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提高源自Bacillus circulans 251的β-CGTase对麦芽糖亲和性及其在生产海藻糖中的应用
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作者 杜立 宿玲恰 吴敬 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期96-104,共9页
将B. circulans 251β-CGTase应用于海藻糖制备,海藻糖转化率从50. 4%提高至71. 9%。为进一步提高底物的转化率,运用易错PCR-高通量筛选技术筛选对以麦芽糖为歧化反应受体的亲和性提高的B. circulans 251β-CGTase突变体。利用低底物浓... 将B. circulans 251β-CGTase应用于海藻糖制备,海藻糖转化率从50. 4%提高至71. 9%。为进一步提高底物的转化率,运用易错PCR-高通量筛选技术筛选对以麦芽糖为歧化反应受体的亲和性提高的B. circulans 251β-CGTase突变体。利用低底物浓度的96孔板4,6-亚乙基-对硝基苯-α-D-麦芽七糖苷(EPS)显色法,最终筛选得到了一株对麦芽糖亲和性提高的突变体M234I。将野生型β-CGTase和突变体酶M234I进行蛋白质纯化,测定其酶学性质。结果表明,突变体的比活为345. 25U/mg,野生型则为357. 63U/mg;突变体M234I对麦芽糖的K_m为0. 258 2mmol/L,仅为野生型(0. 474 9mmol/L)的54. 4%,对麦芽糖的亲和性显著提高;突变体的最适温度、最适p H较野生型未发生较大变化。以麦芽糊精(DE值16)为底物,将突变体M234I用于多酶复配体系生产海藻糖,酶反应结果表明海藻糖的转化率最高达74. 9%,较野生型β-CGTase提高约3%。 展开更多
关键词 β-cgtase 易错PCR 分子改造 亲和性 海藻糖转化
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易错PCR技术改造β-环糊精葡萄糖基转移酶的催化特性
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作者 郑婉 刘振杨 +2 位作者 郑金珠 武国干 吴华伟 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2023年第5期25-31,共7页
β-环糊精是一种环状多糖,可用于改变某些大分子化合物的理化性质,在食品、生物及医药等领域都具有很高的工业应用前景。通过利用β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase),使其作用于淀粉等含有葡萄糖基的多糖化合物,可转化生成β-环糊精。... β-环糊精是一种环状多糖,可用于改变某些大分子化合物的理化性质,在食品、生物及医药等领域都具有很高的工业应用前景。通过利用β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase),使其作用于淀粉等含有葡萄糖基的多糖化合物,可转化生成β-环糊精。该研究采用易错PCR技术对来源于Paenibacillus campinasensis的β-CGTase进行定向进化,得到酶活力高的突变体,并对突变体进行镍柱亲和纯化与酶学性质分析。实验最终获得了一株突变体Q280L,其酶活力与原始β-CGTase相比提高了42.10%,对β-环糊精的转化率提高了7.60%,最适反应pH值和稳定性均有所变化,底物亲和力提高46.13%。经序列比对及结构分析,发现突变体Q280L与野生β-CGTase相比,第280位氨基酸残基种类以及周围氢键发生变化。该试验结果表明,基于易错PCR技术对β-CGTase基因进行定向进化,可提高酶活力和改善酶学性质,为实现β-环糊精的工业生产提供参考意义。 展开更多
关键词 Paenibacillus campinasensis β-cgtase 定向进化 易错PCR 酶学性质
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环糊精葡萄糖基转移酶工业发酵染菌(Bacillus cohnii strain PGRS7)的鉴定及防治 被引量:2
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作者 李皎 杨国武 +3 位作者 段梦露 邓媛 毛勇 刘清利 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第4期40-44,共5页
环糊精生产厂家β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltransferase,β-CGTase)发酵过程中频繁染菌,为解决这一问题,从发酵异常的发酵液中分离得到1株不产酶的杂菌H03S。研究杂菌发酵过程中的菌体密度、pH值、酶活等指标,发... 环糊精生产厂家β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltransferase,β-CGTase)发酵过程中频繁染菌,为解决这一问题,从发酵异常的发酵液中分离得到1株不产酶的杂菌H03S。研究杂菌发酵过程中的菌体密度、pH值、酶活等指标,发现杂菌生长速度明显低于正常菌,发酵液pH值下降速度也慢于正常菌。结合厂家实际生产情况分析:若发酵过程规范操作,则正常菌会优先形成生长优势,抑制杂菌生长;如果发酵罐实消后放置时间过长或者突发停电导致发酵终止后重新启动,杂菌会形成优势菌群,降低发酵液pH值,不利于正常菌的增殖。16S rDNA鉴定杂菌序列与正常菌不同,应归属于Bacillus cohnii strain PGRS7。因此,发酵前应预先采用16S rDNA分析鉴定菌种,排除杂菌,避免发酵中断和延迟,防止发酵染菌。 展开更多
关键词 β-环糊精葡萄糖基转移酶 Β-环糊精 16S rDNA 发酵 染菌
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大肠杆菌BL21(DE3)生产β-环状糊精转移酶发酵条件的优化 被引量:1
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作者 宋拓 李俊俊 +7 位作者 唐湘华 谢振荣 张学林 王秋云 许波 周峻沛 慕跃林 黄遵锡 《中国酿造》 CAS 2013年第4期52-57,共6页
采用正交试验确定大肠杆菌BL21(DE3)产β-环糊精转移酶的发酵条件。结果表明,生产β-环状糊精转移酶的最适条件为:接种量1%,100mL三角瓶装液量15mL,初始pH值为7.0,Ca2+浓度为1.25mmol/L,Mg2+浓度为2.50mmol/L,温度控制在37℃,转速控制为... 采用正交试验确定大肠杆菌BL21(DE3)产β-环糊精转移酶的发酵条件。结果表明,生产β-环状糊精转移酶的最适条件为:接种量1%,100mL三角瓶装液量15mL,初始pH值为7.0,Ca2+浓度为1.25mmol/L,Mg2+浓度为2.50mmol/L,温度控制在37℃,转速控制为150r/min。当OD600达到1.4时,加入终浓度5.0g/L的α-乳糖,转速提高至170r/min,37℃诱导12h后过滤,β-CGTase酶活最高可达16.3μ/mL。 展开更多
关键词 发酵条件 β-环状糊精转移酶 重组大肠杆菌 优化
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基于响应面法优化HY15发酵生产β-环糊精葡萄糖基转移酶的发酵条件 被引量:2
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作者 曹冬梅 胡耀辉 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期97-100,共4页
为了提高β-环糊精葡萄糖基转移酶产酶活力,应用Plackett-Burman设计法对影响高温菌株HY15发酵的10个因素进行了筛选,确定了主要影响因素,然后通过响应面法优化了各因素的最优质量浓度,建立了β-环糊精葡萄糖基转移酶产率的二次多项式... 为了提高β-环糊精葡萄糖基转移酶产酶活力,应用Plackett-Burman设计法对影响高温菌株HY15发酵的10个因素进行了筛选,确定了主要影响因素,然后通过响应面法优化了各因素的最优质量浓度,建立了β-环糊精葡萄糖基转移酶产率的二次多项式数学模型,并分析了模型的有效性与因子间的交互作用。结果表明:影响β-环糊精葡萄糖基转移酶产率的主要因素及其最优质量浓度为:糖蜜+玉米淀粉22.45 g/L,K2HPO40.97 g/L,MgSO40.18 g/L,玉米浆+酵母21.82 g/L,pH值6.98。在优化后的培养基条件下,β-环糊精葡萄糖基转移酶酶活力达到1 409.70 U/mL,验证值1401.81 U/mL,二者吻合较好。 展开更多
关键词 β-环糊精葡萄糖基转移酶 高温菌株HY15 响应面法 发酵
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响应面分析法优化β-环糊精的制备工艺 被引量:7
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作者 宋拓 李俊俊 +7 位作者 唐湘华 谢振荣 张学林 钏会艳 许波 周峻沛 慕跃林 黄遵锡 《中国酿造》 CAS 2013年第1期84-89,共6页
该文对β-环糊精制备工艺用响应面分析法优化进行了研究。结果表明,生产β-环糊精的最佳条件是选取木薯淀粉作为底物,不经过预处理,环状糊精葡萄糖基转移酶添加量是7U/g,环己烷的添加量0.5mL/g,体系CaCl2的浓度是50mmol/L,pH值8.25,温度... 该文对β-环糊精制备工艺用响应面分析法优化进行了研究。结果表明,生产β-环糊精的最佳条件是选取木薯淀粉作为底物,不经过预处理,环状糊精葡萄糖基转移酶添加量是7U/g,环己烷的添加量0.5mL/g,体系CaCl2的浓度是50mmol/L,pH值8.25,温度63.72℃,反应时间9.04h,产率可达51.98%。优化后的生产工艺和传统工艺相比,反应时间缩短了5h,并且产率增高了1.13倍。 展开更多
关键词 环状糊精葡萄糖基转移酶 响应面分析法 Β-环糊精 生产工艺
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环状糊精葡萄糖基转移酶的性质及环糊精的转化条件 被引量:1
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作者 张心平 张蓓 李翠玲 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1994年第4期63-67,共5页
由嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalcalophilus)NK231产生的环状糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)经变性淀粉吸附初步纯化后,酶活性最适pH为6.5-8.0;最适温度60℃;典型生物抑制剂,如苯甲基磺氟酸... 由嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalcalophilus)NK231产生的环状糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)经变性淀粉吸附初步纯化后,酶活性最适pH为6.5-8.0;最适温度60℃;典型生物抑制剂,如苯甲基磺氟酸酯(PMSF)、对氯高汞苯甲酸(PCMB)、乙二胺四乙酸(EDTA)等不能抑制CGTase的活性;而一些金属离子如Zn2+、Co2+、Fe3+等对CGTase活性有较强抑制作用。以5%玉米淀粉为底物,酶用量400u/克作转化试验,12h时环糊精产量可达33.5%。产品经质谱分析表明为β─环糊精。 展开更多
关键词 环状糊精 葡萄糖基转移酶 Β-环糊精
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Biosynthesis of raw starch degradingβ-cyclodextrin glycosyltransferase by immobilized cells of Bacillus licheniformis using potato wastewater
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作者 YASSER S.MOSTAFA SAAD A.ALAMRI +4 位作者 SULIMAN A.ALRUMMAN TAREK H.TAHA MOHAMED HASHEM MAHMOUD MOUSTAFA LAMIAA I.FAHMY 《BIOCELL》 SCIE 2021年第6期1661-1672,共12页
The study was sought to enhance the synthesis of thermal stableβ-cyclodextrin glycosyltransferase(β-CGTase)using potato wastewater as a low-cost medium and assess the degree to which it is efficient for industrial p... The study was sought to enhance the synthesis of thermal stableβ-cyclodextrin glycosyltransferase(β-CGTase)using potato wastewater as a low-cost medium and assess the degree to which it is efficient for industrial production ofβ-cyclodextrin(β-CD)from raw potato starch.Thermophilic bacteria producingβ-CGTase was isolated from Saudi Arabia and the promising strain was identified as Bacillus licheniformis using phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene.Alginate-encapsulated cultures exhibited twice-fold ofβ-CGTase production more than free cells.Scanning electron microscopy(SEM)of polymeric capsules indicated the potential for a longer shelf-life,which promotes the restoration of activity in bacterial cells across semi-continuous fermentation ofβ-CGTase production for 252 h.The optimal conditions forβ-CGTase synthesis using potato wastewater medium were at 36 h,pH of 8.0,and 50°C with 0.4%potato starch and 0.6%yeast extract as carbon and nitrogen sources,respectively.The purified enzyme showed a specific activity of 63.90 U/mg with a molecular weight of∼84.6 kDa as determined by SDS-PAGE analysis.The high enzyme activity was observed up to 60°C,and complete stability was achieved at 75°C.High levels of activity and stability were shown at pH 8.0,and the pH range from 7.0–10.0,respectively.The enzyme has an appreciable affinity for raw potato starch with a Km of 5.7×10−6 M and a Vmax of 87.71μmoL/mL/min.β-CD production was effective against 25 U/g of raw potato starch.The outcomes demonstrated its feasibility to develop a fermentation process by integrating the cost-effective production ofβ-CGTase having distinctive properties forβ-CD production with ecofriendly utilization of potato wastewater. 展开更多
关键词 Potato wastewater Bacillus licheniformis β-cgtase 16S rDNA gene Semi-continuous fermentation Β-CYCLODEXTRIN
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无机溶剂法制备β-环糊精的工艺研究
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作者 王超凡 宋拓 +7 位作者 丁俊美 于婷婷 李俊俊 唐湘华 谢振荣 张学林 高光敏 黄遵锡 《中国酿造》 CAS 2013年第11期112-117,共6页
对一种无机溶剂酶催化生产β-环糊精的工艺进行研究,并采用响应面实验法确定了生产β-环糊精的适宜工艺条件,为其开发研究应用提供参考。实验结果表明,生产β-环糊精的最佳条件是选取木薯淀粉作为底物,不经过预处理,环状糊精葡萄糖基转... 对一种无机溶剂酶催化生产β-环糊精的工艺进行研究,并采用响应面实验法确定了生产β-环糊精的适宜工艺条件,为其开发研究应用提供参考。实验结果表明,生产β-环糊精的最佳条件是选取木薯淀粉作为底物,不经过预处理,环状糊精葡萄糖基转移酶添加量是4U/g,CaCl2的浓度为30mmol/L,pH7.88,温度63.67℃,反应时间17.24 h,产率可达24.02%。生产工艺和传统工艺相比,产率明显增高,提高了生产效率。 展开更多
关键词 环状糊精葡萄糖基转移酶 无机溶剂法 Β-环糊精 生产工艺
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