尿视黄醇结合蛋白、N-乙酰β-D-葡萄糖苷酶对早期糖尿病肾病的诊断意义

目的 探讨 2型糖尿病患者早期肾小管损伤标志物尿视黄醇结合蛋白 (RBP)、N 乙酰 β D 葡萄糖苷酶(NAG)的变化及临床意义。方法 采用ELISA方法测定 79例 2型糖尿病患者尿RBP的含量 ,用比色法测定尿NAG的含量 ,并用多元回归分析糖尿病患者尿RBP、NAG水平与病程、年龄、血糖、血脂、血肌酐及尿白蛋白 (Alb)之间的关系。结果 2型糖尿病患者尿RBP、NAG排出增多 ,其升高的阳性率分别为 5 0 .6 %、5 8.2 % ,尿Alb增高的阳性率为36 .8% ,尿β2 微球蛋白 (β2 M)升高者占 30 .4 % ,尿RBP、NAG与糖化血红蛋白 (HbA1c)、尿Alb、血肌酐及血脂呈正相关 ,与年龄、病程、体重指数及血压无关。结论 糖尿病肾病早期既存在肾小球亦存在肾小管功能损伤 ,甚至在有些患者 ,肾小管功能损害早于肾小球。对糖尿病患者应重视肾小管功能损伤 ,早期控制糖尿病的糖、脂代谢紊乱 ,保护肾脏功能。

尖孢镰刀菌中β-D-葡萄糖苷酶活性测定条件的研究

试验以对硝基-β-D-葡萄糖苷为底物,对尖孢镰刀菌中的β-D-葡萄糖苷酶活性测定条件进行了研究,包括缓冲液pH值、底物浓度、反应温度和时间等条件对酶活性的影响。结果表明,当温度为50℃、pH5.0、底物浓度达到4 mmol/L、反应时间为16 m in时,酶活力达到最大。

β-D-葡萄糖苷酶对桂花香气成分的影响

用β-D-葡萄糖苷酶酶解桂花鲜花后,利用固相微萃取法(SPME)分别分离酶解前后桂花香气成分,再用气相色谱-质谱联用仪(GC/MS)分析鉴定,并通过其总离子流色谱峰的峰面积进行归一化定量。经与酶解前的26种主要香气成分分析比较发现,酶解后,桂花主要香气成分质量分数均明显增长,其中顺、反-氧化芳樟醇,L-芳樟醇,萜烯二醇,L-α-萜品醇等的增长率分别达到176.4%、262%、113.5%、102.6%和189.8%。这充分证明了β-D-葡萄糖苷酶可水解鲜花香气的前体物质,释放出鲜花中潜在的香气成分,从而大幅度提高香气成分的质量分数。

茶叶中β-D-葡萄糖苷酶活性测定条件的研究

以对硝基β－Ｄ－葡萄糖苷为底物，对茶叶中β－Ｄ－葡萄糖苷酶活性测定条件进行了研究，包括缓冲液ｐＨ值、底物浓度、反应温度和时间等条件对酶活性的影响。结果表明，２０ｍｇ茶树鲜叶粗酶提取液底物浓度为１０ｍｍｏｌ／Ｌ，在４９℃条件下反应１２０ｍｉｎ能得到最大的光吸收值。

植物乳杆菌β-D-葡萄糖苷酶的定位及活性研究

以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷为底物,通过比色法从5株植物乳杆菌中筛选出2株有较高β-D-葡萄糖苷酶酶活力的菌株,并利用差速离心分级沉淀对其β-D-葡萄糖苷酶进行定位。根据对植物乳杆菌的生长状况的分析,测定其在不同生长条件下β-D-葡萄糖苷酶的酶活力。结果表明:目的菌株体内的β-D-葡萄糖苷酶为胞内酶,属于细胞膜结合酶;该酶在对数生长末期(培养至12 h)酶活力最高,最适产酶培养基为改良MRS培养基;以完整细胞为参照对象,植物乳杆菌520、XJ-25菌株所产的β-D-葡萄糖苷酶均受纤维二糖及熊果苷的诱导,熊果苷的诱导作用较强。

熊果苷诱导植物乳杆菌β-D-葡萄糖苷酶对葡萄酒香气的影响

熊果苷诱导能够提高β-D-葡萄糖苷酶酶活,增加葡萄酒香气成分,改善葡萄酒品质。本研究在完整细胞、破碎细胞两种细胞形态下,以β-D-葡萄糖苷酶酶活为指标对含有不同浓度熊果苷的MRS培养基进行优化,将在最优培养基和传统MRS培养基中生长的植物乳杆菌分别接种到模拟酒中,通过气相色谱-质谱联用仪分析比较香气的差异。结果表明:乳杆菌完整细胞的酶活高于破碎细胞,含有10 g/L熊果苷的MRS培养基为最适培养基。接种经熊果苷诱导菌株的模拟酒中香气含量明显高于对照组(p<0.05),并且接种XJ-14-X的模拟酒中检测到29种挥发性香气,香气总含量为568.81μg/L,优于其它处理。结论:熊果苷诱导β-D-葡萄糖苷酶酶活对改善葡萄酒香气品质有积极作用。

自选高产β-D-葡萄糖苷酶酿酒酵母KDLYS9-16的酿酒性能

自选酿酒酵母KDLYS9-16高产β-D-葡萄糖苷酶,在葡萄酒酿造过程中,能够释放单萜烯类物质,增强葡萄酒的香气。以2015年份河北省昌黎和沙城葡萄酒产区赤霞珠和美乐葡萄为实验材料,以商品酿酒酵母F15和SC为对照菌,对KDLYS9-16酵母菌的降糖和酒精生成能力、以及葡萄酒香气进行测定与比较。结果表明自选菌比对照菌具有启动发酵快、降糖迅速、发酵周期短、酒精转化率高等优点。用该菌发酵的昌黎产区赤霞珠干红葡萄原酒中检测到32种香气物质,占总挥发性物质的98.94%,比对照菌香气物质的质量分数和种类都明显增加,显示了很好的酿酒性能和产香潜质,具有良好的应用前景。

瓜类尖孢镰刀菌致病物质β-D-葡萄糖苷酶活性与致病性的相关性分析

研究目的研究瓜类尖孢镰刀菌β-D-葡萄糖苷酶活性与致病性的关系,为菌株致病性强弱快速测定提供一种新的辅助方法;方法测定了19株来自不同瓜类寄主尖孢镰刀菌菌株的致病性及致病物质β-D-葡萄糖苷酶活性,构建菌株的发病率(y)与酶活(x)的曲线模型;结果菌株致病性测定结果表明,同一寄主及不寄主来源的菌株致病性有差异。供试菌株中有12个强致病菌株,发病率在80%以上;2个中等致病菌株,发病率分别为60%和70%;2个弱致病菌株发病率均为30%,以及3个非致病菌株。菌株β-D-葡萄糖苷酶活测定结果表明,同一寄主不同菌株的酶活存在明显差异,来自黄瓜、甜瓜和西瓜寄主菌株酶活变化范围依次为(21.57-54.89)、(16.28-41.83)和(14.98-32.43)U·ml-1;不同寄主(黄瓜、甜瓜和西瓜)菌株的β-D-葡萄糖苷酶活也存在差异,平均酶活为黄瓜(34.08U·ml-1)>甜瓜(27.86U·ml-1)>西瓜(20.95U·ml-1);结论菌株的β-D-葡萄糖苷酶活性与其致病性关系分析表明,当酶活性小于30U·ml-1l时,菌株发病率与酶活呈正相关;当酶活大于30U·ml-1,菌株的发病率大于90%。

酒酒球菌31MBR的β-D-葡萄糖苷酶活性

以对-硝苯-β-葡萄糖苷为底物,采用分光光度法对酒酒球菌31MBR的β-D-葡萄糖苷酶活性进行了初步研究。结果表明:酒酒球菌31MBR具有很高的β-D-葡萄糖苷酶活性,该酶为胞内酶,且主要为可溶性酶,酶活在对数生长中期最高且随着生长时间的延长呈下降趋势。β-D-葡萄糖苷酶为结构酶,但在纤维二糖和熊果苷的诱导下酶活均有不同程度的提高。酒酒球菌31MBR具有β-D-葡萄糖苷酶活性对增加葡萄酒香气和提高葡萄酒品质具有重要意义。

酵母菌β-D-葡萄糖苷酶酶学性质及对葡萄酒香气的影响研究进展

阐述了产β-D-葡萄糖苷酶酵母菌的筛选及分子鉴定,酵母菌β-D-葡萄糖苷酶的理化性质、分离提纯和固定化。重点对酵母菌β-D-葡萄糖苷酶在增强葡萄酒香气方面的应用进行了论述和展望。

萝芙木异胡豆苷-β-D-葡萄糖苷酶(SGD)基因的克隆与分析

[目的]对萝芙木异胡豆苷-β-D-葡萄糖苷酶(SGD)基因进行克隆与分析。[方法]以萝芙木为材料,采用RACE技术,从萝芙木中克隆SGD的全长cDNA,并对其进行表达谱分析和相关生物信息学分析。[结果]萝芙木SGD基因cDNA全长1 856 bp,包含1 608 bp的开放阅读框,编码536个氨基酸,预测分子量为61 kDa,等电点pI为6.16;生物信息学分析显示,RvSGD与蛇根木SGD及长春花SGD的序列相似性分别高达90.1%和70.9%,RvSGD也具有SGD蛋白的3个保守氨基酸催化位点His-161、Glu-207和Glu-419;荧光定量PCR表明,RvSGD在树皮中表达量最高,其次是老叶、根、嫩叶和茎。[结论]RvSGD基因的克隆和功能分析有助于在分子水平上更好地了解这个基因在TIAs的生物合成中的作用,并为今后调控TIAs的生物合成提供了新的靶点。

联合检测血清同型半胱氨酸、胱抑素C、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶、尿微量白蛋白、尿肌酐、尿微量白蛋白尿Cr比值诊断妊娠期糖尿病早期肾损伤的价值

目的:分析联合检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素C(CysC)、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)、尿微量白蛋白(mALB)、尿肌酐(尿Cr)、尿微量白蛋白尿Cr比值诊断妊娠期糖尿病早期肾损伤的价值。方法:选取本院2017年8月31日~2019年3月31日收治的妊娠期糖尿病的患者100例,分肾功能正常组50例(mALB/尿Cr≤30mg/24h),早期肾功能损伤组50例(mALB/尿Cr>30mg/24h),对照组为同期体检健康的孕妇50例,比较各组组间Hcy、Cys-C及NAG、mALB、尿Cr、mALB指标数值及它们单独检测与联合检测的阳性率、灵敏度和特异度。结果:早期肾功能损伤组的血清Hcy、Cys-C及NAG、mALB、尿Cr、mALB/尿Cr水平均明显高于肾功能正常组与对照组(P<0.05);早期肾功能损伤组中的血清Hcy、Cys-C及NAG、mALB、尿Cr、mALB/尿Cr水平联合检测阳性率、灵敏度以及特异度比单独检测高(P<0.05)。结论:血清Hcy、Cys-C及NAG、mALB、尿Cr、mALB/尿Cr均是妊娠期糖尿病早期肾损伤的敏感指标,它们联合检测对及时诊断妊娠期糖尿病早期肾损伤有重要的应用价值。

尖孢镰刀菌β-D-葡萄糖苷酶异质性的研究

对黄瓜和瓠瓜不同部位以及不同寄主上分离的尖孢镰刀菌β-D-葡萄糖苷酶活性进行了测定,结果表明,4株瓠瓜不同部位分离的尖孢镰刀菌β-D-葡萄糖苷酶活性差异不大,分别为21.8233U、22.1663U、21.4573U和17.587U。黄瓜不同部位分离的尖孢镰刀菌的β-D-葡萄糖苷酶活性差异较大,分别为23.907U、22.0983U、35.736U和34.5323U。不同寄主尖孢镰刀菌的β-D-葡萄糖苷酶活性变化范围为10.21830U^39.82230U,其变化依次为:西瓜>黄瓜>瓠瓜>甜瓜>豇豆>辣椒。

自选酿酒酵母产β-D-葡萄糖苷酶的反应条件研究

在单因素实验基础上,利用响应面法对自选酿酒酵母KDLYS9-16产β-D-葡萄糖苷酶的反应条件(包括反应温度、缓冲溶液pH值和底物浓度等)进行了优化。以酶活力为响应值,结合Box-Benhnken中心组合实验设计原理,进行响应面分析。结果显示:在缓冲溶液pH 5.1,反应温度48.0℃,底物对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷(pNPG)浓度41.4 mmol/L时,KDLYS9-16酵母菌产β-D-葡萄糖苷酶的酶活力为17.0mU/mL,是对照菌安琪酵母菌β-D-葡萄糖苷酶活力的1.96倍,显示出良好的酿酒增香潜力和应用前景。

原发性高血压病人动态血压水平与尿N-乙酰β-D-葡萄糖苷酶及左心室肥厚的关系

目的 :探讨原发性高血压病人动态血压水平与尿NAG及左心室后壁厚度之间的关系。方法 :对 92例原发性高血压病人进行动态血压监测 ,同时行超声心动图检查测定其LVPW及尿NAG检查。结果 :在血压控制不良的高血压病人中 ,NAG及LVPW与 2 4 -SBP ,d -SBP ,n -SBP呈显著正相关 (r =0 2 5 - 0 4 3 ,P <0 0 5 ) ;而血压控制良好的高血压病人 ,它们之间的相关性明显下降 (P >0 0 5 )。结论 :尿NAG的增高可以作为原发性高血压病人早期肾功能损伤的指标 ,平均收缩压的增高可导致肾功能的损伤及左心室肥厚。

自选酿酒酵母(KDLYS9-3)产β-D-葡萄糖苷酶动力学研究

自选高产β-D-葡萄糖苷酶的酿酒酵母(KDLYS9-3)在葡萄酒酿造过程中具有增强香气的效果。依据菌体生长和产酶试验,利用Logistic方程、Dose Resp方程和Nelder方程建立了菌体生长和产酶,以及菌体生长速率与酶生成速率之间关系的动力学模型,通过Origin8.0软件进行非线性拟合,并利用Lineweaver-Burk法作图测定了该菌所产β-D-葡萄糖苷酶的动力学参数K_m值和V_(max)值。结果显示:自选酿酒酵母KDLYS9-3的菌体生长与产酶的相关性为部分偶联型,动力学模型与试验值吻合度好,方程能够反映菌体生长与产酶的变化规律。菌体生长8 h后开始产酶,菌体进入对数生长期时酶大量生成,到39 h菌体生长进入稳定期,随着菌体生长进入衰亡期后酶也随之停止产生;利用Lineweaver-Burk法求得酶动力学参数K_m=8.492 579 mmol/L,V_(max)=1.030 715(μmol/L)/min。研究结果为该菌株的理论研究和实际应用奠定了基础。

产β-D-葡萄糖苷酶乳酸菌的筛选、鉴定及系统发育分析

为寻找一种适用于果酒增香的糖苷酶。利用七叶苷显色平板法,从63株乳酸菌中筛选得到4株产β-D-葡萄糖苷酶的菌株。再以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷(PNPG)为底物,利用差速离心分级沉淀对β-D-葡萄糖苷酶进行初步定位。此外通过形态特征、生理生化实验等传统鉴定方法,结合16S r DNA序列分析对其进行鉴定。结果表明:所研究的4株菌株所产β-D-葡萄糖苷酶均为胞内酶;FL12和Hsb鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),CM3鉴定为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus),T61鉴定为短乳杆菌(Lactobacillus brevis)。

产β-D-葡萄糖苷酶酵母菌的筛选及产酶性质研究

以对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷（pNPG）法筛选产酶菌株,并进行酶活力定量分析。对产酶菌的种属定性采用5.8SrDNA-ITS区域RFLP分析的分子鉴定法。通过细胞破壁检测酶活力测定菌株的产酶定位。利用水杨苷和七叶苷为诱导物驯化菌株,提高其产酶能力。结果表明,从236株自选酵母菌中筛选出210株产酶菌株,区分为4种分子类型,分别为：有孢汉逊酵母属（Hanseniaspora vineae）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、葡萄汁有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）和卡利比克毕赤酵母（Pichia caribbica）。产酶活性较高的8株酿酒酵母酶活性在0.0075-0.0099 U/mL之间,产酶定位均为：胞外酶〉胞内酶〉胞壁酶。水杨苷只对S4菌株产酶具有诱导作用,酶活力提高14%。而七叶苷可对S1和S4菌株产酶具有诱导作用,酶活力分别提高13%和19%。本研究筛选出8株高产β-D-葡萄糖苷酶的酿酒酵母,可用于生产葡萄酒。

微生物β-D-葡萄糖苷酶对玫瑰香(Muscat)葡萄结合态香气物质的影响

β-D-葡萄糖苷酶是风味修饰中的关键酶,对葡萄酒香气的提升具有十分重要的作用。利用筛选的产β-D-葡萄糖苷酶的黑曲霉、海藻曲霉、鲁氏毛霉,结合固相微萃取、气质联用等技术,对β-D-葡萄糖苷酶促进玫瑰香葡萄结合态香气的释放进行了研究。研究结果表明,不同微生物来源的β-D-葡萄糖苷酶对糖苷类香气物质的水解能力不同,产物也存在显著差异,黑曲霉作用产生的香气物质含量远高于其他两种菌株,其中萜烯类香气物质最为丰富,占总香气含量的85.91%。因此,来源于黑曲霉的β-D-葡萄糖苷酶对糖苷类风味物质的作用最显著,可以改善葡萄酒的风味。

Bacillus siamensis和Bacillus subtilis中2个β-D-葡萄糖苷酶编码基因克隆、表达及酶学研究

采用RACE技术扩增2株Bacillus属菌株XY18、XY20的β-D-葡萄糖苷酶编码基因bgl全长,构建重组载体pET28a(+)/bgl、pET28b(+)/bgl,导入E.coli BL21诱导表达,采用Ni亲和层析纯化蛋白。经酶学性质测定发现:2个蛋白均为弱酸性蛋白,温度为40℃时酶活力达到最大,具有一定耐热性。以上结果表明,为优化2株Bacillus属菌株参与香草兰发酵工艺,可提供适当弱酸性条件、适宜温度。