的诊断价值。方法选取2021年6月—2023年6月山东省立医院收治的86例肺结核患者为肺结核组,根据痰涂片结果分为活动性肺结核组(n=50)和非活动性肺结核组(n=36),另选取86例来自我院体检中心的健康受试者作为对照组。检测所有受试者血清中YKL-40、HBD-2水平并分析肺结核患者血清中YKL-40与HBD-2的相关性;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清中YKL-40、HBD-2水平对肺结核及活动性肺结核的诊断价值。结果肺结核组血清YKL-40、HBD-2水平高于对照组(P均<0.05);活动性肺结核组血清YKL-40、HBD-2水平高于非活动性肺结核组(P均<0.05)。肺结核患者血清中YKL-40与HBD-2的水平呈正相关(r=0.601)。YKL-40、HBD-2及2者联合诊断肺结核的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.895、0.922、0.962,2者联合诊断优于单独诊断;YKL-40、HBD-2及2者联合诊断活动性肺结核的AUC分别为0.891、0.881、0.959,2者联合诊断优于单独诊断。结论肺结核患者血清YKL-40、HBD-2水平显著升高,且随病情加重而升高,2者对肺结核及活动性肺结核的具有一定的诊断价值。
文摘β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β-防御素 - 2 (r BD2 )重组质粒 p BK- CMV- r BD2和 p CDNA- 3.1- Myc- His(+) - r BD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到 r BD2 - His融合蛋白基因 m RNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β-防御素 - 2 p BK- CMV- r BD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒 p BK-CMV- r BD2气道转染与对照相比可显著提高肺组织对绿脓杆菌的清除率 (n(8,p(0 .0 1)。本研究表明 β-防御素基因气道转染可提高呼吸道天然抗感染防御功能 ,可能在呼吸道感染的防治实践中具有潜在应用价值。
文摘目的探讨梓醇、左旋紫草素、丹皮酚通过影响JNK信号通路发挥调控HBD-2的作用。方法用IL-1β和TNF-α各100ng/m L的混合物刺激Ha Ca T细胞18h建立HBD-2高表达及JNK信号通路活化的细胞学体外模型,配制含合适浓度的梓醇、左旋紫草素、丹皮酚培养基干预细胞模型,并设阴性及阳性对照。用实时荧光定量PCR法检测各组中HBD-2 m RNA的表达;用ELISA法检测培养上清中HBD-2蛋白的表达;用Western blot法检测各组中JNK蛋白的表达。结果左旋紫草素、丹皮酚和JNK抑制剂(阳性对照药物)可以明显下调细胞学体外模型中HBD-2基因及蛋白的表达(P<0.05),左旋紫草素与JNK抑制剂相当(P>0.05),丹皮酚弱于JNK抑制剂(P<0.05)。梓醇则明显上调细胞学体外模型中HBD-2基因及蛋白的表达(P<0.05)。左旋紫草素、丹皮酚和JNK抑制剂可以明显下调P-JNK2蛋白的相对含量,梓醇对P-JNK2蛋白无抑制作用,反而上调其表达。结论紫草、丹皮可能通过抑制JNK2MAPK信号通路的活化,下调HBD-2的表达,从而发挥其治疗银屑病的作用。地黄治疗银屑病的机制尚需从其他方面继续探讨。
文摘内源性抗菌多肽防御素是机体先天性免疫系统的重要组成部分,可帮助机体防御外界病原微生物的入侵。鸡β-防御素-1(G a llinac in-1,G a l-1)对许多致病菌都具有杀菌作用,具有很好的研究开发价值。本研究利用PCR技术从重组质粒pGEM-TE asy-ga l-1中克隆出G a l-1基因成熟肽区,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a(+)-ga l-1,然后用重组质粒转化大肠杆菌BL-21。挑选阳性克隆菌,用浓度为0.5 mm o l/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳显示在目标位置约25kD处出现了条带并用W erstern B lot进行了鉴定。表明G a l-1基因在大肠杆菌以融合形式得到了表达。经灰度扫描显示重组蛋白表达量占细菌总蛋白的15.54%。用50%N i-NTA纯化树脂进行层析纯化,在洗脱液E中出现单一条带。G a l-1多肽在pET-32a(+)质粒表达体系中成功表达为鸡防御素多肽下一步的研究奠定基础。
