胃癌患者HLA-I、B7-1、β_2m的表达

目的 探讨HLA I、β2 m、B7 1分子在肿瘤发生、发展中的作用。方法 流式细胞技术检测胃肿瘤细胞和外周血淋巴细胞HLA I、β2 m、B7 1分子的表达 ;放射免疫技术 (RIA)检测血清中 β2 m的含量。结果 ①胃癌细胞表面HLA I分子表达明显降低。②胃癌细胞表面B7 1分子表达明显降低或缺如。③β2 m在肿瘤细胞上的表达明显增高 ;作相关分析发现 ,β2 m与HLA I的表达呈负相关关系 (r=- 0 4 70 ,P <0 0 5 )。④在外周血淋巴细胞上各指标的表达情况 ,HLA I表达丰富 ,胃癌患者与正常人之间无显著性差异 ;B7 1的表达微弱 ,胃癌患者的表达低于正常人 ;β2 m的表达丰富 ,胃癌患者的表达高于正常人 ;⑤血清中 β2 m的含量 ,胃癌患者高于正常人 ,血清中 β2 m的含量与外周血淋巴细胞β2 m表达有正相关关系 (r=0 5 4 6 ,P <0 0 5 )。结论 肿瘤细胞低表达HLA I和B7分子是肿瘤发生、发展的重要机制 ;β2 m在肿瘤的诊断、治疗和预后判断有一定价值。

TGF-β_1对INF-γ诱导肺鳞癌细胞β_2-M表达的影响

目的 探讨TGF β1 对肺鳞癌细胞MHCⅠ类抗原表达的影响。方法 以原代培养的人肺鳞癌细胞为对象 ,采用免疫荧光法 ,通过流式细胞仪分别检测加入rhINF γ及rhTGF β1 +rhINF γ肺鳞癌细胞 β2 M的表达状况。结果 rhINF γ能显著诱导肺鳞癌细胞 β2 M的表达 (P <0 0 1) ,但这种诱导作用在各组癌细胞中均能被rhTGF β1 显著抑制 (P <0 0 1) ,且与其分化程度无关。结论 TGF β1 对INF γ诱导人肺鳞癌细胞MHCⅠ类抗原表达有明显抑制作用。

大肠杆菌表达的重组人BMP-2和hBMP-4成熟肽大规模制备方法的比较

目的:大规模制备人骨形成蛋白成熟肽(hBMP-m):hBMP-4m和hBMP-2m.方法:两种工程菌株分别含有能够高表达hBMP-4m和hBMP-2m的质粒,分别导入15 L NBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵和诱导表达,离心收集菌体,悬浮所收集的菌体,裂菌,洗涤4次.预先取少量样品进行探索实验后,全部包涵体分别用8 mol/L尿素缓冲液溶解,上Sepharose SP-FF阳离子柱.结果:发酵菌液A600 nm值分别为28.8和26.3.SOS-PAGE电泳后吸光度扫描表明hBMP-4m占细菌总蛋白量的40.0%,hBMP-2m占细菌总蛋白量的47.2%.洗涤4次后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的82.9%,hBMP-2m占蛋白量的84.5%.上Sepharose SP-FF阳离子柱后,分别收集0.35 mol/L NaC l和0.20 mol/L NaC l洗脱部分,获得纯度为96%的hBMP-4m及纯度为95%的hBMP-2m.其收获量分别为1.30 g/L发酵液和1.25 g/L发酵液;收得率分别为34.33%和34.81%.结论:大规模制备hBMP-4m和hBMP-2m时,使用相同的发酵程序及相近的纯化方法,都能够得到较好的收得率、较高的收获量和纯度.

癌胚抗原和β-2微球蛋白联合测定在监测大肠癌术后复发的意义

为考察癌胚抗原（CEA）和β-2微球蛋白（β-2M）联合测定在监测大肠癌术后复发的意义。对110例大肠癌根治术后的患者定期测定CEA和β-2M，在此期间，有21例复发，其中局部复发9例，肝、肺转移9例，其他部位转移3例。CEA阳性阈值为10mg／L，β-2M为2．2mg／L。CEA敏感性为47．6％，特异性92．1％，β-2M敏感性为42．9％，特异性66．3％，CEA和β-2M联合检测，其敏感性为57．1％，CEA和β-2M在肝、肺转移的患者中敏感性较高，分别为77．8％和66．7％。提示CEA和β-2M至少能监测50％以上的术后复发的大肠癌患者，对肝肺转移敏感性高。

人β_2m转基因小鼠的制备及鉴定(英文)

制备人 β2m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4基因的表达 .应用显微注射将人 β2m基因注入C5 7BL 6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 .出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本进行进一步鉴定和测定整合拷贝数 ,利用RT PCR检测阳性鼠中人 β2m转基因的表达 .6只原代仔鼠及 7只它们的下一代鼠 (F1)带有人 β2m基因 .由微注射基因后移卵出生的 86只小鼠中 ,C5 7BL 6×昆明鼠杂交仔鼠 35只 ,其中 4只阳性 (11 4 % ) ,昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠 5 1只 ,其中 2只阳性 (3 9% ) ,含有人 β2m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠 2 0只 ,其中 7只阳性 .整合的转基因均为单拷贝 .Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人β2m转基因mRNA的表达 .在转基因动物制备中 ,C5 7BL 6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代 .与人HLA B2 70 4基因相比 ,人 β2m基因不易整合 ,其整合率与整合拷贝数均较低 .得到的人 β2m转基因小鼠能够将人 β2m基困传给下一代 ,并可与人HLA B2 70 4转基因鼠交配 。

小鼠β_2m反义核酸重组荧光蛋白表达载体的构建及表达研究

本研究应用分子生物学技术 ,构建小鼠 β2 m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP β2 mAN ,经过酶切、PCR鉴定 ,以及序列分析证实克隆的正确性。然后用脂质体转染NIH3T3细胞 ,经过RT PCR及Westernblot检测 ,观察重组质粒对细胞β2 mmRNA和蛋白表达的影响 ,同时在荧光显微镜下直接观察细胞转染的结果。结果证明pEGFP β2 mAN已成功导入NIH3T3细胞中 ,且有效表达 ,在荧光显微镜下可见梭形绿色荧光细胞 ;与同步转染的小鼠 β2 m正、反义核酸表达载体pcDNA3 β2 mSN、pcDNA3 β2 mAN的转染结果一起进行分析 ,转染pcDNA3 β2 mSN细胞的 β2 mmRNA和蛋白表达水平升高 ,而转染pcD NA3 β2 mAN和pEGFP β2 mAN的细胞 β2 mmRNA和蛋白表达水平降低。小鼠 β2 m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP β2 mAN的转染结果显示 :它不但可以降低NIH3T3细胞 β2 m基因的表达 ,而且为观察脂质体转染效果提供了直观。