水环境和水产品中β-N-甲氨基-L-丙氨酸(BMAA)检测方法和检出情况的研究进展

本文对蓝藻毒素β-N-甲氨基-L-丙氨酸(β-N-methylamino-L-alanine,BMAA)的结构形态、检测方法、环境和食物中的检出情况等方面进行系统综述.研究结果表明,BMAA主要存在3种赋存形态(游离态、溶解结合态、沉淀结合态);环境和食物中的BMAA类目前主要采用经过AQC衍生的LCMS/MS法检测,样品需经形态分离后、采用MCX固相萃取小柱处理.水环境、水产品和藻类保健品中BMAA类的污染已被大量报道.亚洲、北美洲、欧洲的相关环境和食物中均有一定的检出(检出浓度:水样<0.01—25.3μg·L^(-1);藻类<0.01—300μg·g^(-1);非鲨鱼水产品中0.08—115.3μg·g^(-1);藻类保健品中0.04—0.73μg·g^(-1)).BMAA存在生物积累和生物放大的现象,水产品中营养级别越高的生物检出浓度就越高,如鲨鱼类产品中检出浓度高达34—2011μg·g^(-1),需要引起重视.我国目前对BMAA的相关研究还很有限,未来应加强检测方法、现场调查、风险评估等相关方面的研究,以全面了解我国人群对BMAA类物质的暴露风险.

神经毒素β-N-甲氨基-L-丙氨酸的毒理学与检测方法研究进展

β-N-甲氨基-L-丙氨酸(BMAA)是一种具有神经毒性的非蛋白氨基酸。研究表明,BMAA能够损伤运动神经元。在自然环境中,BMAA可以沿食物链传递,具有生物放大现象,可能参与肌萎缩侧索硬化-帕金森痴呆综合征的发病过程。大部分浮游蓝细菌(蓝藻)能够产生BMAA,环境中广泛存在的蓝藻可能会对人类健康构成威胁。本文对BMAA的理化性质、毒性、致毒机制、检测方法及其沿食物链的传递行为等进行了综述,以期为蓝藻毒素对人体健康的风险评估提供参考依据。

不同液相色谱-质谱联用法分析贝类样品中神经毒素β-N-甲氨基-L-丙氨酸的比较

基于液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS),比较了两种亲水交互作用(hydrophilic liquid interaction chromatography column,HILIC)色谱柱和C18色谱柱分析扁玉螺(Neverita didyma)、脉红螺(Rapana venosa)、栉江珧(Atrina pectinata)和菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)等贝类样品中神经毒素β-N-甲氨基-L-丙氨酸(β-N-methylamino-L-alanine,BMAA)及其同分异构体化合物的性能。本研究采用Agilent 6430串联质谱对3批扁玉螺样品中的游离态、总溶解态和沉淀结合态BMAA毒素进行了分析,通过AB Sciex Qtrap 4500质谱分析了其他3种贝类样品的总溶解态BMAA。结果表明,4种贝类样品均含有BMAA和低浓度的2,4-二氨基丁酸(2,4-diaminobutyric acid,DAB),且扁玉螺中的β-氨基-N-甲基丙氨酸(β-amino-N-methylalanine,BAMA)含量较低,其他3种贝类含有较高浓度的BAMA,但均未检出N-2-氨乙基甘氨酸[N-(2-aminoethyl)glycine,AEG]。HILIC-MS/MS直接分析法获得的定量结果均高于AQC-柱前衍生法的定量结果,建议使用HILIC-MS/MS直接分析法对生物样品中的BMAA进行定性和定量分析,采用变迁离子119->88和119->44的信号强度辅助定性,并使用前者的色谱峰面积进行定量计算,条件允许时可采用AQC-柱前衍生法进行辅助定性分析。本研究可为生物样品中BMAA毒素的检测分析提供重要的方法学参考。

藻毒素β-N-甲氨基-L-丙氨酸(BMAA)的氯化降解

本文建立了高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)来检测水中BMAA,并以次氯酸钠为消毒剂进行模拟氯化,研究BMAA的氯化降解及环境因子对BMAA降解的影响.结果表明,采用亲水交换作用色谱柱建立的HPLC-MS/MS分析方法,样品前处理过程简单易操作,在2—500μg·L^(-1)范围内线性关系良好(R2=0.9995),且检出限低(0.2μg·L^(-1)).在常规条件下(Cl∶N=2∶1,T=20℃,p H=7),BMAA能通过氯化得到有效降解,2 h降解率达到80%,6 h降解率达到97%;低的Cl∶N,低温及碱性条件下,BMAA的降解率显著降低.研究结果为饮用水预氯化及氯化消毒去除BMAA提供了理论依据.

藻类保健品中β-N-甲氨基-L-丙氨酸及其同分异构体的检测方法及污染分析

目的建立藻类保健品中β-N-甲氨基-L-丙氨酸(BMAA)类毒素基于6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)衍生的液质联用检测方法,了解当前国内藻类保健品中BMAA类毒素的污染水平。方法样品经酸水解、氮气浓缩、AQC衍生后采用超高效液相色谱串联质谱分析,2种同位素内标法定量。结果在线性范围0.25~100μg/L内,3种BMAA类毒素的相关系数均在0.998以上;当取样15 mg,定容至20.0 mL时,藻类保健品中BMAA、N-2-氨乙基甘氨酸(AEG)和2,4-二氨基丁酸(DAB)的检出限分别为133、133和200μg/kg,定量限分别为443、443和667μg/kg;回收率在86.7%~126.0%之间,相对标准偏差为1.1%~14.0%。国产藻类保健品中DAB的检出率(86%)最高,其次为AEG(23%)和BMAA(14%);在检出的样品中DAB、AEG和BMAA浓度范围依次为385~2305μg/kg、250~518μg/kg和472~698μg/kg。结论本研究建立的AQC衍生-液质联用法操作时间短、准确性高,检测的国产藻类保健品中BMAA类毒素的污染水平较高,应引起重视。

蓝藻菌/β-N-甲氨基-L-丙氨酸学说在肌萎缩侧索硬化症及其他神经变性病致病机制中的研究进展

肌萎缩侧索硬化症(ALS)是一种进行性致死性神经变性病,按发病类型分为散发性和遗传性两种。其中,散发性ALS发病率全球相对一致,但在关岛等少数西太平洋地区的人群聚居地发病率有增高现象,且常伴有肌萎缩侧索硬化-帕金森-痴呆叠加症(ALS/PDC)。研究发现寄生在苏铁根部的蓝藻菌产生的非蛋白质氨基酸[β-N-甲氨基-L-丙氨酸(BMAA)]与关岛的ALS/PDC发病有关。易感个体长期暴露在富含BMAA的环境中可导致BMAA在神经蛋白中聚集,产生ALS等迟发性进行性神经变性病。本文就蓝藻菌/BMAA作为神经变性病环境致病毒素的假说及其研究进展综述如下。

鸟氨酸氨甲酰基转移酶/丙氨酸氨基转移酶和甲胎蛋白联合检测在肝细胞癌中的诊断价值

目的:研究鸟氨酸氨甲酰基转移酶/丙氨酸氨基转移酶(OCT/ALT)比值和甲胎蛋白(AFP)联合检测对肝细胞癌的诊断价值。方法:测定61例肝细胞癌、49例慢性肝炎、45例肝硬化和51名健康体检者血清OCT/ALT比值和AFP水平,应用受试者工作特征曲线(ROC)进行评价。结果:肝细胞癌组血清OCT/ALT和AFP水平高于对照组、肝炎组和肝硬化组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清OCT/ALT和AFP的ROC曲线下面积分别为0.808和0.758。OCT/ALT的最优截断点约为3.2,灵敏度和特异度为68.3%和90.3%。AFP的最优截断点约为400ng/ml,灵敏度和特异度分别为60.7%和80.0%。结论:通过ROC曲线评价,在肝细胞癌的诊断中,血清OCT/ALT和AFP联合检测优于两项指标的单独检测。

(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯的脂肪酶酶促水解拆分方法

酶法拆分（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯,其反应体系为：在含1 mmol（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯的100 mL 0.2 mol.L-1磷酸缓冲液（PBS）中,添加2 g聚乙二醇（PEG-6000）,并用皱落假丝酵母脂肪酶（Candida rugosalipases,CRL）拆分,反应后分离得到R-（＋）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯。进一步采用高效液相色谱检测酶促反应的转化率,采用250 mm×4.6 mm,5μHypersil（ODS色谱柱,以甲醇与水混合液（体积比为80∶20）为流动相,230 nm为检测波长,外标法峰面积定量。（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸和其甲酯的回收率在91.5%-96.1%之间。

N-Boc-3-碘锌-L-丙氨酸甲酯的合成研究

以天然存在的手性氨基酸 L-丝氨酸为原料 ,经酯化、氨基保护后再把 3-位上的羟基对甲苯磺酰化 ,然后碘代生成 3-碘代丙氨酸衍生物 ,再与活化锌粉在超声波作用下生成 N- Boc- 3-碘锌 - L-丙氨酸甲酯 ,这种产物是合成氟代酪氨酸的中间体。利用 1 H- NMR,IR和 MS对 N- Boc- 3-碘锌 -

N-(2,6-二甲苯基)-N-酰基丙氨酸甲酯类化合物的合成及生物活性研究

以α-氯丙酸为起始原料,甲酯化后得α-氯丙酸甲酯;在碘化钾催化下,α-氯丙酸甲酯与2,6-二甲基苯胺缩合获得中间体N-(2,6-二甲苯基)丙氨酸甲酯,再在室温下以吡啶作缚酸剂,与系列羧酸酰氯反应15 h,合成了12个新型N-(2,6-二甲苯基)-N-酰基丙氨酸甲酯类目标化合物。目标化合物的结构经GC-MS、FTIR和元素分析确认。对目标化合物进行了杀菌、杀虫、除草生物活性测定,结果表明,各化合物均具有不同程度的杀菌生物活性。

急性甲型肝炎患者血清丙氨酸氨基转移酶值与胆囊声像图变化的相关性探讨

目的探讨利用胆囊声像图变化来判断急性甲型肝炎患者的肝细胞损害程度。方法超声测量41例健康志愿者和33例急性甲型肝炎患者胆囊的长径和短径,以及急性肝炎患者胆囊壁的厚度,计算胆囊面积和胆囊壁厚-面积比;利用生化仪以速率法检测患者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT);将肝炎组胆囊壁厚度、胆囊面积和胆囊壁厚-面积比分别与ALT值进行直线相关与回归分析比较。结果健康志愿组胆囊壁光整,壁厚为(0.11±0.07)cm,胆囊面积为(22.1±4.97)cm2。胆囊壁厚-面积比为(0.0095±0.0023)cm-1,ALT值为(23±11)IU/L。急性肝炎组的胆囊壁厚度为(0.82±0.22)cm,胆囊面积为(16.36±4.87)cm2,胆囊壁厚-面积比为(0.0517±0.0176)cm-1;ALT值为(1737.46±784.03)IU/L;以上参数(胆囊壁厚度、胆囊面积、胆囊壁厚-面积比、ALT值)与健康志愿组相应参数两两比较,差异具有显著性,P<0.05。急性肝炎组的ALT值与该组胆囊壁厚-面积比之间存在着直线回归和相关性,(Y=87.26+28477.79x,r=0.72,P<0.05);ALT值与胆囊壁厚度及胆囊面积之间无直线相关性。结论1.胆囊声像图的改变是可以反映ALT的高低,从而可间接反映肝脏实质细胞的损害程度,至少急性甲型肝炎患者如此;2.胆囊壁厚-面积比是判断肝细胞损害程度比较合适的超声观察指标。

旋光性N-(2,6-二甲苯基)-N-酰基丙氨酸甲酯类化合物的合成及生物活性研究

以α-氯丙酸、甲醇、2,6-二甲基苯胺为起始原料,合成了N-(2,6-二甲苯基)丙氨酸甲酯。以S(-)-α-甲基苄胺为化学拆分剂,利用非对映异构体在不同溶剂中溶解度的差异,分离得到了R(+)、S(-)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸的两个旋光异构体和反-R(+)、反-S(-)、顺-R(+)和顺-S(-)-二氯菊酸的4个旋光异构体。两个N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸旋光异构体与甲醇反应得到两种N-(2,6-二甲苯基)丙氨酸甲酯的旋光异构体。最后N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯的旋光异构体与二氯菊酰氯的7个异构体进行反应,合成了19个N-(2,6-二甲苯基)-N-酰基丙氨酸甲酯类化合物,其中18个具有旋光性。这些化合物的结构经GC-MS、FTIR测定后确认。对19个标题化合物进行了杀菌、杀虫生物活性实验,结果表明,部分化合物显示出较高的杀虫、杀菌活性。

4-(2-乙酰氨基-3-羧基丙酰氨基)苯甲酸的合成工艺研究

以L-天冬氨酸和乙酸酐为原料,经脱水环化合成N-乙酰-L-天冬酸酐,然后与对氨基苯甲酸经N-酰化反应合成得到新化合物4-(2-乙酰氨基-3-羧基丙酰氨基)苯甲酸。通过Scifinder查询,未发现它的报道。研究了物料配比、反应温度、反应时间和溶剂等因素对产物收率的影响。优化条件为:无水乙醇作溶剂,n(N-乙酰-L-天冬酸酐)∶n(对氨基苯甲酸)=1∶1,反应温度为45℃,反应时间为3 h。优化条件下产物收率为78.7%。目标化合物经熔点、红外和核磁氢谱确证。

甲型H1N1流感患者丙氨酸氨基转移酶意义分析

目的探讨甲型H1N1流感患者血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)值的变化与健康人群的差异是否有统计学意义,是否将ALT值作为甲型H1N1流感的辅助诊断。方法随机抽取201例健康体检者资料和201例甲型H1N1流感患者作比较,统计其ALT值并用统计学方法检验。结果甲型H1N1流感患者的ALT均值较健康人群高,差异有统计学意义。结论甲型H1N1流感患者血清中ALT值变动有意义,可作为甲型H1N1流感的辅助诊断。

4-苯甲酰基-L-苯基丙氨酸的合成方法研究进展

4-苯甲酰基-L-苯基丙氨酸是含有二苯甲酮结构的非天然氨基酸。其所含的二苯甲酮结构在特定紫外光线波长照射下能够发生电子跃迁,并和邻近大分子(比如蛋白质)中的氨基酸残基形成共价键,起到了对大分子中特定结构位置的定位作用。依照时间的先后,对目前所报道4-苯甲酰基-L-苯基丙氨酸的合成方法进行了综述。比较了它们各自的优缺点,并提出可能的改进方法,对实际合成工作具有指导意义。

3-氯-L-丙氨酸盐酸盐的合成研究

通过对反应过程的优化,探索3-氯-L-丙氨酸盐酸盐的最佳合成工艺并对中间产物以及最终产物进行质谱表征。实验得最佳工艺为:5.00 g的L-丝氨酸和4.15 ml二氯亚砜,低温反应1 h后升温至40℃继续反应4.5 h,产率约83.9%;5.00 g的L-丝氨酸甲酯盐酸盐和7.36 g五氯化磷,冰水浴下反应2 h后升温至30℃继续反应2 h,产率约95.3%;5.00 g的3-氯-L-丙氨酸甲酯盐酸盐在50 mL的6 mol/L的盐酸中先回流反应1 h后再蒸馏反应0.8 h,产率约75.4%。总产率约60.3%。

杯芳烃受体的合成及其对氨基酸的识别

以对叔丁基苯酚和甲醛为原料在碱(氢氧化钠)溶液中按配比反应并在一定温度下回流(杯[4]在二苯醚中)可得到对叔丁基杯芳烃.将对叔丁基杯芳烃与过量的苯酚作用在无水三氯化铝催化下消去叔丁基再进行磺化(水浴80℃)得到了水溶性的杯芳烃磺酸钠盐.用所合成的水溶性杯芳烃磺酸钠受体对氨基酸酯(L-丙氨酸甲酯)进行识别.

聚（羟基乙酸-N^ε-苄氧羰基-L-赖氨酸-乳酸）的制备及表征

目的:合成一种新型的带有反应活性基团的聚(乳酸-赖氨酸)共聚物,以改善聚乳酸的细胞亲和性。方法:以Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸和溴乙酰溴为起始原料,合成了单体3S-[4-(苄氧羰基氨基)丁基]-吗啉-2,5-二酮,再以辛酸亚锡为催化剂,通过3S-[4-(苄氧羰基氨基)丁基]-吗啉-2,5-二酮与D,L-丙交酯共聚,制备了聚(羟基乙酸-Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸-乳酸),并用FT-IR,1H-NMR,13C-NMR对反应产物进行了表征。结果:FT-IR,1H-NMR,13C-NMR谱图表明各步反应产物的生成,根据1H-NMR谱图中质子峰的积分面积之比得到共聚物中各单体的摩尔分数。结论:Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸被成功引入到聚乳酸主链中,且共聚物中各组分的含量可通过投料比的不同在较大范围内进行调节。

血清甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ、GGT、GGT/ALT检测对早期原发性肝癌的诊断价值

目的 研究血清甲胎蛋白、异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、GGT/丙氨酸氨基转移酶(GGT/ALT)在早期原发性肝癌诊断中的临床价值。方法 研究方法为前瞻性分析,观察对象为2020年1月至2023年1月攀枝花市中西医结合医院的80例疑似早期原发性肝癌患者,将细胞学、病理学活检诊断结果作为本次研究的金标准划分两组,分别命名为恶性组(n=53)与良性组(n=27)。分别采集血液样本检测血清甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ、GGT、ALT水平,并计算GGT/ALT比值;比较两组患者血清甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ、GGT、GGT/ALT表达水平。比较两组患者血清甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ、GGT、GGT/ALT阳性情况。所有患者均进行细胞学、病理学活检,分析血清甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ、GGT、GGT/ALT单一指标、联合指标诊断原发性肝癌与病理学诊断结果的一致性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ、GGT、GGT/ALT 4项指标单一与联合对原发性肝癌的诊断效能。结果 恶性组患者的血清甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ、GGT、GGT/ALT表达水平分别为(1 118.82±67.85) ng/mL、(582.43±197.17) mAU/mL、(102.06±9.47) U/L、3.19±1.71,均明显高于良性组[(9.30±4.76) ng/mL、(31.18±7.34) mAU/mL、(71.64±21.98) U/L、1.61±0.64],差异均有统计学意义(P<0.05)。恶性组患者血清甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ、GGT、GGT/ALT单一及联合指标阳性率分别为73.58%、88.68%、100.00%、54.72%、100.00%,均明显高于良性组(40.74%、14.81%、70.37%、18.52%、33.33%),差异均有统计学意义(P<0.05)。血清甲胎蛋白与组织病理学诊断之间的一致性系数Kappa=0.320(P=0.004),血清PIVKA-Ⅱ与组织病理学诊断之间的一致性系数Kappa=0.725(P<0.001),血清GGT与组织病理学诊断之间的一致性系数Kappa=0.358(P<0.001),血清GGT/ALT与组织病理学诊断之间的一致性系数Kappa=0.309(P=0.002),联合诊断与组织病理学诊断之间的一致性系数Kappa=0.385(P=0.001)。ROC曲线显示,甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ、GGT、GGT/ALT诊断早期原发性肝癌的曲线下面积(AUC)分别为0.842、0.943、0.908、0.899、0.997。结论 在早期原发性肝癌诊断中,血清PIVKA-Ⅱ水平检测的诊断价值优于甲胎蛋白、GGT、GGT/ALT,AFP、PIVKA-Ⅱ、GGT、GGT/ALT 4项指标联合检测的价值优于单一指标检测。

4'-氨甲酰基-N-叔丁氧羰基-2',6'-二甲基-L-苯丙氨酸甲酯的合成

本研究报道了一条新路线合成伊卢多啉的关键中间体4'-氨甲酰基-N-叔丁氧羰基-2',6'-二甲基-L-苯丙氨酸甲酯。以2,6-二甲基苯胺为起始原料,经对位溴取代制得4-溴-2,6-二甲基苯胺,再和氰化亚铜在高温下发生氰基取代生成4-氨基-3,5-二甲基苯腈,然后经重氮化反应及碘置换反应制得4-碘-3,5-二甲基苯腈,再在碱性条件下水解氰基得4-碘-3,5-二甲基苯甲酰胺,最后和N-叔丁氧羰基-3-碘-L-丙氨酸甲酯经Negishi偶联制得目标化合物,总收率55.5%,纯度97.3%。