水泡性口炎病毒对体外血管内皮屏障功能的损伤作用及其机制

目的:探讨水泡性口炎病毒(VSV)对血管内皮(VE)屏障的损伤作用,并阐明其作用机制。方法:采用犬肾细胞对VSV进行扩增,采用小鼠脑血管内皮瘤bEnd. 3细胞检测VSV的半数组织培养感染剂量(TCID_(50)),采用300倍TCID_(50)进行后续实验。将bEnd. 3细胞分为感染0 h组、感染4 h组、感染8 h组和感染12 h组,进行VSV感染损伤VE屏障实验;将bEnd. 3细胞分为对照组、感染组和纠正组,进行抑制VSV复制与VE屏障恢复实验。将bEnd. 3细胞接种于Transwell小室,构建体外VE屏障模型,采用细胞电压电阻仪检测感染VSV不同时间后各组bEnd. 3细胞中跨上皮电阻(TER),采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖渗漏实验检测各组渗透系数,采用免疫荧光染色法观察VSV感染后各组bEnd. 3细胞骨架及黏附连接(AJs)中VE-钙黏蛋白、β-连环蛋白(β-catenin)和磷酸化β-连环蛋白(p-β-catenin)定位变化,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中Wnt和β-catenin mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中Wnt、β-catenin和p-β-catenin表达水平。结果:VSV的TCID_(50)为10^(-4.5)·100μL^(-1)。Transwell小室实验检测,与感染0 h比较,其他各组细胞中TER明显降低(P<0.05),渗透系数明显升高(P<0.05)。免疫荧光染色,与对照组比较,感染组bEnd. 3细胞骨架紊乱,细胞间隙增大,AJs线性指数明显降低(P<0.05),β-catenin和p-β-catenin从细胞膜转移至细胞核周围。RT-qPCR法检测,与感染0 h比较,其他各组细胞中Wnt mRNA表达水平明显降低(P<0.05),β-catenin mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting法检测,与感染0 h比较,其他各组细胞中Wnt蛋白表达水平明显降低(P<0.05),β-catenin表达水平差异无统计学意义(P>0.05),p-β-catenin表达水平明显升高(P<0.05)。在抑制VSV复制并纠正低密度脂蛋白受体(LDLR)异常后,Transwell小室实验检测,与感染组比较,纠正组bEnd. 3细胞中TER明显升高(P<0.05),渗透系数明显降低(P<0.05)。免疫荧光染色,与感染组比较,纠正组细胞间隙减小,细胞中β-catenin和p-β-catenin核周聚集现象有所改善。RT-qPCR法检测,与感染组比较,纠正组细胞中Wnt mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与感染组比较,纠正组细胞中Wnt蛋白表达水平明显升高(P<0.05),β-catenin表达水平差异无统计学意义(P>0.05),p-β-catenin表达水平明显降低(P<0.05)。结论:VSV感染后可引起LDLR失活,降低Wnt蛋白表达水平,造成β-catenin磷酸化水平升高并发生内化,破坏AJs稳定性,最终导致VE屏障损伤。

丹皮酚通过调控动脉粥样硬化中的miR-152-3p/ASPH轴抑制氧化低密度脂蛋白诱发的小鼠血管内皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激

目的揭示丹皮酚通过调控miR-152-3p/ASPH轴在ox-LDL诱导的血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)进展中的作用。方法首先,用不同浓度的氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)(0、25、50、100μg·mL^(-1))处理小鼠VECs,选取100μg·mL^(-1)ox-LDL进行实验。然后,用不同浓度的丹皮酚(30、60、120μmol·L^(-1))或辛伐他汀(30μmol·L^(-1))处理VECs。接着,使用细胞计数试剂盒-8和流式细胞术分别用于测定细胞活力和凋亡。此外,使用酶联免疫吸附法分析了IL-1β和IL-6的水平,并使用相关试剂盒检测了活性氧、乳酸脱氢酶和丙二醛的含量。此外,通过qRT-PCR或Western blot检测miR-152-3p和天冬氨酰(天冬酰胺)β-羟化酶(aspartate-β-hydroxylase,ASPH)的表达。miR-152-3p和ASPH之间的相互作用由starBase预测,然后通过双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀实验证实。结果100μg·mL^(-1)ox-LDL显著抑制VECs活力,并促进细胞凋亡、炎症反应和氧化损伤。而丹皮酚的处理以剂量依赖性的方式增加细胞活力,抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡。丹皮酚以剂量依赖性的方式降低ox-LDL诱导的IL-1β和IL-6的水平,以及以剂量依赖性的方式减弱ox-LDL对ROS、MDA和LDH含量的促进作用。另外,ox-LDL对miR-152-3p表达的抑制作用和对ASPH表达的促进作用也被丹皮酚逆转,且120μmol·L^(-1)丹皮酚效果最好。120μmol·L^(-1)丹皮酚能够上调miR-152-3p或下调ASPH,进一步促进丹皮酚对VECs生长的保护作用,miR-152-3p靶向负调控ASPH表达。结论丹皮酚通过调节miR-152-3p/ASPH轴减弱ox-LDL对小鼠VECs生长的影响,为AS的治疗提供理论基础。

非痴呆血管性认知障碍患者血清p-tau-181Aβ_(1-42)及sLOX-1在早期诊断中的意义

目的探讨血清磷酸化tau蛋白-181(p-tau-181)、β淀粉样蛋白_(1-42)(Αβ_(1-42))、可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)在非痴呆血管性认知障碍患者早期诊断中的临床意义。方法选取2022-04—2023-03临汾市人民医院收治的102例非痴呆血管性认知障碍患者为研究组,以同期在我院体检的110例健康者为对照组。所有纳入对象入院后均采用酶联免疫吸附法检测血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1水平,并进行组间比较。采用受试者工作特征(ROC)曲线和曲线下面积(AUC)评价血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1对非痴呆血管性认知障碍的早期诊断价值,同时采用二分类Logistic逐步回归分析非痴呆血管性认知障碍的危险因素。结果研究组血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1水平均高于对照组(P<0.05)。血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1诊断非痴呆血管性认知障碍患者的AUC为0.762(95%CI:0.712~0.812)、0.833(95%CI:0.783~0.883)、0.867(95%CI:0.827~0.907),三者联合早期诊断非痴呆血管性认知障碍患者的AUC为0.917(95%CI:0.867~0.967)。二分类Logistic逐步回归分析显示,Hcy[OR(95%CI)=2.707(1.611~4.551)]、p-tau-181[OR(95%CI)=3.047(1.736~5.347)]、Αβ_(1-42)[OR(95%CI)=2.192(1.422~3.381)]、sLOX-1[OR(95%CI)=3.404(1.883~6.153)]均为影响非痴呆血管性认知障碍发生的相关因素(P<0.05)。结论非痴呆血管性认知障碍患者血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1水平均升高,且均可作为早期诊断的有效指标,三者联合能更有效评估非痴呆血管性认知障碍。

人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白诱导的肾小球系膜细胞TGF-β/Smad/NF-κB通路及细胞凋亡的影响

目的:分析人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白(LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子-β/Smad/核因子kappa B(TGF-β/Smad/NF-κB)通路及细胞凋亡的影响。方法:将HMC细胞分为对照组(不做任何处理)、LDL组(40μg/ml的LDL处理)、人参皂苷Rg3低浓度组(LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg315μmol/L)、人参皂苷Rg3中浓度组(LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg330μmol/L)、人参皂苷Rg3高浓度组(LDL 40μg/mL+人参皂苷Rg360μmol/L)。采用MTT法检测HMC细胞增殖活性;Western Blotting法检测通路相关蛋白TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB以及B淋巴细胞瘤基因相关x蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,LDL组HMC细胞增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与LDL组相比,人参皂苷Rg3低、中、高浓度组HMC细胞增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,HMC细胞凋亡率、Bax和Caspase-3的蛋白水平明显升高,并呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:人参皂苷Rg3可抑制LDL诱导的HMC细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad/NF-κB信号通路密切相关。

六味地黄丸和通络救脑滴丸对2种痴呆模型小鼠脑组织Aβ降解的影响

目的:分析六味地黄丸和通络救脑滴丸对“肾精不足”和“毒损脑络”2种不同痴呆症模型动物脑组织Aβ降解的影响。方法:通过SAMP8小鼠和在SAMR1小鼠双侧海马区注射Aβ_(1-40)分别复制痴呆动物模型,采用水迷宫测定行为功能学,免疫组织化学染色(IHC)法检测海马和皮层中Aβ的表达,Western Blotting法检测海马和皮层中胰岛素降解酶(IDE)、低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)和晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白的表达。结果:2种痴呆模型在游速、避暗错误次数、错误区时间、脑组织海马和皮层中IDE、RAGE和海马中LRP1等蛋白的表达,差异均有统计学意义(均P<0.05);与双侧海马区注射Aβ_(1-40)模型小鼠比较,SAMP8模型小鼠的游速和避暗错误次数下降,脑组织中RAGE表达升高,IDE和LRP1表达降低;通络救脑滴丸对改善双侧海马注射Aβ_(1-40)模型小鼠的避暗潜伏期、脑组织海马区IDE和RAGE的表达水平作用明显;六味地黄丸对改善SAMP8模型小鼠水迷宫寻台成功率、避暗潜伏期、脑组织皮层和海马区IDE表达和海马Aβ的表达水平作用明显。结论:六味地黄丸可改善“肾精不足”证痴呆模型小鼠脑组织Aβ清除障碍,通络救脑滴丸可改善“毒损脑络”证痴呆模型小鼠脑组织Aβ清除障碍。

经典Wnt信号通路与子宫肌瘤

随着中国女性育龄期的延迟,健康查体和医学超声技术的进步,越来越多育龄期女性被发现患有子宫肌瘤。既往有症状的子宫肌瘤最主要的治疗方法是手术治疗,但子宫切除术和子宫肌瘤剔除术均会对育龄期女性生活质量产生不同程度的影响。因此,探讨子宫肌瘤发病机制,寻求新的治疗方法,对于罹患子宫肌瘤女性的诊治具有重要意义。经典Wnt信号通路是调节子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的关键途径,参与子宫肌瘤的发生、发展。因此,探讨经典Wnt信号通路在子宫肌瘤中的作用机制对疾病的诊断、治疗和患者的预后具有重要的临床意义。

盐霉素抑制人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP增殖及诱导凋亡的机制

目的:探讨盐霉素对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP增殖的抑制作用及其可能机制。方法:采用MTT法检测盐霉素对A549/DDP细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549/DDP细胞凋亡及线粒体膜电位(ΔΨm)的影响;比色法检测caspase-3、8和9活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果:盐霉素对A549/DDP细胞生长具有剂量依赖性抑制作用。0.2μmol/L盐霉素作用于A549/DDP细胞,ΔΨm显著下降,而细胞内活性氧和Ca2+浓度在短期显著升高,胞浆细胞色素C蛋白水平、caspase-3、8和9酶活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);Bcl-2的表达下调,Bax的表达明显增加,Bcl-2/Bax比值显著降低。48 h时增殖抑制率为(34.61±1.97)%,细胞凋亡率为(18.74±2.08)%。盐霉素也减少A549/DDP细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论:盐霉素通过抑制Wnt信号通路抑制A549/DDP细胞增殖,通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。

β-胡萝卜素在牛血清和小肠吸收细胞脂蛋白中的分布比较

论文报道了经口腔灌注β－胡萝卜素溶液后其在牛血清和小肠吸收细胞脂蛋白中的分布。试验结果表明：β－胡萝卜素在血清中的运输主要由ＨＤＬ完成，吸收细胞中的可溶性β－胡萝卜素均与脂蛋白结合，绝大多数结合于乳糜微粒。鉴于β－胡萝卜素的脂溶性特征，其吸收是与脂肪紧密结合的，推断是１种被动吸收机制。在吸收细胞和血清中除脂蛋白以外未发现其它β－胡萝卜素转运蛋白。

β谷固醇对高脂饲料喂养小鼠空间学习记忆能力的影响

目的研究β谷固醇对小鼠空间学习记忆能力的影响。方法将60只健康雄性C57BL/6J小鼠按体质量表述方法分为对照组(基础饲料喂养)、高脂模型组(高脂饲料喂养)和β谷固醇低(4.0 mg/kg,LβSITO)、中(16.0 mg/kg,MβSITO)、高(32.0mg/kg,HβSITO)干预组。喂养后第7周进行水迷宫实验检测空间学习记忆能力,第8周进行血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平检测。结果与高脂饲料喂养组相比,高剂量β谷固醇显著降低血清TC和LDL-C水平(P<0.05),显著缩短小鼠逃避潜伏期(P<0.05)、第一次跨越平台所在位置的时间(P<0.05),显著减小初始角度(P<0.05),同时,穿越平台所在位置的次数平均增加1.6次(P=0.065)。结论β谷固醇在降低血清TC和LDL-C水平的同时可能改善空间学习记忆能力。

前β-HDL的结构与功能

血浆中存在一类颗粒小、密度高（ｄ＞１．２１ｇ／ｍｌ）具有前β－脂蛋白迁移率的前β－ＨＤＬ，主要包括前β１－ＨＤＬ、前β２－ＨＤＬ以及前β３－ＨＤＬ三种亚类。研究发现，前β－ＨＤＬ亚类间的递变代谢不仅与ＨＤＬ成熟过程有关，而且还在周围细胞胆固醇移出、酯化以及转运中起着重要作用。本文将就前β－ＨＤＬ的组成、结构。

两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的影响

目的:观察补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin蛋白表达的影响。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组、益气活血方组。线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2?h再灌注2周。治疗组连续给药2周,采用免疫组化EnVision两步法检测额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的阳性面积和平均吸收光密度值。结果:皮质LRP5的平均吸收光密度值(A值),模型组与假手术组之间无明显差异,模型组与补肾组差异显著(P<0.05),模型组与益气组差异不明显,补肾组与益气组之间有明显差异(P<0.01);皮质LRP5的阳性面积值(Area值),模型组与假手术组差异不显著,与各治疗组之间有明显差异(P<0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。皮质β-Catenin的A值,模型组与假手术组之间有明显差异(P<0.05),益气组、补肾组与模型组之间无明显差异,补肾组与益气组之间无明显差异;皮质β-Catenin的Area值,模型组与假手术组之间无明显差异,与各治疗组之间差异具有显著性(P<0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。结论:益气活血方和补肾生髓方能通过降低额顶叶皮质LRP5和升高β-Catenin蛋白表达,调节Wnt信号转导通路,促进脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的增殖分化。

矢车菊素-3-葡萄糖苷对骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶活性的影响

富含矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)的花色苷提取物可抑制肥胖,但其作用机制不明。骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶(LPL)活性与肥胖相关,LPL使骨骼肌中的β-脂肪酸氧化增强,从而加速清除体内循环的甘油三酯(TG),抑制TG流向脂肪组织积聚而导致肥胖。本实验建立稳定的骨骼肌细胞分离培养方法,通过花色苷Cy-3-g干预骨骼肌细胞,研究Cy-3-g对细胞LPL活性的影响及其作用机制。结果表明:Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)上调骨骼肌细胞LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。

色素上皮衍生因子减轻氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞损伤实验

目的研究色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤的抑制作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),建立Ox-LDL诱导的HUVECs损伤模型。Ox-LDL诱导损伤前,给予400μg/L PEDF预处理24 h,分别用MTT法和SYTO-13/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况,Western blot技术检测β-连环蛋白(β-catenin)和蓬乱蛋白(disheveled-1,Dvl-1)表达水平。结果与对照组相比,Ox-LDL浓度为25 mg/L时细胞活力开始明显下降(P<0.05),且浓度达100 mg/L时,细胞存活率下降至最低为49.0%(P<0.05),成功建立Ox-LDL诱导的HUVECs损伤模型。在模型的基础上进行PEDF干预,细胞存活率提高约17%(P<0.05),细胞凋亡率降低约19%(P<0.05),β-catenin和Dvl-1表达显著下调(分别为10%、15%,P<0.05)。结论 PEDF能够减轻Ox-LDL诱导的HUVECs损伤,且在减轻损伤的同时下调Ox-LDL诱导的β-catenin和DVL-1蛋白表达,这可能与PEDF抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

不同水平维生素E和β-胡萝卜素对Cu^(2+)氧化修饰低密度脂蛋白的影响

研究不同浓度的维生素 E(VE)和β-胡萝卜素 (βC)对 Cu2 + 诱导的氧化修饰低密度脂蛋白 (L DL )作用的影响 ,通过测定硫代巴比妥酸反应物质 (TBARS)、L DL 的电泳迁移率 (Rf)以及荧光物质 (L ipofusin)扫描 ,反映 L DL的氧化修饰程度。结果表明 :VE、βC均可减少 TBARS的产生、减小 L DL的 Rf,并且具有剂量 -效应关系 ,随浓度增加 ,VE抑制作用加强而 βC抑制作用减弱 ,而且 VE对 TBARS的影响比 βC小 ,对 Rf的影响比βC大。二者对荧光物质均有降低作用 ,但无剂量 -效应关系。提示 VE、βC均可不同程度的抑制Cu2 +氧化修饰 L DL 的作用 ,在降低机体脂质过氧化反应、减少氧化修饰型 L DL(OX- L DL)的形成方面具有重要作用 。

矢车菊素-3-葡萄糖苷通过AMPK抑制成熟脂肪细胞脂蛋白脂酶活性

通过矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)干预成熟脂肪细胞,研究Cy-3-g对细胞脂蛋白脂酶(LPL)活性的影响及其作用机制。结果表明:Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)抑制成熟脂肪细胞的LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。

氧化修饰型低密度脂蛋白与高糖对血管内皮细胞TGF-β_1生成的影响及意义探讨

目的 通过用不同浓度的葡萄糖及氧化修饰型低密度脂蛋白 (ox- L DL)刺激血管内皮细胞 ,测定其分泌TGF-β1 的含量 ,探讨在高糖、高脂诱导下动脉粥样硬化形成中 TGF-β1 的分泌变化及其意义。方法 用酶消化法体外培养血管内皮细胞 ,分别用 L DL 5 0μg/ ml、10 0μg/ ml、2 0 0μg/ ml和 D-葡萄糖 5 mmol/ L、2 5 mmol/ L、5 0 mmol/ L刺激内皮细胞 ,2 4小时后收集培养上清 ,EL ISA法测定培养上清内 TGF- β1 的含量。结果 ox- L DL 能明显促进内皮细胞分泌 TGF- β1 (P<0 .0 1) ,且有剂量效应 ;D-葡萄糖在 5 mmol/ L 的浓度下 ,与对照组比无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,在 2 5 mmol/ L 的浓度下内皮细胞的分泌明显增加 (P<0 .0 1) ,在 5 0 mmol/ L时 ,TGF-β1 含量无明显增加 (P>0 .0 5 )。结论 ox- L DL和高糖能明显诱导内皮细胞分泌 TGF-β1 。

益骨汤含药血清通过经典Wnt信号通路促进成骨细胞增殖分化的研究

目的:在经典wnt信号通路抑制剂大鼠Dickkopf相关蛋白1(DKK1)的干预下,观察益骨汤含药血清对成骨细胞的经典Wnt信号通路的影响,探究益骨汤治疗骨质疏松的作用机制,为临床使用补肾活血中药防治骨质疏松症提供实验依据。方法:将40只雌性SD大鼠随机分成2组,益骨汤水提液组和空白对照组,连续灌胃10天,获取含药血清。从乳鼠颅盖骨中分离培养成骨细胞,实验分为4组,即A组(益骨汤含药血清组)、B组(DKK1组)、C组(DKK1+益骨汤含药血清组)、D组(空白血清对照组)。进行细胞增殖MTT检测、碱性磷酸酶活性检测,RT-PCR检测经典Wnt/β-catenin通路中β-链蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、DKK1基因的表达情况。结果:根据MTT法动态观察各组成骨细胞增殖,发现成骨细胞增殖呈规律性:48 h至72 h成骨细胞呈对数增长期,96 h后细胞增殖逐渐受到抑制。同一时间点与B组比较,A、C、D各组成骨细胞的增殖和ALP活性显著较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。同一时间点与D组比较,A组成骨细胞的增殖和ALP活性显著较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与B组比较,A、C、D组β-catenin mRNA、LRP-5 mRNA、TCF mRNA的表达均明显升高,DKK1 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与D组比较,A组β-catenin mRNA、LRP-5 mRNA、TCF mRNA的表达均明显升高,DKK1 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:益骨汤含药血清可能是通过抑制DKK1的高表达,从而上调经典Wnt/β-catenin信号中β-catenin、LRP-5、TCF基因的表达,达到促进成骨细胞增殖,起到抗骨质疏松作用。

OX-LDL诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞TGF-β与Fn基因表达的影响及水蛭素的干预作用

目的:研究氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞转化生长因子(TGF-β)、纤连蛋白(Fn)基因表达的影响以及水蛭素的干预作用,探讨炎症状态下肾硬化发生的病理机制和水蛭素的有效作用。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,将OX-LDL诱导活化的大鼠腹腔巨噬细胞转入细胞培养小室,或采集其条件培养基与肾小球系膜细胞共培养;水蛭素干预组在分层共培养系统的培养有系膜细胞的下层培养液中加入水蛭素,浓度分别为2.5U/ml、5.0U/ml、10U/ml。逆转录-聚合酶链扩增反应(RT-PCR)检测肾小球系膜细胞TGF-β、Fn的基因表达。结果:OX-LDL刺激后,大鼠腹腔巨噬细胞上清液中IL-1浓度明显升高;无论是活化的巨噬细胞还是其条件培养基均能上调TGF-β和FnmRNA的表达,但以分层共培养作用最为显著;水蛭素在一定浓度下可显著下调TGF-β和Fn的基因表达。结论:(1)在分层共培养条件下,OX-LDL诱导活化的巨噬细胞与系膜细胞处于一个整体系统中,巨噬细胞不仅可通过分泌细胞因子等病理产物,而且两种细胞还可能通过相互作用增强对系膜细胞增殖和TGF-β和Fn分泌等的促进作用。(2)水蛭素可能通过抑制病理条件下硬化因子和细胞外基质的基因表达起到干预肾硬化的作用。

β极低密度脂蛋白经细胞外信号调节激酶信号途径诱导其受体表达上调

为探讨β极低密度脂蛋白诱导极低密度脂蛋白受体表达上调的信号转导途径及其对巨噬细胞胞内脂质堆积的影响,采用Western方法检测β极低密度脂蛋白温育后巨噬细胞内的细胞外信号调节激酶活性,在体外培养的巨噬细胞中加入不同信号途径关键激酶的抑制剂,观察各信号途径对受体调控的阻断效应,测定胞内胆固醇和甘油三酯的含量,观察泡沫细胞的形成。结果发现,β极低密度脂蛋白以蛋白激酶C依赖的方式激活巨噬细胞中的细胞外信号调节激酶1/2活性。细胞外信号调节激酶1/2抑制剂和蛋白激酶C抑制剂可显著阻断β极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞极低密度脂蛋白受体转录的效应,而P38抑制剂和蛋白激酶C激动剂对β极低密度脂蛋白诱导极低密度脂蛋白受体表达上调无明显影响。细胞外信号调节激酶1/2抑制剂可抑制β极低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞内胆固醇和甘油三酯含量升高。上述结果表明,蛋白激酶C依赖的细胞外信号调节激酶1/2信号级联可能是介导β极低密度脂蛋白诱导极低密度脂蛋白受体表达上调的主要信号转导途径,特异地抑制此信号途径可抑制β极低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞胞内脂质堆积。

电针对APP/PS1转基因小鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白-1及其mRNA表达的影响

目的:研究电针是否是通过影响LRP1mRNA水平、提高LRP1的表达,从而促进脑内Aβ清除。方法:将4月龄APP/PS1转基因鼠,随机分为模型组、电针治疗组,以同窝同背景转基因阴性小鼠为正常对照组。电针干预"涌泉"、"百会"0.1 m A,15 min/次,隔日1次,治疗6周。治疗后,以免疫组化法观察脑组织LRP1阳性表达,以Western blotting法检测海马LRP1表达,以Real-time PCR法检测海马LRP1mRNA表达。结果:LRP1表达于脑微血管内皮细胞、胶质细胞、神经元等处。模型组海马LRP1蛋白、LRP1mRNA相对表达量低于正常对照组(P<0.05),电针治疗组海马LRP1及LRP1mRNA比模型组有上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针干预可能影响5月龄APP/PS1转基因小鼠海马内所有细胞LRP1及LRP1mRNA表达,可能是电针干预AD发病的潜在靶点,但实验方案还需进一步完善。