THE SIMULATION AND OPTIMIZATION OF GRADIENT ELUTION HPLC

The movement of a particular component along an HPLC column is studied on the ba-sis of equilibrium equations. Numerical simulation of multi--step gradient elution HPLC isperformed by means o? a personal computer program. The location x, as a fraction of thecolumn length, for a given time t o? each compound is calculated, the velocity and corre-sponding acceleration are given as well. Diagrams for x,dx/dt and d^2x/dt^2 versus t display themovement process of the different components along the HPLC column during gradient elu-tion. The prediction of the retention time and peak width, and the optimization for the multi-step gradient elution HPLC are all based on such simulation and the molecular structure ofthe. components is separated as well.

HPLC法同时测定盐酸阿霉素与氯尼达明的含量

目的建立同时测定盐酸阿霉素(DOX·HCl)与氯尼达明(LND)含量的测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Agilent 5 HC-C_(18)(2)(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%TFA水溶液,梯度洗脱,甲醇比例随时间变化为:0~3 min,65%甲醇;3~7 min,65%→90%甲醇;7~13 min,90%甲醇;13~15 min,90%→65%甲醇;15~20 min、65%甲醇。采集时间20 min,平衡时间3 min,紫外检测波长205 nm及253 nm,流速1.0 ml/min,柱温35℃,进样量:10μl。结果该方法专属性好,盐酸阿霉素在1~40μg/ml的浓度范围内线性良好,氯尼达明在6~240μg/ml的浓度范围内线性良好。该方法之下,两种化合物的精密度、稳定性、回收率均符合要求。结论建立了同时检测盐酸阿霉素与氯尼达明含量的液相分析方法,该方法专属性强,准确可靠。

HPLC梯度洗脱法测定雷公藤多苷片中甲素的含量

目的建立以梯度洗脱测定市售雷公藤多苷片中甲素含量的方法。方法采用HPLC以甲醇-水为流动相梯度洗脱;流速为0.9ml/min;柱温为25℃;检测波长为218 nm。结果线性范围为0.65~41.68μg/ml,r=0.9998,平均回收率103.43%,RSD=0.96%(n=9)。结论梯度洗脱法比现行质量标准的检测方法重复性更好、精密度更高。可作为雷公藤制剂中甲素的定量检测方法。

葛根药材HPLC指纹图谱研究

目的 :对不同来源的葛根药材指纹图谱比较研究。方法 :应用RP HPLC法、KromasilC18分析柱、乙腈 水二元梯度洗脱 ,流速为 1.0mL·min-1,检测波长 2 5 0nm。结果与结论 :不同来源的葛根药材所含黄酮类成分均得到很好的分离 ,该法可用于鉴别葛根的品种 ,并为葛根注射液及含葛根药材的中药复方注射液指纹图谱研究奠定基础。

HPLC测定附子及其炮制品中3种双酯型生物碱的含量

目的：建立同时测定附子中3种双酯型生物碱——新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量的HPLC分析方法。方法：Zorbax Eclipse XDB C18柱，40mmol乙酸铵缓冲液-乙腈，梯度洗脱，流速1.0mL·min^-1，检测波长230nm。结果：3种双酯型生物碱新乌头碱、乌头碱、次乌头碱均达到了较好的分离，分别在0．0357-1.784μg（r=0．9999），0.0126-0．632μg（r=0．9997）和0．0334-1．672μg（r=0．9997）呈良好的线形关系。结论：该方法简便、快速、灵敏，可有效地用于附子的鉴别和内在质量控制。

HPLC梯度洗脱法测定防风中4种主要成分含量

目的:在原有防风HPLC含量测定方法基础上改进测定条件。方法:应用HPLC法,以防风中4种主要成分为指标;采用Alltima C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1。结果:运用梯度洗脱,建立防风中防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷,防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷,防风色原酮Ⅰ,防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷的HPLC含量测定方法,与前方法相比测定结果无显著性差异。结论:HPLC梯度洗脱法测定防风中4种主要成分含量比原方法(两种流动相系统)简便、易于操作。

HPLC法同时测定当归四逆汤中4种有效成分的含量

目的建立HPLC法同时测定当归四逆汤中4种有效成分的含量。方法采用HypersilODS色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），以乙腈-体积分数为1．4％的冰醋酸水溶液进行线性梯度洗脱，流速：1．0mL·min^-1，检测波长：275nm，进样量：10μL。结果阿魏酸的线性为0．86～20．64mg·L^-1（r=0．9992），平均回收率为96．2％，RSD为1．5％；芍药苷的线性为20～200mg·L^-1（r=0．9993），平均回收率为97．3％，RSD为1．0％；肉桂酸的线性为2．1～27．3mg·L^-1（r=0．9995），平均回收率为94．0％，RSD为1．2％；甘草酸的线性为2．14～29．96mg·L^-1（r=0．9997），平均回收率为98．1％，RSD为2．0％。仪器与方法精密度均小于2．0％。结论该方法能更加全面控制该方的质量，优化后的提取工艺可为今后剂型的改进提供基础。

桑椹的HPLC指纹图谱研究方法的建立

用HPLC-DAD技术对桑椹进行指纹图谱研究,建立了桑椹HPLC指纹图谱的研究方法,并确定的HPLC的操作条件,即:色谱柱:HypersilODS5μm,250×4.0mm,检测器:DAD(360nm),柱温:30℃,流速:1.0ml/min,流动相选择0.05%磷酸(pH￣3)-乙睛系统,梯度Min:0-15-50-55,CH3OH%:15-15-70-70。

HPLC同时测定双黄连注射剂中氯原酸和黄芩苷2种指标成份含量

目的：探讨双黄连注射液２ 种指标成分含量的测定方法，控制其质量。方法：应用甲醇水溶液（ 磷酸调ｐＨ至２ ．７） 为流动相，在ＯＤＳＣ１８ 柱上梯度洗脱，外标法定量，绿原酸和黄芩苷２ 种指标成分含量可以同时定量。结果：３ 批样品中氯原酸的含量分别为０ ．７０ ％ ，０ ．７４ ％ 和０ ．７５ ％ （ｍｇｍｇ） ，黄芩苷的含量分别为１０ ．６７ ％ ，１０ ．２５ ％ 和１１ ．３８ ％ （ｍｇｍｇ） 。结论：该方法简便、快速、灵敏，适合于双黄连粉针剂的质量控制。

HPLC-DAD法测定“武当三号金银花”藤中4种有效成分含量

目的：建立HPLC-DAD法测定“武当三号金银花”藤中4种有效成分的含量。方法采用Fortis Xi Phenyl柱（250 mm×4.6 mm,5μm）；流动相为乙腈（A）-0.5%冰醋酸溶液（B）进行线性梯度洗脱；马钱苷、绿原酸、芦丁、木犀草苷检测波长分别为236、327、354、348 nm；柱温：30℃。结果马钱苷、绿原酸、芦丁、木犀草苷4个化合物在各自测定的范围内均呈良好的线性关系（r≥0.9994）,平均回收率为98.9%-99.9%。结论该法操作简单,灵敏度高,重现性好,为较全面控制“武当三号金银花”藤的质量提供了一种可靠的方法。

不同产地掌叶大黄HPLC指纹图谱的比较

目的 应用RP HPLC (DAD)对不同产地掌叶大黄药材进行指纹图谱比较。方法 用InertsilODS 3分析柱 ,1%HAc H2 O与 1%HAc CH3 CN梯度洗脱 ,流速 1mL/min ,柱温 30℃ ,检测波长 2 80nm ,参比波长 380nm。结果 建立了HPLC指纹图谱共有模式 ,并对其他产地药材进行了相似度比较。结论 对大黄药材中各成分均得到很好分离 ,可作为大黄药材的具有专属性的指纹图谱。

HPLC-DAD法测定“武当三号金银花”不同部位中芦丁和木犀草苷的含量

目的建立HPLC-DAD法测定"武当三号金银花"不同部位中芦丁和木犀草苷的含量。方法采用Fortis Xi Phenyl柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)—0.5%冰醋酸溶液(B)进行线性梯度洗脱;检测波长为354 nm;柱温:30℃。结果芦丁和木犀草苷在各自测定的范围内均呈良好的线性关系(r≥0.999 4),平均回收率分别为99.4%、99.3%。结论该法操作简单,灵敏度高,重现性好,为控制"武当三号金银花"不同部位芦丁和木犀草苷的质量提供了一种可靠的方法。

HPLC-ELSD法同时测定桔梗中5种皂苷含量

建立高效液相色谱法同时测定桔梗药材中去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D_3、去芹糖桔梗皂苷D、桔梗皂苷D的方法 。色谱柱为ODS 250 mm×4.6 mm×5μm,流动相A为乙腈-0.2%甲酸,流动相B为水,采用梯度洗脱（0~15 min,20%~22%A;15~60 min,22%A;60~65 min,22%~30%A;65~70 min,30%~20%A）。供试品经50%甲醇（ν/ν）超声提取30min,过滤蒸干后以50%甲醇（ν/ν）定容至5m L容量瓶中;漂移管温度为75℃,氮气流量为2.5L/min。去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D_3、去芹糖桔梗皂苷D、桔梗皂苷D分别在0.64~6.4μg、1.22~12.2μg、1.08~10.8μg、0.74~7.4μg,1.7~17μg范围内组分浓度与峰面积线性关系良好;药材中5种成分的平均加标回收率分别为101.1%、99.9%、100.4%、100.7%和101.6%;RSD均〈5%。该方法简便、准确,分离效果好,可用于桔梗药材的质量控制。

HPLC法测定奥曲肽的含量及其有关物质

目的:建立高效液相色谱法测定奥曲肽的含量及其有关物质。方法:采用Lichrospher-C_(18)色谱柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相A为含0.1％三氟乙酸的水溶液,流动相B为含0.1％三氯乙酸的乙腈溶液,采用梯度洗脱,流动相B在20min内从20％升至40％,流速1.5mL·min^(-1),检测波长215nm。结果:HPLC法测定的线性范围为40.8～142.8μg·mL^(-1),r=0.9999,最低检测限量为1ng,本方法重复性和精密度良好(RSD<2％)。结论:采用HPLC梯度洗脱法测定奥曲肽的含量及其有关物质,方法简便,结果准确。

蒸发光散射检测器HPLC法测定大豆低聚糖

用高效液相色谱法,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱程序和蒸发光散射检测器对大豆低聚糖进行分析,在20 min内将大豆低聚糖中的主要成分蔗糖、棉籽糖和水苏糖与其它组分完全分离.用外标法对3种主要成分进行定量,线性关系良好.回收率为96.5%～99.1%,相对标准偏差为0.18%～4.67%.该法操作简便,分析速度快,可作为常规检测方法应用.

HPLC-ELSD法测定西洋参含片中人参皂苷Rg_1、Re和Rb_1的含量

目的:建立西洋参含片中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1的HPLC测定方法。方法:色谱柱:Alltech C_(18)柱(4.6mm×150mm,5μm),保护柱:Security Guard C_(18)(4mm×3.0mm),流动相:乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0mL·min^(-1)。ELSD:雾化气体流速2.7L·min^(-1),漂移管温度115℃。样品经粉碎后,用70%甲醇水溶液超声提取30min,离心,取上清液过滤进样。结果:梯度洗脱时基线平直,线性范围:0.0100～1.00mg·mL^(-1);人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1的相关系数分别为0.9995,0.9996,0.9986;检出限分别为40,40,25ng(S/N>3)。加样回收率:87.8%～105.2%,RSD在1.2%～4.8%之间。结论:该方法前处理简单,分析准确、快速(一次分析在40min内完成),可作为同时测定多种人参皂苷成分含量的方法。

甘草HPLC指纹图谱研究

目的:建立乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)的HPLC指纹图谱。方法:采用反相高效液相色谱法,选用APOLLOC_8柱(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-0.5%冰醋酸为流动相梯度洗脱,采集时间为80 min,流速为1.0 ml·min^(-1)。结果:建立甘草药材的HPLC指纹图谱,标定甘草药材14个共有峰,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求。结论:该方法稳定,准确,可靠,为今后甘草药材质量控制提供科学依据。

RP-HPLC法快速检测牛奶中7种四环素类药物残留量

目的:建立快速检测牛奶中7种四环素类药物残留的反相高效液相色谱法。方法:用0.1mol/L McIlvaine-EDTA溶液和50%三氯乙酸(TCA)溶液共同处理牛奶样品,通过Waters Oasis HLB固相萃取柱进行净化处理。仪器条件中所用色谱柱为SunfireTMC18(250mm×4.6mm,5μm)柱,以甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸(pH2)为流动相,采用梯度洗脱模式。结果:7种四环素类药物线性范围宽,峰面积和样品浓度在0.05～1μg/ml范围内呈很好的线性关系,加标平均回收率为78.66%～106%,最低检测限为0.02μg/ml。结论:该方法操作简单、重现性好、检测限低、灵敏可靠,可在14min内同时将四环素等7种四环素类药物达到基线分离。

丹参葡萄糖注射液的HPLC指纹图谱研究

目的研究丹参葡萄糖注射液的HPLC指纹图谱测定方法。方法以原儿茶醛为对照品,应用HPLC法,色谱柱:AlltimaC18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:1%冰醋酸水∶1%冰醋酸甲醇,梯度洗脱;检测波长:281nm;分析时间:65min;流速:1.0mL/min;结果标示出丹参葡萄糖注射液6个共有峰,并用HPLC/MS对主要成分进行了归属。结论该方法准确、重复性好,为丹参葡萄糖注射液的指纹图谱质量控制提供了依据。

改换HPLC色谱柱后梯度洗脱程序调整规律的探讨

目的:探讨以C_(18)快速色谱柱替代常规色谱柱实现HPLC快速梯度分析时,梯度洗脱程序的调整规律。方法:采用Allti- ma C_(18)高速色谱柱(33mm×7mm,3μm;53mm×7mm,3μm)、Alltima C_(18)常规色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)及YMC C_(18)常规色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);梯度洗脱;检测波长254nm;流速为0.8～2.5mL·min^(-1)。比较不同梯度洗脱程序下利奈唑胺及其14个有关物质的色谱行为。结果:色谱柱确定后,梯度变化率(ΔC_B/Δt_G)是决定色谱系统选择性的关键因素;在利用快速色谱柱替代普通色谱柱进行分离时,应根据具体分离情况调节流速,使色谱系统达到最佳;当HPLC梯度洗脱系统的流速改变后,应根据洗脱体积(FΔt_G)不变的原则重新确定梯度运行时间。结论:采用高速色谱柱时并相应地调整梯度程序,可顺利实现HPLC梯度洗脱快速分析。