通过富集母血浆中胎儿游离DNA无创性产前诊断β地中海贫血

目的:评价富集母血浆中胎儿游离DNA的实验平台在母血浆中富集、鉴定胎儿游离DNA的适用范围。方法:(1)筛选与父源性β地中海贫血基因连锁的单核苷酸多态性(SNP)位点:利用Haploview软件对20例β地中海贫血患者(其中CD41-42型11例,IVS-II-654型9例)的β地中海贫血基因(HBB基因)进行SNP与单倍型自动化分析,检索出HBB基因内杂合度较高的SNP位点并检测与CD41-42位点及IVS-II-654位点连锁的SNP位点。(2)选取4例孕妇外周血标本,且夫妇双方为不同的β地中海贫血基因类型,利用快速耐受温度-低变性温度共扩增PCR技术(TT-FAST-COLD-PCR)检测父源性β地中海贫血基因类型为IVS-II-654型的孕妇外周血标本,若未直接检测到IVS-II-654位点,则检测仅与IVS-II-654位点连锁的SNP位点;同样的原理,利用完全耐受温度-低变性温度共扩增技术(TT-FULL-COLD-PCR)检测父源性β地中海贫血基因类型为CD41-42型的孕妇外周血标本;同时利用普通PCR技术对上述标本进行检测。结果:(1)检测出IVS-II654位点与rs7480526位点连锁9例;CD41-42位点与rs10768683位点连锁11例;(2)通过TT-FAST-COLD-PCR技术在孕妇外周血中检测出1例父源性致病突变基因(IVS-II-654位点),另外1例未直接检测到父源性致病突变基因,但检测到与其连锁的SNP位点(rs7480526位点),与羊水细胞培养检测结果一致,检出率为100%(2/2);通过TT-FULL-COLD-PCR技术在孕妇外周血中检测出2例父源性致病突变基因(CD41-42位点),与羊水细胞培养检测结果一致,检出率为100%(2/2);而普通PCR技术均未检测到上述父源性致病突变基因及与父源性等位基因连锁的SNP位点。结论:TT-COLD-PCR技术适用于富集母血浆中胎儿游离DNA突变,可用于无创性产前诊断单基因遗传病。

红细胞参数及公式在遵义地区β地中海贫血和缺铁性贫血鉴别诊断中的效能评价

目的探讨红细胞参数及公式在β-地中海贫血(β-thalassemia minor,β-TT)和缺铁性贫血(iron deficiency anemia,IDA)鉴别诊断中的效能,评价β-TT和IDA的11个鉴别公式在遵义地区的应用价值,并确定适用于本地区的最佳临界值。方法纳入2018年11月—2019年10月首次就诊于遵义市第一人民医院的213例β-TT和IDA患者,回顾分析2组患者血常规红细胞参数;计算每个鉴别公式的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、约登指数及正确识别率;根据受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)得出鉴别公式的最佳临界值(cut-off value)。结果β-TT组患者Hb、HCT、MCHC高于IDA组,差异均有统计学意义(P<0.05);MCV、RDW明显低于IDA组,差异均有统计学意义(P<0.05);2组患者的RBC差异无统计学意义(P>0.05)。RDW、Green and king公式(GK)和England and Fraser公式(EF)曲线下面积(AUC)分别为0.993,0.961和0.954,具有较好的鉴别性能,Shine and Lal公式(SL)和RBC的AUC分别为0.637和0.128,不适合作为本地区鉴别β-TT和IDA的公式。确定不同于原始值的新cut-off值为临界值。结论红细胞参数对鉴别诊断β-TT与IDA有较好的临床价值;RDW、GK和EF公式适合作为遵义地区β-TT和IDA患者的鉴别公式;新cut-off值可能更适合遵义地区鉴别β-TT和IDA。