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β-Chitin/Chitosan Obtained from Loligo and Humboldt Squids Effectiveness as Wound Dressing Material
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作者 JINDAN Rahim ZALAL Rahim +1 位作者 HUDSON Samuel KING W Martin 《Journal of Donghua University(English Edition)》 EI CAS 2013年第5期406-409,共4页
A number of materials are utilized to develop wound care dressing materials with metallic treatments such as ionic silver and zinc. Metallic ions if used for a prolonged time may lead to toxicity. Alternatively chitin... A number of materials are utilized to develop wound care dressing materials with metallic treatments such as ionic silver and zinc. Metallic ions if used for a prolonged time may lead to toxicity. Alternatively chitin,a natural polysaccharide found in nature, is utilized. It is found in fungi, crabs, mushrooms,squids, octopus, and many other living organisms. Chitin has similar structure to cellulose but its deacetylated derivate chitosan has amine groups that provide potential antibacterial properties along with a number of other advantages. Chitin in its natural form is found in three different structural forms,namely α,β,and γ.The β-chitin and chitosan are mostly found in the exoskeleton of squids. Loligo and Humboldt squids were studied. It is anticipated that Humboldt chitin is more effective in serving as antibacterial material and can be utilized for wound care. Differences in steriochemical structure were observed among β-chitin structures obtained and amine group's presences were found along with ability of materials to swell. 展开更多
关键词 β-chitin CHITOSAN wound DRESSING MATERIAL
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不同晶型甲壳素的季铵盐化研究 被引量:7
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作者 高艳丽 张虹 +3 位作者 吴奕光 白书欣 周莉 刘波 《功能高分子学报》 CAS CSCD 2004年第1期67-71,共5页
 在完全水体系中对α、β两种不同晶型结构的甲壳素进行季铵盐化改性,获得了具有不同取代度甲壳素羟丙基三甲基季铵盐衍生物;对其结构进行了比较系统的分析表征;结果表明:β 甲壳素较α 甲壳素具有更高的非均相反应活性。
关键词 甲壳素 晶型 季铵盐化 化学改性 取代度 非均相反应活性 完全水体系
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鱿鱼顶骨β-甲壳素的化学反应活性及其与α-甲壳素的比较 被引量:3
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作者 董炎明 阮永红 +3 位作者 吴玉松 王勉 丘蔚碧 许聪义 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第3期490-495,共6页
研究了由鱿鱼顶骨提取的β-甲壳素和β-壳聚糖分别对 O-丙酰化 (非均相反应 )和 N-乙酰化 (均相反应 )的反应活性 ,并与 α-甲壳素 /壳聚糖进行了比较 .结果表明 ,β-甲壳素的反应活性比 α-甲壳素差 .β-甲壳素经水磨微纤化后 ,丙酰化... 研究了由鱿鱼顶骨提取的β-甲壳素和β-壳聚糖分别对 O-丙酰化 (非均相反应 )和 N-乙酰化 (均相反应 )的反应活性 ,并与 α-甲壳素 /壳聚糖进行了比较 .结果表明 ,β-甲壳素的反应活性比 α-甲壳素差 .β-甲壳素经水磨微纤化后 ,丙酰化反应活性虽然显著提高 ,但仍低于 α-甲壳素 .本文用偏光显微镜和电子显微镜首次观察到微纤化的 β-甲壳素中可以分辨出 4个层次的纤维状结构 ,它们分别是微纤束、微纤、细微纤和原纤 ,直径分别为 1 0 1 ,1 0 0 ,1 0 - 1 和 1 0 - 2 μm数量级 .由于暴露出各层次微纤上更多的自由羟基 。 展开更多
关键词 甲壳素 壳聚糖 β-甲壳素 化学反应活性 α-甲壳素 鱿鱼顶骨 结构
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β-甲壳质及其脱乙酰衍生物的特性 被引量:8
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作者 蒋霞云 王慥 李兴旺 《上海水产大学学报》 CSCD 2002年第4期348-352,共5页
对β-甲壳质及其脱乙酰衍生物的特性与α-甲壳质及其脱乙酰衍生物进行了比较研究。结果表明:红外光谱和X-衍射图谱都可以用来表征甲壳质,但只有X-衍射图谱可以区分其α和β型结构;β-壳聚糖和α-壳聚糖在高浓度(大于0.01%)时对金黄色... 对β-甲壳质及其脱乙酰衍生物的特性与α-甲壳质及其脱乙酰衍生物进行了比较研究。结果表明:红外光谱和X-衍射图谱都可以用来表征甲壳质,但只有X-衍射图谱可以区分其α和β型结构;β-壳聚糖和α-壳聚糖在高浓度(大于0.01%)时对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有明显的抑菌作用,而在低浓度(0.001%)下,由于本试验所用的β-壳聚糖兼有高粘度和高脱乙酰度,抑菌作用强于α-壳聚糖。 展开更多
关键词 脱乙酰衍生物 β-甲壳质 β-壳聚糖 红外光谱 X-衍射 抑菌作用 α-甲壳质
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蛹壳中提取甲壳素及微晶化晶体结构的研究 被引量:7
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作者 吴建一 谢林明 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第4期399-403,共5页
采用两段碱煮法从蚕蛹壳中提取甲壳素 ,NaOH的质量分数分别为 10 %和 5 % ,甲壳素的提取率为 4 5 %。分析了微晶甲壳素与甲壳素的反应活性 ,并对微晶甲壳素 ,原甲壳素及壳聚糖的溶解性、差示热、热重等进行了比较 ,依据两种甲壳素的红... 采用两段碱煮法从蚕蛹壳中提取甲壳素 ,NaOH的质量分数分别为 10 %和 5 % ,甲壳素的提取率为 4 5 %。分析了微晶甲壳素与甲壳素的反应活性 ,并对微晶甲壳素 ,原甲壳素及壳聚糖的溶解性、差示热、热重等进行了比较 ,依据两种甲壳素的红外光谱和差示量热分析的不同 ,提出了微晶化甲壳素可能的晶体结构模型。用甲壳素制备微晶甲壳素的得率为 89 6 %。 展开更多
关键词 蛹壳 甲壳素 晶体结构 NaOH 质量分数 提取率 微晶化处理 反应活性 溶解性 差示热 热重 红外光谱
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戊唑醇对赤霉病菌生长发育影响的细胞学和免疫细胞化学研究 被引量:11
6
作者 韩青梅 康振生 +1 位作者 黄丽丽 蒋选利 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期580-589,共10页
本文采用电子显微镜和免疫细胞化学技术研究了三唑类杀菌剂戊唑醇 (Tebuconazole) 对小麦赤霉病菌Fusarium graminearum菌丝的形态结构、细胞壁成份和毒素产生的影响。结果表明,戊唑醇不但强烈抑制了培养基上菌丝的生长,而且可引起菌丝... 本文采用电子显微镜和免疫细胞化学技术研究了三唑类杀菌剂戊唑醇 (Tebuconazole) 对小麦赤霉病菌Fusarium graminearum菌丝的形态结构、细胞壁成份和毒素产生的影响。结果表明,戊唑醇不但强烈抑制了培养基上菌丝的生长,而且可引起菌丝形态和结构的明显畸形。电镜观察发现,药剂处理后菌丝呈现不规则的肿胀、过度分枝;菌丝细胞壁不规则加厚,尤其是菌丝顶端部位加厚明显;菌丝形成的不完整隔膜增多,且隔膜壁不规则增厚;菌丝细胞内液泡增加、脂肪粒累积,细胞器排列紊乱,原生质最终坏死。有时在坏死菌丝内可发现新的子菌丝,但子菌丝细胞壁不规则加厚、细胞质坏死、也呈不正常状态,并可再度形成新的菌丝。免疫细胞化学标记表明,药剂处理后菌丝细胞中毒素的标记密度明显低于对照菌丝,表明毒素的产生受到了抑制;而菌丝细胞壁的主要成份几丁质和-1,3-葡聚糖的标记密度明显高于对照处理,表明药剂处理可引起菌丝细胞壁中几丁质和-1,3-葡聚糖的过度累积。 展开更多
关键词 超微结构 免疫标记 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON) 几丁质 Β-1 3-葡聚糖
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壳聚糖-硅胶固定化β-甘露聚糖酶方法的研究 被引量:6
7
作者 许牡丹 杨伟东 柯蕾 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期160-162,共3页
研究了壳聚糖—硅胶作为载体,戊二醛作为交联剂,对β-甘露聚糖酶进行固定化,通过实验对交联剂浓度、加酶量、吸附时间、吸附pH等能够影响固定化酶活力回收率的因素的研究和优化,得出最佳的固定化条件,并对固定化后的酶学性质作了初步研究。
关键词 甲壳素 Β-甘露聚糖酶 固定化
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三唑酮对玉米弯孢病菌超微结构和细胞化学的影响 被引量:4
8
作者 黄丽丽 康振生 +3 位作者 韩青梅 王兰 宗兆锋 古丽皮艳 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期226-233,共8页
三唑酮(triadimenfon)属于麦角甾醇类生物合成抑制剂(ergosterol biosynthesis inhibitors.EBI),具有较广的抗真菌谱,明确其对玉米弯孢菌发育的影响可为该杀菌剂的田间应用提供理论依据。利用电镜技术和细胞化学技术观察的结果表明,玉... 三唑酮(triadimenfon)属于麦角甾醇类生物合成抑制剂(ergosterol biosynthesis inhibitors.EBI),具有较广的抗真菌谱,明确其对玉米弯孢菌发育的影响可为该杀菌剂的田间应用提供理论依据。利用电镜技术和细胞化学技术观察的结果表明,玉米率孢菌经三唑酮处理后,菌丝生长明显受到抑制,表现为菌落生长速度减慢、菌丝分枝增多,且不观则地肿大和缢缩,出现许多瘤状突起,处理菌丝明显畸形。透射电镜观察结果表明,三唑酮可引起菌丝细胞壁不规则增厚,特别是菌丝顶端细胞壁增厚尤为明显:菌丝细胞隔膜发育受阴而表现畸形;菌丝细胞外有大量电子染色深的外渗物质。细胞化学标记定位结果表明,真菌细胞壁主要成分β-1,3-葡聚糖和几丁质的含量在药剂处理后发生很大变化,其标记密度明显低于未处理的对照菌丝,表明病菌细胞壁的结构和功能受到明显的不利影响。论文对弯孢菌受三唑酮影响后胞壁成份变化与其它真菌不同的原因进行了讨论。 展开更多
关键词 新月弯孢菌 菌丝形态 超微结构 Β-1 3-葡聚糖 几丁质
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甲壳素固定化β-葡萄糖醛酸苷酶的研究 被引量:2
9
作者 孙倩 李开雄 +3 位作者 李春 段海燕 叶海 曹红 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期267-269,共3页
以甲壳素为载体、戊二醛为交联剂,固定β-葡萄糖醛酸苷酶,对β-葡萄糖醛酸苷酶的固定化条件进行了研究,并通过正交实验确定了酶固定的最佳条件:戊二醛浓度0.7%,交联时间4h,吸附时间为9h,反应温度40℃,此时酶活力回收率可达67.32%。
关键词 Β-葡萄糖醛酸苷酶 甲壳素 固定化
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昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶研究进展 被引量:6
10
作者 屈明博 刘田 +2 位作者 陈磊 陈琦 杨青 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1303-1312,共10页
糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶是N-乙酰己糖胺代谢过程中一个重要的酶,其可将位于非还原端以β糖苷键连接的N-乙酰己糖胺从寡糖及糖复合物中水解下来。昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰已糖胺酶参与昆虫多个生理过程,包括表皮几丁质... 糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶是N-乙酰己糖胺代谢过程中一个重要的酶,其可将位于非还原端以β糖苷键连接的N-乙酰己糖胺从寡糖及糖复合物中水解下来。昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰已糖胺酶参与昆虫多个生理过程,包括表皮几丁质水解、蛋白质N糖基化修饰、糖复合物水解及精卵识别,因此可能成为生态农药设计的潜在靶标,受到国内外学者的普遍关注。根据昆虫20家族β-N-乙酰己糖胺酶的进化关系和生理功能,可以将其分为4个亚家族,分别为Hex1、Hex2、Hex3和Hex4。Hex1主要在昆虫蜕皮时期的表皮中表达,RNA干扰该基因能够导致昆虫在发育过程中不能正常蜕皮而死亡。通过酶学性质研究发现,Hex1能够专一性水解以β1-4糖苷键连接的几丁质寡糖底物,而不能水解以其他形式连接的底物,是专一性的参与几丁质水解的β-N-乙酰己糖胺酶。目前获得的唯一一个昆虫β-N-乙酰己糖胺酶的晶体结构来自于亚洲玉米螟的OfHex1,其参与底物结合的"+1"位点存在一个特殊的三明治结构,使得Hex1对几丁质寡糖具有高度的选择性和水解活性。Hex2在双翅目昆虫中并不存在,与人类的β-N-乙酰己糖胺酶具有高度的相似性,RNA干扰该基因的表达能够导致幼虫化蛹时异常,成虫翅、附肢、触角等异常。通过酶学性质研究表明,Hex2能够水解释放几丁质寡糖,糖复合物等底物中的β-N-乙酰己糖胺,具有广泛的底物谱。Hex2的功能可能与人类Hex酶的功能类似,参与糖复合物的水解。Hex3是目前研究较少的一类β-N-乙酰己糖胺酶,RNA干扰该基因的表达能够导致幼虫蜕皮过程异常。Hex3存在于昆虫蜕皮液中,与Hex1存在相互作用,可能形成二聚体。通过酶学性质研究表明,Hex3能够水解几丁质寡糖底物,但活性较弱,说明其可能参与几丁质的水解。此外,Hex3、Hex1和Hex4被发现存在于双翅目昆虫精子的表面,可能参与精卵识别过程。Hex4又被称为FDL,是因为该基因的缺失能够导致果蝇左右大脑发生融合(fused lobe)。它是另外一种具有严格底物选择性的β-N-乙酰已糖胺酶,能够专一性地水解糖复合物GnGn中α1-3分支上以β1-2糖苷键连接的G1cNAcβ1-2Man,通过细胞定位研究表明Hex4主要存在于高尔基体当中。以上表明Hex4的主要功能是参与细胞内的糖基化修饰过程。尽管目前对于昆虫β-N-乙酰己糖胺酶的研究取得了很大的进展。对Hex1的功能、酶学性质和晶体结构研究得较为透彻,对于设计环境友好的杀虫剂具有较强的指导意义。但其他3种β-N-乙酰己糖胺酶在生理条件下如何发挥功能,以及4种β-N-乙酰己糖胺酶活性差异的结构基础并不是十分清楚。作者从进化关系、晶体结构、酶学性质和生理功能等方面对昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 β-N-乙酰己糖胺酶 几丁质 糖基化修饰 晶体结构 农药靶标
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β-壳聚糖的制备及几种理化性能的测试 被引量:22
11
作者 王爱勤 俞贤达 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2000年第2期21-23,共3页
从鱿鱼骨中制备了β-壳聚糖,利用红外光谱、X-衍射和热重分析等方法与α-壳聚糖进行了比较研究。β-壳聚糖制备成人工泪液后有较高的粘度,因而更适于医药应用。
关键词 甲壳素 β-壳聚糖 理化性能
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β-甲壳质纳米颗粒的制备与热稳定性 被引量:1
12
作者 张江 高善民 +1 位作者 戴瑛 黄柏标 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第2期113-117,共5页
鱿鱼软骨为原料,用微乳液与超声技术,在由聚氧乙烯醚、正辛烷和水组成的乳状液中,60℃超声条件下酸解,制得β-甲壳质纳米材料。结果表明,适宜的酸解用酸浓度为1.2-2.2mol/L。采用X射线衍射(XRD)、红外光谱(IR)对产物进行了... 鱿鱼软骨为原料,用微乳液与超声技术,在由聚氧乙烯醚、正辛烷和水组成的乳状液中,60℃超声条件下酸解,制得β-甲壳质纳米材料。结果表明,适宜的酸解用酸浓度为1.2-2.2mol/L。采用X射线衍射(XRD)、红外光谱(IR)对产物进行了表征。透射电子显微镜(TEM)分析表明,酸的浓度对产物的形貌和粒度有较大影响。热分析结果表明,β-甲壳质纳米颗粒在200℃以下是稳定的,随着温度的升高,β-甲壳质纳米颗粒逐步分解,700℃时只剩余少量灼烧残渣。 展开更多
关键词 β-甲壳质 纳米颗粒 微乳液 热稳定性
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大豆β-淀粉酶、产气杆菌异淀粉酶在虾壳几丁质上的固定化及在麦芽糖生产中的应用 被引量:5
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作者 白虹 葛世军 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 1992年第4期17-21,共5页
本文研究了大豆β—淀粉酶和产气杆菌异淀粉酶在同一载体上的固定化作用。以虾壳几丁质和壳聚糖为载体,证明几丁质更适于固定化异淀粉酶。用5%甲酸和50%乙酸预处理载体可增加固定化异淀粉酶的活性和稳定性,这可能是由于载体中壳聚糖... 本文研究了大豆β—淀粉酶和产气杆菌异淀粉酶在同一载体上的固定化作用。以虾壳几丁质和壳聚糖为载体,证明几丁质更适于固定化异淀粉酶。用5%甲酸和50%乙酸预处理载体可增加固定化异淀粉酶的活性和稳定性,这可能是由于载体中壳聚糖的溶解造成的。经甲酸处理的几丁质先与4~6%pH7~9的戊二醛反应1小时,再同酶液(10mg/ml,pH6)反应2小时,并添加0.2mol/1Ca~#,将有利于固定化作用。用本方法得到的固定化酶具有高度活性和稳定性。固定化异淀粉酶最适pH由6.5变为5.0,而固定化β—淀粉酶最适pH变化不大。固定化酶在60℃稳定,在70℃5分钟失活。固定化酶在水中贮藏稳定,并具有良好的操作稳定性,使其在麦芽糖生产中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 Β-淀粉酶 麦芽糖 几丁质 固定化
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Heterointerface Engineering of β‑Chitin/Carbon Nano‑Onions/Ni-P Composites with Boosted Maxwell‑Wagner‑Sillars Effect for Highly Efficient Electromagnetic Wave Response and Thermal Management 被引量:5
14
作者 Fei Pan Lei Cai +7 位作者 Yuyang Shi Yanyan Dong Xiaojie Zhu Jie Cheng Haojie Jiang Xiao Wang Yifeng Jiang Wei Lu 《Nano-Micro Letters》 SCIE EI CAS CSCD 2022年第5期206-223,共18页
The rational construction of microstructure and composition with enhanced Maxwell-Wagner-Sillars effect(MWSE)is still a challenging direction for reinforcing electromagnetic wave(EMW)absorption performance,and the rel... The rational construction of microstructure and composition with enhanced Maxwell-Wagner-Sillars effect(MWSE)is still a challenging direction for reinforcing electromagnetic wave(EMW)absorption performance,and the related EMW attenuation mechanism has rarely been elucidated.Herein,MWSE boostedβ-chitin/carbon nano-onions/Ni–P composites is prepared according to the heterointerface engineering strategy via facile layer-by-layer electrostatic assembly and electroless plating techniques.The heterogeneous interface is reinforced from the aspect of porous skeleton,nanomaterials and multilayer construction.The composites exhibit competitive EMW response mechanism between the conductive loss and the polarization/magnetic loss,as describing like the story of“The Hare and the Tortoise”.As a result,the composites not only achieve a minimum reflection loss(RL_(min))of−50.83 dB and an effective bandwidth of 6.8 GHz,but also present remarkable EMW interference shielding effectiveness of 66.66 dB.In addition,diverse functions such as good thermal insulation,infrared shielding and photothermal performance were also achieved in the hybrid composites as a result of intrinsic morphology and chemicophysics properties.Therefore,we believe that the boosted MWSE open up a novel orientation toward developing multifunctional composites with high-efficient EMW response and thermal management. 展开更多
关键词 β-chitin Nano onion carbon Electromagnetic wave absorption Electromagnetic interference shielding Photothermal
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鱿鱼顶骨β-壳聚糖的液晶性 被引量:1
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作者 董炎明 阮永红 +3 位作者 吴玉松 王勉 许聪义 丘蔚碧 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期1238-1243,共6页
用广角 X光衍射、扫描电子显微镜和偏光显微镜研究由鱿鱼顶骨制备的β-壳聚糖与由蟹壳制备的 α-壳聚糖的结晶结构和液晶行为 .两种壳聚糖在二氯乙酸中形成液晶的临界浓度基本相同 ,说明具有相同的链刚性 .β-壳聚糖临界浓度实验值 (9wt... 用广角 X光衍射、扫描电子显微镜和偏光显微镜研究由鱿鱼顶骨制备的β-壳聚糖与由蟹壳制备的 α-壳聚糖的结晶结构和液晶行为 .两种壳聚糖在二氯乙酸中形成液晶的临界浓度基本相同 ,说明具有相同的链刚性 .β-壳聚糖临界浓度实验值 (9wt% )与理论预计值 (10 wt% )相符 .另一方面 ,β-壳聚糖比α-壳聚糖在二氯乙酸中能形成更为有序的取向态液晶织构 .解释为β-壳聚糖的结晶度和微纤化程度均比 α-壳聚糖高 ,在形成液晶溶液时发生“结构滞后”现象 . 展开更多
关键词 β-甲壳素 β-壳聚糖 溶致液晶 鱿鱼顶骨 结晶结构 液晶行为 临界浓度
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甲壳素壳聚糖及其衍生物吸湿保湿性研究进展 被引量:39
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作者 邵志会 王爱勤 《日用化学工业》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期43-45,共3页
简要介绍了甲壳素、壳聚糖的物化性质 ,概述了壳聚糖常见的化学修饰方法 ,详细综述了甲壳素、壳聚糖及其羟基化衍生物、羧化衍生物、酰化衍生物的吸湿性和保湿性的研究现状 ,对 β -壳聚糖。
关键词 化妆品 甲壳素壳聚糖 衍生物 β-壳聚糖 甲壳低聚糖 吸湿性 保湿性
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飞蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的表达及酶学特性分析 被引量:10
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作者 宋慧芳 李应龙 +1 位作者 马恩波 张建珍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第21期4140-4148,共9页
【目的】β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetylglucosaminidase,NAG)是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类。研究旨在利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统获得高纯度LmNAG1蛋白并对其酶学特性进行分析,探究该酶在飞蝗(Locusta migratoria)生长... 【目的】β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetylglucosaminidase,NAG)是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类。研究旨在利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统获得高纯度LmNAG1蛋白并对其酶学特性进行分析,探究该酶在飞蝗(Locusta migratoria)生长发育过程中的生物学功能,为飞蝗绿色防控分子靶标研发提供理论与实践依据。【方法】根据Lm NAG1的cDNA全长序列(Gen Bank:JX888720.1)设计包含酶切位点Bam H Ⅰ、Hind Ⅲ和6×His标签的引物。采用PCR技术扩增包含开放阅读框的目标片段,双酶切后连接至pFast Bac^(TM)-Dual载体上。将重组质粒转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,通过Tn7转座子把目的基因转座到杆状病毒基因组上,用蓝白斑结合抗生素筛选。挑取白斑用pUC/M13引物来扩增目的条带,挑选带目的基因全长的重组杆状病毒质粒(baculovirus plasmid,Bacmid)。用转染试剂将重组Bacmid转染至草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9中,72 h内连续观察细胞形态,当出现感染迹象后收集细胞,离心,取上清得到P1代重组病毒粒子。用P1代病毒粒子去感染Sf9细胞,裂解并提取蛋白,Western blot检测目的蛋白是否成功表达。之后大量感染Sf9细胞,提取蛋白,利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱和阴离子交换柱Q对重组蛋白进行纯化,取最纯的馏分用Bradford法测定蛋白浓度。采用4MU-GlcNAc为底物对重组目的蛋白LmNAG1的动力学参数、最适温度和最适pH进行测定。【结果】克隆得到包含1 845 bp LmNAG1全长的pFast Bac-LmNAG1重组质粒,酶切验证与目标条带一致。将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞中,PCR扩增挑选出纯白斑,成功将LmNAG1全长序列构建到杆状病毒基因组上。将重组Bacmid转染至Sf9细胞,72 h后在显微镜下观察可见细胞膨大,边缘不规则等感染迹象。离心收集重组病毒粒子感染新的Sf9细胞,72 h后收集细胞,Western blot检测发现在67 kD附近有明显条带,与LmNAG1的理论分子量一致,获得带6×His标签的融合蛋白。大量感染收集细胞提取蛋白,经Ni-NTA琼脂糖层析纯化,进一步透析除盐后用阴离子交换柱Q二次纯化,得到了高纯度的目的蛋白。用Bradford法测定最纯的E3组分的蛋白浓度为0.057μg·μL^(-1)。体外活性测定结果表明LmNAG1的最适pH为8.0,且在pH 6.0—8.0范围内具有较高的稳定性;LmNAG1的最适温度为40℃,在40℃以下具有很高的稳定性,当温度高于45℃时热稳定性迅速下降;采用4MU-GlcNAc为底物测得LmNAG1具有水解β-1,4糖苷键的活性,可以释放出4MU,它的动力学参数K_m值为(0.28±0.02)mmol·L^(-1),K_(cat)值为(902.88±38.15)s^(-1)。【结论】成功获得高纯度且具活性的LmNAG1蛋白,其可水解β-1,4糖苷键连接的几丁质寡糖,与已知昆虫NAG1具有相似的生物学功能,即参与几丁质的降解。 展开更多
关键词 飞蝗 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG) 几丁质降解 蛋白表达 酶学特性
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肉桂醛特异性抑制酵母细胞壁合成的作用机理 被引量:16
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作者 汪琨 徐峥 +2 位作者 汪倩雯 朱廷恒 崔志峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期68-72,共5页
基于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)及其细胞壁合成酶缺陷突变株组成的筛选模型对肉桂醛抗真菌的作用机制进行了研究。发现肉桂醛对细胞壁合成酶基因缺陷突变株及其野生型的抑制具有显著差异,对葡聚糖合酶缺陷突变株Δfks1的最低... 基于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)及其细胞壁合成酶缺陷突变株组成的筛选模型对肉桂醛抗真菌的作用机制进行了研究。发现肉桂醛对细胞壁合成酶基因缺陷突变株及其野生型的抑制具有显著差异,对葡聚糖合酶缺陷突变株Δfks1的最低抑制浓度MIC值为8μg/mL,比野生型低8倍,肉桂醛对几丁质合酶基因缺陷突变株CHS020和CHS003的MIC值也比野生型低4倍。肉桂醛对Δfks1生长的抑制能被山梨醇等渗溶液部分挽救,经肉桂醛处理后,Δfks1的β-葡聚糖和几丁质含量分别降低了23.48%和31.94%。研究结果表明,肉桂醛特异性抑制真菌细胞壁葡聚糖和几丁质的合成是其抑制真菌细胞生长的主要机制之一。 展开更多
关键词 肉桂醛 抗真菌作用 葡聚糖合酶 几丁质合酶 SACCHAROMYCES CEREVISIAE
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甾醇生物合成抑制剂粉锈宁对苹果黑星病菌发育的影响(英文) 被引量:11
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作者 黄丽丽 康振生 +1 位作者 严勇敢 张管区 《菌物系统》 CSCD 北大核心 2001年第2期250-257,T001-T004,共12页
采用电子显微镜和细胞化学技术,研究了杀菌剂粉锈宁(甾醇生物合成抑制剂)对苹果黑星病菌在苹果叶片上发育的影响。观察结果表明,接种前24h施药对病菌入侵有明显的影响。表现为分生孢子的萌发受阻,推迟萌发及萌发率降低;并引起芽... 采用电子显微镜和细胞化学技术,研究了杀菌剂粉锈宁(甾醇生物合成抑制剂)对苹果黑星病菌在苹果叶片上发育的影响。观察结果表明,接种前24h施药对病菌入侵有明显的影响。表现为分生孢子的萌发受阻,推迟萌发及萌发率降低;并引起芽管畸形,不能形成附着胞。接种后6天(显症前)施药,可引起叶片角质层下菌丝细胞和子座细胞的原生质坏死、细胞壁不规则增厚及液泡增大, 从而使菌丝进一步发育受阻。接种后12天(显症后)施药,不仅导致菌丝、子座细胞发生上述变化, 而且引起分生孢子和分生孢子梗塌陷、畸形,阻止了病菌的进一步产孢和扩展。细胞化学定位分析结果表明,?-1,3-葡聚糖和几丁质这两种胞壁主要成分在对照菌丝和药剂处理后的菌丝细胞壁内含量有很大差异。在药剂处理的菌丝细胞壁中,这两种成分的标记密度明显高于对照菌丝,表明杀菌剂对病菌质膜透性的不利影响使?-1,3-葡聚糖和几丁质在菌丝细胞壁中过度累积。 展开更多
关键词 杀菌剂 粉锈宁 苹果黑星病 甾醇合成 病菌发育
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去氢木香内酯特异性抑制Saccharomyces cerevisiae细胞壁中β-葡聚糖的合成 被引量:3
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作者 汪琨 徐峥 +2 位作者 朱廷恒 汪倩雯 崔志峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期29-34,共6页
基于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)及其细胞壁合成酶缺陷突变株组成的靶标定向全细胞筛选模型,对去氢木香内酯抗真菌的作用机制进行研究,发现去氢木香内酯特异性抑制β-葡聚糖合酶基因缺陷突变株Δfks1,其最低抑制浓度MIC值为16μ... 基于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)及其细胞壁合成酶缺陷突变株组成的靶标定向全细胞筛选模型,对去氢木香内酯抗真菌的作用机制进行研究,发现去氢木香内酯特异性抑制β-葡聚糖合酶基因缺陷突变株Δfks1,其最低抑制浓度MIC值为16μg/mL,比野生型WHU2a和几丁质合酶基因缺陷突变株均低2倍;其对WHU2a生长的抑制能被山梨醇等渗溶液部分挽救;IC20浓度的去氢木香内酯处理后WHU2a的β-葡聚糖含量降低了16.83%,512μg/mL去氢木香内酯抑制了26.66%的β-葡聚糖合酶活性。研究结果表明,去氢木香内酯能特异性抑制真菌细胞壁中葡聚糖的合成,从而抑制真菌细胞生长。 展开更多
关键词 去氢木香内酯 抗真菌作用 葡聚糖合酶 SACCHAROMYCESCEREVISIAE
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