Bacillus tropicus来源β-D-呋喃果糖苷酶基因的克隆与表达及其酶学特性研究

为获得新β-D-呋喃果糖苷酶资源并探究其酶学性质及在转化糖中的应用潜力,挖掘出Bacillus tropicus来源的β-D-呋喃果糖苷酶基因BtFFase8,成功合成后表达在大肠杆菌宿主中。通过数据库筛选β-D-呋喃果糖苷酶的基因序列,将基因克隆至载体pET-28a(+)中。将获得的重组质粒转化至大肠杆菌BL21,构建重组菌株大肠杆菌BL21/pET28a-BtFFase8。采用亲和层析纯化克隆酶,用SDS-PAGE法分析蛋白分子量,通过葡萄糖试剂盒检测酶水解产物的能力得到酶活力,用福林酚试剂法测定蛋白质含量。克隆酶BtFFase8的分子质量为57.0 kDa,对蔗糖底物的比酶活力为13.4 U/mg;BtFFase8的最适pH和最适温度分别为pH 6.5和45℃,且在pH 5.0~8.0和40℃及以下温度保持酶活力稳定,残余酶活力大于80%;BtFFase8能耐受碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和胰蛋白酶的水解,残余酶活力大于70%。BtFFase8的发现及克隆酶优良的酶学功能为其未来应用于食品加工,特别是在转化糖的生产中奠定了良好的理论基础。

响应面法优化离子交换法固定化β-D-呋喃果糖苷酶

以大孔阴离子树脂D311为载体,对日本曲霉来源的β-D-呋喃果糖苷酶进行离子交换法固定化。研究温度、pH值、时间、游离酶液酶活力对固定化效果的影响,并在此基础上运用响应面法对固定化条件进行优化。结果表明,最佳固定化条件为:室温、pH6.6、固定化时间4h、游离酶液酶活力为900U/mL,在此条件下,固定化β-D-呋喃果糖苷酶生产的低聚果糖产量可达58.16%。

液-液双相体系中β-D-呋喃果糖苷酶催化转移反应的特性

筛选出一些有利于维持 β D 呋喃果糖苷酶稳定性的有机溶剂 ,并研究了其在水 有机溶剂双相体系中催化转移反应的基本特性。非水相体系组成、pH值、温度和反应时间对酶反应速率有显著的影响 ,在丁酸乙酯 缓冲液双相体系中 ,有利于该酶发生转移反应、合成低聚糖的反应条件为 :有机溶剂体积比 91 5 8% (蔗糖底物初始量为 4 7 5 2 g/L ,酶添加量 0 5U/mL) ,pH 6 0 ,保温温度 5 4℃ ,此时振荡反应 32min后低聚糖合成率可达 3 4 1%。聚羟乙基异丁烯酸固定化 β D 呋喃果糖苷酶在丁酸乙酯 水双相体系中具有良好的稳定性和机械强度 。

日本曲霉产β-D-呋喃果糖苷酶的固定化

采用海藻酸钠包埋法、明胶-海藻酸钠复合包埋法和戊二醛-海藻酸钠共价交联法分别对日本曲霉来源的β-D-呋喃果糖苷酶进行固定化研究。实验结果发现:当海藻酸钠溶液浓度为3g/100mL,游离酶液酶活为800U/mL,CaCl2溶液浓度为1g/100mL,固定化时间为20min,制备的固定化酶酶活回收率为54.32%;添加浓度为3g/100mL明胶进行复合包埋后,其固定化酶酶活回收率达到69.23%;与0.3g/100mL戊二醛进行共价交联15min,制备的固定化酶酶活回收率为62.31%,反应10批相对酶活回收率仍在80%以上。从实际生产应用、固定化酶酶活、固定化酶的操作稳定性等方面综合比较,戊二醛-海藻酸钠交联法较佳。

戊二醛交联法固定化β-D-呋喃果糖苷酶的研究

大豆低聚糖属于功能性低聚糖的一种,具有促进双歧杆菌生长繁殖等生理特性。采用戊二醛交联法固定β-D-呋喃果糖苷酶。研究固定化酶法生产大豆低聚糖过程中对酶固定化制备的条件、操作稳定性。采用戊二醛交联法固定β-D-呋喃果糖苷酶。结果表明:最佳固定化条件为:戊二醛浓度20 mmol.L-1,蛋白质浓度1.0%,酶与固定液之比1∶10,固定化时间2 h;此条件下制备的固定化酶平均酶活达340 U.g-1,酶活保留率80%以上。固定化酶在间歇反应器中具有较高的操作稳定性,固定化酶的半衰期为58 d,完全可以满足工业化生产的要求。

β-D-呋喃果糖苷酶酶学特性

对来源于米曲霉 (Aspergillusoyzae0 0 1)中的 β -D -呋喃果糖苷酶的酶学特性进行研究。β -D - 呋喃果糖苷酶具有如下特性 :在温度≤ 4 0℃时 ,酶稳定 ,最适反应温度为 35℃～ 4 5℃ ;在pH5～ 9范围内稳定 ,最适pH为 7～ 9;在选择的金属离子范围内 ,Ag+ 对酶有较强的激活作用 ,K+ 、Zn2 + 、Mg2 + 对酶也有激活作用 ,但程度不如Ag+ 。

β-D-呋喃果糖苷酶高产菌株的筛选及培养特性研究

研究从米曲霉(Aspergillusoryzae100、Aspergillusoryzae200)和一株假丝酵母(Candidaguilliermondii2.1510)中筛选出高产β D 呋喃果糖苷酶的菌株Aspergillusoryzae100,并确定了Aspergillusoryzae100最佳培养条件为30℃,84～90h,最佳培养基组成为麦麸∶大豆乳清(2%～3%固形物)(1∶8)和3%蔗糖。

β-D呋喃果糖苷酶合成低聚果糖的工艺研究

以蔗糖为底物 ,采用来源于米曲霉中的 β -D -呋喃果糖苷酶 (EC3 2 1 2 6)合成低聚果糖 ,酶反应最佳条件为 :反应温度 35℃ ,酶反应体系的pH为 8 0～ 8 2 ,酶浓度 2 7IU/ g(蔗糖 ) ,酶反应时间为 8h。低聚果糖的最大转化率为 5 4% ,82

1-O-[3-(2-呋喃基)丙烯酰基]-β-D-吡喃果糖的合成及应用

为开发新型卷烟保润剂,以D-果糖和糠醛为起始原料,设计合成了一种新化合物1-O-[3-(2-呋喃基)丙烯酰基]-β-D-吡喃果糖(VIII),用IR,1H NMR,13C NMR,ESI-MS和元素分析表征了VIII的结构,并进行了添加于烟丝后的物理保润性能测试、热裂解分析、卷烟烟气安全性生物学评价和感官质量评价。结果显示:1所合成的化合物为目标产物;2VIII在干燥条件下的物理保润性能优于丙二醇;3VIII热裂解时会释放出呋喃类香味成分;4添加VIII的试验卷烟和空白卷烟的烟气生物学效应相当;5VIII可降低卷烟烟气干燥感和刺激性,提高烟气香气量及改善余味。

微生物源低聚果糖合成酶的研究进展

本文介绍了微生物源低聚果糖合成酶的国内外研究和开发现状。根据国内外文献综述了微生物源低聚果糖合成酶的种类、理化性质、产酶条件、发酵方式及低聚果糖合成酶的分子生物学方面的研究进展。

白薇饮片及女金丸的掺伪鉴别

目的:解决白薇饮片及含白薇的制剂女金丸中白薇掺伪的问题。方法:采用性状鉴别、显微鉴别和化学分析方法研究白薇饮片及女金丸中白薇掺伪的问题。结果:按照《中华人民共和国药典》 2020年版白薇项下的性状和显微鉴别方法难以区分白薇及其伪品老瓜头,但两者的薄层色谱和高效液相色谱存在明显差异,进一步采用高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱联用仪确认特征色谱峰为β-D-呋喃果糖基-(2→1)-α-D-[6-O-芥子酰基]-吡喃葡萄糖苷。结论:建立的检查方法操作简单、灵敏度高,可为白薇饮片及含白薇制剂的质量提升提供参考。

智力障碍与双硫死亡相关机制以及潜在靶向中药的预测

目的 探究智力障碍与双硫死亡之间的联系,为智力障碍的治疗提供新的方向。方法 利用GEO数据库中的智力障碍数据集(GSE64380),结合铁死亡数据库中的双硫死亡相关基因确定与智力障碍相关的双硫死亡基因,采用多因素Logistic分析、LASSO回归模型和随机森林模型(结合SHAP算法)进行机器学习。在中药入血成分数据库DCABM-TCM中以置信度得分0.90(LR=124)为筛选标准,确定与双硫死亡基因相关的中药入血活性化合物。在TCMSP数据库中检索中药活性化合物的类药性(DL)、口服生物利用度(OB),进行分子对接。结果 经过多因素Logistic分析、LASSO回归模型以及随机森林模型(结合SHAP算法)的综合分析,最终确定ACTC1是与智力障碍相关的双硫死亡的关键基因。分子对接结果显示,ACTC1与环拉酸、D-甘露糖苷、β-乳糖、D-吡喃葡萄糖、β-D-呋喃果糖有良好的结合性。根据中药活性化合物的DL、OB值,确定D-吡喃葡萄糖和β-D-呋喃果糖是最具潜力的中药活性化合物。扁豆全株被确定为潜在的研究中药。结论 ACTC1被确认为与智力障碍相关的双硫死亡的关键基因,而扁豆中的活性化合物D-吡喃葡萄糖和β-D-呋喃果糖则被视为潜在的治疗药物。

固定化酶法制备大豆低聚糖及酶学性质的研究

研究采用固定化β-D-呋喃果糖苷酶制备大豆低聚糖及酶的性质。研究结果表明,固定化酶最适温度为55℃,pH6.0,底物流速24 mL/h,在pH4.5～6.5之间和60℃以下,固定化酶表现出较好的热稳定性贮存和操作稳定性。固定化酶法处理后大豆低聚糖的提取率为85.2%,蛋白质去除率为86.4%。

复方丹参浸膏中低聚糖成分的分离与结构鉴定

目的研究复方丹参浸膏中的低聚糖化学成分。方法采用固相萃取、聚丙烯酰胺凝胶色谱、亲水作用色谱(HILIC)-高效液相色谱(HPLC)-蒸发光散射检测器(ELSD)等技术,对复方丹参浸膏中的低聚糖成分进行分离纯化,并根据理化性质和波谱学手段进行结构鉴定。结果通过方法优化,成功分离得到了5个低聚糖成分,通过波谱分析鉴定,5个低聚糖成分分别为α-D-吡喃半乳糖-(1→6)-α-D-吡喃半乳糖-(1→6)-α-D-吡喃葡萄糖-(1→2)-α-D-呋喃果糖(1)、α-D-吡喃葡萄糖-(1→2)-β-D-呋喃果糖-(1→1)-α-D-吡喃半乳糖(2)、蔗糖(3)、果糖(4)和葡萄糖(5)。结论化合物1、2为首次在复方丹参浸膏中分离得到。