β-谷甾醇通过诱导ROS累积造成氧化应激抑制K562/ADR细胞增殖并促进凋亡和分化

目的:探讨β-谷甾醇抑制耐阿霉素人类髓性白血病细胞K562/ADR增殖、促进细胞凋亡与分化的效果及其可能机制。方法:使用细胞毒性试验计算β-谷甾醇对K562/ADR细胞的半数抑制率(IC50),采用CCK-8法检测细胞增殖率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率与线粒体膜电位下降率,使用分光光度法检测细胞上清中SOD活力与MDA含量,使用荧光试剂盒检测细胞ROS强度,使用联苯胺染色检测红细胞分化程度,使用蛋白质印迹(Western blot)检测珠蛋白转录因子1(GATA-1)、β-珠蛋白(β-globin)和核因子e2相关因子2(NF-E2)蛋白表达水平。结果:β-谷甾醇对K562/ADR细胞的半数抑制浓度的IC50为163.64μmol/L。与空白组相比,3个浓度的β-谷甾醇均能抑制细胞增殖、促进细胞凋亡与红细胞分化,降低SOD活力、线粒体膜电位,增加MDA与ROS含量,升高GATA-1、β-globin和NF-E2蛋白表达水平(P<0.01)。结论:β-谷甾醇能抑制K562/ADR细胞增殖,促进细胞凋亡,并且诱导红细胞分化,其机制可能是通过促进ROS积累引起氧化应激失衡。

人参皂苷Rb_(1)脂质体的制备及对脂肪细胞中脂滴积聚的抑制作用

[目的]制备β-谷甾醇修饰的人参皂苷Rb_(1)脂质体(β-Rb_(1)-Lip),减少Rb_(1)降解并增强人参皂苷Rb_(1)降脂效果。[方法]采用薄膜水和法制备了β-谷甾醇修饰的人参皂苷Rb_(1)脂质体,利用MTT法评估脂质体的生物安全性,借助油红O染色试验和酶标仪测量TG含量,考察了脂质体β-Rb_(1)-Lip对脂肪细胞3T3-L1的脂滴积聚抑制作用。[结果]制备的β-Rb_(1)-Lip脂质体的包封率为83.74%,平均粒径为198 nm,β-Rb_(1)-Lip在12 h内Rb_(1)释放率约为80%,表现出良好的缓释效果。对于降脂活性,50μmol/L的β-Rb_(1)-Lip表现出显著的细胞内脂滴抑制率,与同浓度Rb_(1)单体相比,β-Rb_(1)-Lip对3T3-L1细胞内脂滴的抑制效果更为显著,且对细胞没有毒副作用。[结论]β-Rb_(1)-Lip具有包封率高、粒径小和缓释效果明显的特征,能够持续释放活性成分人参皂苷Rb_(1),增强其降脂功效并减少用量。

基于网络药理学探索养心消痹汤治疗冠心病稳定型心绞痛的作用机制

目的运用网络药理学方法探讨养心消痹汤治疗冠心病稳定型心绞痛的作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索养心消痹汤组方各味中药成分及其靶点信息,利用DrugBank和Therapeutic Target Database(TTD)数据库收集冠心病稳定型心绞痛疾病靶点;使用STRING数据库构建上述靶点信息蛋白质-蛋白质互作网络并导入Cytoscape软件进行分析与可视化图形构建。结果获得养心消痹汤治疗冠心病稳定型心绞痛靶点信息共计126个,相互作用关系2305种,度值排名靠前的化合物有槲皮素、山奈酚、木犀草素、β-谷甾醇和丹参酮IIA等;GO与KEGG分析结果显示养心消痹汤可能通过影响细胞组分运动、脂质定位、氧化应激、DNA转录、凝血过程、三磷腺苷代谢、免疫与炎症反调控、钙离子转运等生物过程发挥治疗冠心病稳定型心绞痛作用,缺氧诱导因子-1、Toll样受体、C-型凝集素受体、流体剪切和动脉粥样硬化、辅助性T细胞17/白细胞介素-17、T细胞受体、肿瘤坏死因子、松弛素和晚期搪基化终产物及其受体信号通路可能参与该过程。结论养心消痹汤治疗冠心病稳定型心绞痛的物质基础与机制可能与上述化学成分及相关生物学过程与信号通路有关。

β-谷甾醇改善绝经后骨质疏松的实验研究

[目的]探究杜仲有效单体成分β-谷甾醇对小鼠绝经后骨质疏松的疗效及其潜在作用机制。[方法]将24只12周龄雌性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组及β-谷甾醇干预组,每组8只,采用双侧卵巢切除术建立绝经后骨质疏松模型,术后假手术组及模型组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,β-谷甾醇干预组给予β-谷甾醇灌胃,术后8周将各组小鼠处死取材,借助显微计算机断层扫描(micro-computed tomography,Micro-CT)观察β-谷甾醇干预对绝经后骨量丢失及骨小梁破坏的保护作用,并采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色对小鼠股骨远端区域进行组织形态学分析,同时通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色评估小鼠骨吸收与骨形成情况,并通过免疫组化检测各组样本的β-catenin表达水平。[结果]Micro-CT扫描结果显示,β-谷甾醇干预可减少绝经后骨量丢失及骨微结构破坏,HE染色证实β-谷甾醇可有效维持骨小梁数目及组织形态,并在一定程度上抑制雌激素缺乏引起的异常脂肪堆积现象。TRAP染色结果表明,β-谷甾醇并不影响破骨细胞形成,而免疫组化结果表明β-谷甾醇可显著促进成骨标志物ALP的表达。与此同时,β-谷甾醇可增加β-catenin在股骨远端区域的表达,提示β-谷甾醇促进骨形成,可能与其上调β-catenin信号通路有关。[结论]β-谷甾醇体内干预可上调β-catenin信号通路,增强成骨分化,促进机体骨形成,从而改善绝经后骨质疏松。

β-谷甾醇对猪卵母细胞体外成熟和胚胎发育的影响

旨在探索一种自然植物提取的抗氧化分子——β-谷甾醇(β-sitosterol,SITO)对猪卵母细胞体外成熟效率和早期胚胎体外发育质量的影响。本研究以在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加不同浓度SITO为试验组,不添加SITO(含0.16%DMSO)的培养基为对照组,对屠宰场所得猪卵巢中收集到的卵母细胞进行体外培养,试验组浓度分别为10、20、40μmol·L~(-1),不同浓度各重复3次,每组培养卵母细胞150~200枚。培养46 h后,对卵母细胞成熟率进行统计,并收集成熟卵母细胞进行活性氧、细胞凋亡、线粒体膜电位染色以及相关基因的实时荧光定量PCR;对成熟卵母细胞进行孤雌激活,2 d后统计卵裂率,7 d后统计囊胚率,并统计囊胚细胞总数。结果发现,20μmol·L~(-1)SITO处理显著提高了猪卵母细胞的体外成熟率,且促进了孤雌激活后囊胚的形成并增加了囊胚细胞数,降低了卵母细胞中ROS含量,提高了抗氧化应激基因SOD和CAT的表达;同时,SITO降低卵母细胞的凋亡水平,增加抗凋亡基因BCL-2的表达,降低促凋亡基因Caspase 3和BAX的表达。此外,SITO可增强线粒体膜电位(ΔΨm),增加TFAM基因的表达。综上所述,本研究结果表明,在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加20μmol·L^(-1)SITO能够显著促进猪卵母细胞的体外成熟率、提高胚胎的体外发育能力和胚胎质量。

β-谷甾醇对肿瘤的防治作用及其机制研究进展

β-谷甾醇是一种天然的甾体类化合物,因其特有的生物学活性和理化特性广泛应用于医药和食品行业。β-谷甾醇作为真核生物细胞膜的重要组成成分,不仅具有良好的自由基清除作用,还具有化学预防高血脂、动脉硬化和炎症等疾病的作用。近年来,β-谷甾醇对肝癌、胃癌、结直肠癌、肺癌和乳腺癌等癌症均表现出极佳的抑制作用,在癌症的预防与治疗方面具有很好的应用前景。该文对β-谷甾醇的抗癌作用及分子机制进行总结,以期为深入了解β-谷甾醇的抗癌作用以及未来在临床癌症的应用提供参考。

β-谷甾醇对增生性瘢痕成纤维细胞作用机制的网络药理学分析

背景:目前针对增生性瘢痕有效的预防和治疗措施仍然有限。而大多数植物中草药不良反应小且来源丰富,为预防和治疗增生性瘢痕提供了新的思路和方法。目的:通过网络药理学和分子对接技术探讨植物来源β-谷甾醇作用于增生性瘢痕成纤维细胞的潜在分子机制,并通过细胞学实验进行初步验证。方法:通过网络药理学方法,利用相关数据库及软件筛选β-谷甾醇的药物靶点,获取增生性瘢痕相关疾病靶点,取交集得到β-谷甾醇作用于增生性瘢痕的潜在作用(交集)靶点,使用Cytoscape软件和STRING数据库构建“药物-靶点-疾病”网络和蛋白质互作网络(PPI),同时筛选出PPI中核心作用靶点。通过DAVID数据库对交集靶点进行GO生物学功能和KEGG通路富集分析,结合文献分析进一步确立与交集靶点关系密切的信号通路及核心靶点基因,应用AutoDock软件对β-谷甾醇和核心靶点蛋白进行分子对接。采用体外细胞实验验证β-谷甾醇对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡、细胞周期分布和核心靶点基因mRNA表达的影响。结果与结论:①β-谷甾醇和增生性瘢痕的交集靶点共56个,PPI网络中筛选出10个核心靶点:酪氨酸激酶(SRC)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、载脂蛋白E(APOE)、雌激素受体1(ESR1)、固醇调节元件结合转录因子1(SREBF1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、C-反应蛋白(CRP)、细胞间黏附分子1(ICAM1)和过氧化氢酶(CAT)。②结合文献报道和KEGG通路、GO功能分析结果,进一步认定MAPK信号通路与交集靶点关系密切,确定MAPK3(即为ERK1-MAPK)、CASP3、P53和肿瘤坏死因子为其核心靶点。③分子对接结果提示β-谷甾醇与核心靶点蛋白结合良好。④细胞实验结果表明,100μmol/L的β-谷甾醇能抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,降低线粒体膜电位、诱导细胞凋亡(P<0.01),使G1期细胞占比增加,S期细胞占比减少(P<0.05),同时上调CASP3、P53和肿瘤坏死因子mRNA表达(P<0.05),并下调MAPK3 mRNA表达(P<0.001)。⑤上述数据证实,β-谷甾醇可能通过激活肿瘤坏死因子通路,上调CASP3和P53的表达,诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,同时抑制ERK-MAPK通路使细胞周期阻滞从而降低增生性瘢痕成纤维细胞增殖活性。

基于网络药理学与分子对接探讨淫羊藿治疗类风湿性关节炎的作用机制

为了深入理解淫羊藿(Epimedium brevicornu Maxim.)治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制,采用网络药理学与分子对接技术进行分析。通过数据库及相关软件获取淫羊藿和RA的交集靶点蛋白,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络和“药材-成分-靶点”互作网络,对靶点蛋白进行富集分析,最后进行蛋白分子对接。结果表明,淫羊藿治疗RA的核心靶点蛋白可能为TNF、AKT1、TP53、ALB、SRC等;有效活性成分可能为β-谷甾醇、8-异戊烯基山奈酚、谷甾醇、山奈酚、木樨草素、槲皮素等;信号通路可能为癌症中的信号通路、脂质和动脉粥样硬化等;分子对接结果显示淫羊藿治疗RA的有效活性成分与靶点蛋白具有极好的结合活性。该研究证明淫羊藿治疗RA具有多成分、多靶点、多通路的特点,为实验研究和临床治疗提供了坚实的理论基础。

β-谷甾醇调控信号通路治疗乳腺癌的作用机制研究进展

乳腺癌是女性中最常见的癌症,并在女性癌症相关死亡的原因中排名第二。β-谷甾醇是当归等药用植物的主要活性成分,具有抗氧化、调节细胞周期、促进细胞凋亡和抗炎等作用,可通过调节雌激素、Wnt/β-catenin、PI3K/Akt、MAPK/ERK和NF-κB等信号通路发挥对乳腺癌的治疗作用。本研究旨在阐明β-谷甾醇在治疗乳腺癌中的作用机制,为其临床应用和新药研发提供理论基础。

基于代谢组学解析抗感水稻差异代谢物β-谷甾醇对褐飞虱的杀虫活性

本研究利用代谢组学筛选抗性水稻中有活性的代谢物质,为开发控制褐飞虱Nilaparvata lugens的绿色植物源农药开拓思路。基于水稻品种对褐飞虱有抗性的差异,采用生长发育和存活率比较方法,验证了水稻品种Mudgo和TN1对褐飞虱的抗性差异;通过代谢组学分析抗褐飞虱水稻Mudgo和感褐飞虱水稻TN1代谢物的不同,筛选了品种间有显著差异的物质β-谷甾醇和无显著差异的物质豆甾醇作为褐飞虱生测物质,进行存活率和适合度功能验证,明确其对褐飞虱的功能效应。褐飞虱在Mugdo和TN1两种水稻品种上的生命参数间存在显著差异,在Mudgo水稻上发育历期延长,体重、体长和存活率降低。代谢组学分析共检测到69种差异代谢物,主要为脂质(36%)、碳水化合物(23%)、氨基酸(19%)、次生代谢物质(14%)、核酸(6%)及其他物质(1%)等6大类物质。褐飞虱人工饲料添加剂生测数据显示,褐飞虱取食20.0μg/mL和500.0μg/mL浓度β-谷甾醇,雌虫体重显著降低;取食500.0μg/mL浓度β-谷甾醇,雄虫体重显著降低。此外,取食不同浓度豆甾醇对褐飞虱体重均无显著性影响。β-谷甾醇对褐飞虱的存活率有显著降低作用,而豆甾醇只有在4.0μg/mL、100.0μg/mL和500.0μg/mL浓度下有降低作用。确认了水稻品种Mudgo对褐飞虱有显著的抗性,可显著降低存活率,抑制生长。代谢组学筛选到的69种差异代谢物可作为抗褐飞虱绿色植物源农药的备选库;其中,差异显著的代谢物质β-谷甾醇对褐飞虱体重和存活率有显著降低作用,可作为防治褐飞虱的植物源农药。

西康扁桃仁中β-谷甾醇检测方法的建立

西康扁桃仁中植物甾醇含量丰富,且以β-谷甾醇为主。通过高效液相色谱法检测波长、流动相配比、流速、柱温等条件,确定西康扁桃仁中β-谷甾醇含量测定的最佳条件为检测波长201 nm,流动相为100%甲醇,流速1.0 mL/min,色谱柱温度40℃。方法学考察结果表明,该方法线性关系良好,精密度、重复性及稳定性的RSD值均小于2.0%,平均加标回收率106.14%,该方法稳定可靠,可用于西康扁桃仁中β-谷甾醇的含量测定。

基于网络药理学和分子对接探讨梓木草抗炎作用机制

目的基于网络药理学和分子对接探讨梓木草抗炎的作用机制。方法2023年1—3月,首先利用网络药理学研究方法在文献中检索梓木草成分,并通过TCMSP数据库、PubChem数据库获取成分结构式及3D结构,同时将成分结构导入Swiss Target Prediction数据库中获取相应靶点。其次,在DisGeNET数据库、GeneCards数据库获取炎症的相关靶点,并利用微生信平台获取梓木草成分与炎症的共同基因靶点,采用Cytoscape3.9.0软件构建“梓木草-成分-潜在作用靶点-炎症”网络。再次,利用STRING数据库获取梓木草抗炎蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,DAVID平台进行基因本体(GO)分析及京都基因和基因组数据库(KEGG)信号通路富集分析,再采用Cytoscape3.9.0软件中的CytoHubba功能筛选出前十基因靶点。最后,通过Uniprot数据库、PDB数据库获取受体3D结构,通过AutoDock Vina 1.1.2进行分子对接,并用PyMOL 2.5软件将结果进行可视化呈现。结果从文献检索中获得梓木草β-谷甾醇、柯伊利素、木犀草素等9个成分,与炎症共有STAT3、ESR1、EGFR等51个共同靶点。GO富集分析和KEGG富集分析结果显示梓木草主要与RNA聚合酶Ⅱ启动子初始微RNA(pri-miRNA)转录的正向调节、炎症反应的负调节、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的负调节等生物过程和调控癌症的通路、化学致癌-受体活化、胰岛素抵抗等信号通路有关。分子对接结果显示有7个成分可与6NJS、1M17、2Q70等多个炎症蛋白结合。结论梓木草的抗炎作用可能通过多成分与多个炎症蛋白结合、多靶点调控多通路影响炎症反应。

β-谷甾醇通过PI3K/Akt信号通路减轻雄黄诱导的小鼠肝损伤

目的:探究β-谷甾醇对雄黄诱导的肝损伤小鼠的作用机制。方法:将36只小鼠分为对照组、模型组、阳性对照组(联苯双酯)、β-谷甾醇低剂量组、β-谷甾醇中剂量组和β-谷甾醇高剂量组,每组6只。除对照组小鼠外,其余各组小鼠建立雄黄诱导肝损伤模型,药物干预14 d后,苏木精-伊红(HE)染色检测肝组织损伤,检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST),ELISA检测血清炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL1-β)、IL-6]水平和肝组织氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)]水平,Western blot检测磷脂酰肌醇激酶3(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白表达。另取12只小鼠按随机数字表法随机分为蛋白激酶B(AKt)激活剂(SC79)组和SC79+β-谷甾醇组,每组6只,采用PI3K/AKT通路激活剂SC79干预后检测上述相同指标。结果:与模型组比较,阳性对照组、β-谷甾醇中剂量组和β-谷甾醇高剂量组小鼠肝组织损伤均有不同程度改善,血清ALT、AST、TNF-α、IL1-β、IL-6、肝组织MDA水平均降低(P<0.05),肝组织SOD、GSH-Px升高(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/Akt、p-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/mTOR均降低(P<0.05),β-谷甾醇可逆转Akt激动剂SC79干预后上述指标变化的加剧(P<0.05)。结论:β-谷甾醇可改善雄黄诱导肝损伤小鼠肝功能,减轻肝脏炎性反应和氧化应激,对肝组织具有保护作用,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路激活相关。

基于信号通路探讨青黛治疗溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种慢性非特异性炎症,中医药对UC的疗效确切。中药青黛发挥多靶点、复发率低、毒副作用较小的独特优势,对UC有较快缓解作用。青黛治疗UC微观分子机制可能涉及芳香烃受体/白介素-22(aryl hydrocarbon receptor/interleukin-22,AhR/IL-22)、核因子—红细胞2型相关因子/血红素氧合酶-1(nuclear factor erythroid 2-related factor 2/heme oxygenase-1,Nrf2/HO-1)、Janus激酶/信号转导和转录激活因子3(janus kinase/signal transducer and activator of transcription 3,JAK/STAT3)、转化生长因子β/Smad(transforming growth factorβ,TGF-β/Smad)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、核因子-κB(nuclearfactor kappa-B,NF-κB)7条信号通路。大量动物实验、细胞实验证明,青黛及活性成分可通过直接作用于AhR然后激活AhR/IL-22信号通路,调节免疫反应,加强肠黏膜屏障功能;通过Nrf2/HO-1信号通路发挥抗氧化应激保护肠道屏障;通过JAK/STAT3信号通路调节辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞免疫平衡;通过NF-κB、MAPK信号通路发挥抗炎、抗细胞焦亡、保护紧密连接屏障作用;通过PI3K/Akt信号通路调节凋亡蛋白表达,预防UC相关癌症进展;通过TGF-β/Smad信号通路调节炎症因子,预防肠道纤维化等。现代分子生物学研究证实青黛及主要成分可通过调节相关信号通路相关分子的表达,降低肠道细胞的异常凋亡、分化及相关炎性因子的转录与释放,改善肠道稳态,加速溃疡愈合。本综述系统阐述青黛通过各信号通路调节机体免疫反应治疗UC,充分挖掘青黛活性成分及方剂的作用机制,为中医药发展提供理论基础。

β-谷甾醇对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响

目的探究β-谷甾醇对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响及其对磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)信号通路的调控作用。方法体外培养结肠癌细胞HCT116并分为β-谷甾醇高(240μmol/L)、中(120μmol/L)、低剂量(60μmol/L)组,设置空白对照组(0μmol/L)。应用不同浓度的β-谷甾醇处理HCT116细胞。24h后应用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测β-谷甾醇对HCT116细胞增殖的影响,并在显微镜下观察细胞的形态变化;应用Hoechst 33342细胞核染色法检测β-谷甾醇对HCT116细胞凋亡的影响;应用细胞克隆集落形成实验检测HCT116细胞的集落形成能力;应用蛋白质印迹技术检测HCT116细胞中PI3K、磷酸化Akt、Akt、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax等相关蛋白的表达情况;利用AutoDock软件实现β-谷甾醇与PI3K和Akt蛋白的分子对接。结果与对照组比较,β-谷甾醇可浓度依赖性地抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,抑制细胞的集落形成能力,促进细胞的凋亡;抑制HCT116细胞中磷酸化Akt、PI3K、Bcl-2蛋白的表达,促进Bax蛋白的表达;β-谷甾醇与PI3K、Akt蛋白的结合均较为稳定。结论β-谷甾醇可通过抑制PI3K/Akt信号通路调节HCT116细胞的增殖与凋亡。

基于网络药理学探讨新止骨增生丸治疗膝骨关节炎的作用机制

目的 运用网络药理学方法探索新止骨增生丸治疗膝骨关节炎(KOA)的潜在作用机制。方法 利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库筛选新止骨增生丸的活性成分及其作用靶点;利用GeneCards、OMIM和DisGeNet数据库检索KOA疾病的相关靶点;通过Venny 2.1.0在线平台对新止骨增生丸的活性成分作用靶点与KOA疾病相关靶点映射取交集,得到新止骨增生丸治疗KOA的关键靶点(共同靶点);将共同靶点导入String平台构建蛋白相互作用(PPI)网络,并将结果导入Cytoscape 3.7.1软件进行拓扑分析,提取核心靶点;运用注释、可视化和集成发现(DAVID)数据库对核心靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并利用Cytoscape 3.7.1软件构建“活性成分-关键靶点-通路”网络。结果 共获得活性成分54个,对应靶点262个,疾病靶点2459个,共同靶点142个,经过蛋白互作及拓扑分析,得到核心靶点13个, GO功能富集分析得到821个生物过程(BP), 94个细胞组分(CC), 139个分子功能(MF)和167条通路(P<0.05)。将“活性成分-核心靶点-通路”网络图进行拓扑分析,共筛选出槲皮素、β-谷甾醇、木犀草素、山柰酚等12个核心成分,以及肿瘤坏死因子(TNF)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、白细胞介素-6(IL-6)、血管内皮生长因子A (VEGFA)、白细胞介素-1β(IL-1β)等16个关键靶点。结论 新止骨增生丸可能通过槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚等主要活性成分,作用于AKT1、TNF、VEGFA等核心靶点,通过高级糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)、TNF等信号通路,协同发挥对KOA的治疗作用。

化湿败毒方抗COVID-19和MERS、SARS作用机制分析:基于网络药理学和分子对接技术

目的:采用网络药理学和分子对接技术探讨化湿败毒方发挥对新型冠状病毒感染(COVID-19)和中东呼吸综合征(MERS)、严重急性呼吸综合征(SARS)治疗作用的主要成分、作用靶点和信号通路,阐释其共性作用机制。方法:采用TCMSP数据库和UniProt数据库筛选化湿败毒方的主要成分及其作用靶点,使用Cytoscape 3.8.2构建“化合物-靶点(基因)”网络图;在GeneCards数据库中搜集“COVID-19”和“MERS”“SARS”相关靶点,通过Venny 2.1.0数据库映射筛选出COVID-19和MERS、SARS的共有靶点;将上述共有靶点与化湿败毒方中的化合物靶点取交集筛选出共同靶点作为研究靶点;将共同靶点导入STRING数据库获取数据后,使用Cytoscape 3.8.2构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;采用R语言进行GO生物学功能富集分析及KEGG信号通路富集分析,绘制柱状图及气泡图进行可视化分析,并构建“药物-成分-靶点-通路”网络图;选取“药物-成分-靶点-通路”网络中的关键化合物及阳性对照药分别与新型冠状病毒(SARS-CoV-2)3CL水解酶、血管紧张素转化酶II(ACE2)进行分子对接。结果:通过对化湿败毒方进行筛选得到120个活性化合物,125个作用靶点;COVID-19相关靶点4585个,MERS相关靶点2145个,SARS相关靶点4556个,三者共有靶点1210个,与化湿败毒方的共同靶点27个,其中10个核心靶点为AKT1、VEGFA、HIF1A、STAT3、CASP8、JUN、TP53、CASP3、AR、IL1B。GO功能富集分析得到生物进程(BP)1864个,分子功能(MF)113种,细胞组分(CC)32种;KEGG富集分析共得到137条信号通路(P<0.05),主要有甲型流感(Influenza A)、人巨细胞病毒感染(Human cytomegalovirus infection)、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染(Kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection)等病毒感染通路以及核苷酸寡聚结构域样受体(NOD-like receptor signaling pathway)、白介素-17(IL-17 signaling pathway)、肿瘤坏死因子(TNF signaling pathway)等炎症信号通路。分子对接结果显示化湿败毒方中β-谷固醇、黄芩素、汉黄芩素、芒柄花黄素4种核心活性化合物与SARS-CoV-23CL水解酶及ACE2具有较好的结合活性,并且结合体构象稳定。结论:化湿败毒方对SARS、MERS和COVID-19具有潜在共性作用,该作用可能与活性化合物β-谷固醇、黄芩素、汉黄芩素、芒柄花黄素等作用于AKT1、CASP8、JUN、TP53、CASP3、IL1B等靶点,调节AGE-RAGE、IL-17、TNF、NOD-样受体等多种信号通路发挥抑制炎症风暴、调节免疫功能、抗病毒等作用。

超声波萃取苦荬菜叶中β-谷甾醇的工艺优化及其动态积累

为优化超声波辅助提取蒙早苦荬菜(Lactuca indica L.cv. Mengzao)叶中β-谷甾醇的工艺条件,并探究不同生长期叶中β-谷甾醇的含量,本研究采用超声波辅助乙醇提取法,以料液比、超声频率、提取温度和提取时间为影响因素,以β-谷甾醇提取率为考核指标,采用单因素试验法和Box-Behnken方法优化了β-谷甾醇提取工艺,并测定了不同生育阶段蒙早苦荬菜叶的β-谷甾醇含量。结果表明:蒙早苦荬菜叶中β-谷甾醇的最佳提取工艺为提取时间20 min、温度60℃、频率80 KHz、料液比为1∶30 g·mL^(-1)。在此条件下,提取量达到最高,为12.08 mg·g^(-1)。各因素对苦荬菜中β-谷甾醇提取量的影响大小顺序为:料液比>时间>频率>温度。对不同生育期(幼嫩期、营养生长期、开花初期、开花中期、开花末期、结实期)蒙早苦荬菜叶片的β-谷甾醇提取量进行分析发现,开花初期为最佳收获期,β-谷甾醇提取量最高,达13.22 mg·g^(-1)。目前,β-谷甾醇多应用于医疗领域,但都处于探索阶段,仍需进行更为深入系统的研究。

柳叶白前不同蜜制方法对体外溶出度的影响研究

目的建立柳叶白前质量标准,评价不同蜜炙方法对柳叶白前体外溶出度的影响。方法采用高效液相色谱法。(1)胡萝卜苷和β-谷甾醇含量测定方法:色谱柱:Dia-monsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇:0.05%磷酸水(99∶1)。等度洗脱;流速1.0 mL·min^(-1);检测波长209 nm;进样量10μL;柱温30℃。(2)葡萄糖果糖测定方法:色谱柱为Inspire NH2糖分析专用柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-水(77:23)为流动相;流速为0.8 mL·min^(-1);柱温为35℃;进样量10μL;蒸发光散射检测器(ELSD):漂移管温度为100℃,载气流速为2.8 L·min^(-1)。结果(1)结果显示胡萝卜苷和β-谷甾醇成分的测定在质量浓度范围内呈现良好的线性关系(r>0.9999),平均加样回收率为99.71%和98.83%,精密度、稳定性、重复性RSD均小于2.0%。(2)葡萄糖果糖建立的方法在0.05-0.5 mg·mL^(-1)(r=0.9991)范围内,呈良好的线性关系。结论该研究含量测定方法及体外溶出度实验方法学考察结果符合要求,为制定蜜炙柳叶白前质量标准和现代研究提供了科学依据。

中药药用成分β-谷甾醇的预测及其对辐照宫颈癌细胞增殖与迁移的影响

目的预测宫颈癌差异基因的靶向中药关键药用成分,并分析其对辐照宫颈癌细胞增殖与迁移的影响。方法通过Coremine Medical、TCMSP、Uniprot以及Cytoscape数据库查找宫颈癌差异基因靶向中药及其药用成分和对应靶点,并筛选出核心靶点和关键药用成分。通过STRING数据库分析关键药用成分对应靶点基因与宫颈癌差异基因的蛋白互作。采用MTT、细胞划痕实验和Western blotting实验检测关键药用成分对辐照前后宫颈癌HeLa、Siha细胞增殖、迁移和DNA断裂水平的影响。结果共预测出宫颈癌差异基因的有效靶向中药9种。共得到96种药用成分和252个靶点基因,其中关键药用成分为β-谷甾醇,并筛选出其对应的核心靶点基因10个。β-谷甾醇的相关核心靶点基因与宫颈癌差异基因表达蛋白存在互作。β-谷甾醇抑制辐照前后宫颈癌细胞的增殖与迁移,促进宫颈癌HeLa细胞以及Siha细胞的DNA断裂水平。结论预测宫颈癌差异基因的靶向中药关键药用成分为β-谷甾醇,其可抑制辐照宫颈癌细胞的增殖与迁移。