基于β-catenin/TCF4信号通路探究miR-455-3p对人结肠癌细胞增殖、凋亡及糖酵解的影响

目的基于β-catenin/TCF4信号通路探究miR-455-3p对人结肠癌细胞增殖、凋亡及糖酵解的影响。方法HCT116细胞转染miR-455-3p mimics为miR-455-3p转染组,HCT116细胞转染miR-455-3p NC为miR-NC组,HCT116细胞不转染任何质粒为空白组。MTT法检测各组HCT116细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;检测各组细胞糖酵解葡萄糖摄取量和乳酸生成量;Western blotting检测各组细胞中HK2、β-catenin、TCF4蛋白水平。结果空白组和miR-NC组细胞中miR-455-3p表达量分别为0.99±0.09和1.01±0.10,均低于miR-455-3p转染组的1.82±0.12,差异具有统计学意义(P<0.05)。空白组和miR-NC组48 h吸光值(A)分别为0.75±0.05和0.78±0.06,均高于miR-455-3p转染组的0.32±0.02,差异具有统计学意义(P<0.05)。空白组和miR-NC组细胞凋亡率分别为(2.35±0.6)%和(2.46±0.5)%,均低于miR-455-3p转染组的(22.6±2.1)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。和空白组比较,miR-455-3p组细胞中葡萄糖消耗量和乳酸生成量均显著降低(P<0.05)。和空白组比较,miR-455-3p组细胞中HK2、β-catenin和TCF4蛋白均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-455-3p通过抑制β-catenin/TCF4信号通路的转导,抑制人结肠癌细胞增殖、凋亡及糖酵解水平。

microRNA沉默SMYD3基因对乳腺癌细胞Wnt/β-Catenin通路及c-Myc基因影响的研究

目的研究沉默SMYD3基因后,乳腺癌细胞MDA-MB-231中Wnt/β-catenin通路和c-Myc基因的变化,探讨其可能机制。方法构建携带绿色荧光蛋白基因的SMYD3-microRNA真核表达质粒载体,脂质体法稳定转染MDA-MB-231细胞,实时定量PCR检测SMYD3、Wnt10b、β-catenin、c-Myc mRNA的表达。结果流式细胞检测转染效率达到95%以上,实验组SMYD3、Wnt10b、c-Myc mRNA水平低于空白对照组(P<0.05),β-catenin水平高于空白对照组(P<0.05);阴性对照组与空白对照组相比无明显变化。结论沉默SMYD3基因可直接或通过Wnt/β-catenin通路下调c-Myc基因的表达,从而减弱肿瘤细胞的生长及侵袭转移能力,为乳腺癌的临床治疗提供了新的基因靶点。

XAV939对肝癌细胞增殖及糖酵解的影响

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939对肝癌细胞增殖及糖酵解过程的影响。方法:MTT方法检测不同浓度XAV939对肝癌细胞Bel-7402、HCCLM3增殖能力的影响;Western blot方法检测XAV939对肝癌Bel-7402、HCCLM3细胞Wnt/β-catenin信号通路关键基因和其下游靶基因表达的影响,以及对糖酵解过程中关键调控基因表达的影响。运用SPSS 19.0统计软件分析各组间的差异。结果:MTT结果表明不同浓度的XAV939能够不同程度的抑制Bel-7402、HCCLM3细胞增殖能力,XAV939对两种细胞的抑制率接近50%时,浓度分别为:30μmol/L、20μmol/L。Western blot结果显示,XAV939可以显著抑制Wnt/β-catenin及其下游基因c-myc、Cyclin D1的表达,有效抑制β-catenin信号通路活性;同时,XAV939可以通过抑制HK-2、LDHA而非Glut-1的蛋白表达水平来抑制肝癌细胞的糖酵解过程。结论:XAV939在体外能够有效抑制肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路及其依赖性细胞增殖和糖酵解过程。

Sox-2及Wnt信号通路蛋白在宫颈癌中的表达及相互作用

目的探究干细胞相关基因Sox-2和Wnt信号通路蛋白在宫颈鳞癌中的表达及二者的相关性。方法采用免疫细胞化学方法检测Sox-2、β-catenin及C-myc在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A中的表达;采用免疫组织化学法检测其在30例正常宫颈组织及43例宫颈鳞癌组织中的表达。结果 Sox-2在SiHa、C33A的细胞核中表达,在HeLa中未见表达;β-catenin及C-myc在HeLa、SiHa及C33A中均有表达。在宫颈鳞癌组织中Sox-2、β-catenin和C-myc的表达明显高于正常宫颈组织(P<0.05);Sox-2表达与宫颈鳞癌病理分级相关(P=0.049),与临床分期、淋巴结转移、年龄无相关性(P>0.05),β-catenin和C-myc的表达与病理分级、临床分期、淋巴结转移及年龄均无关(P>0.05)。在宫颈鳞癌中,Sox-2与β-catenin的表达呈正相关(P<0.001,r=0.567),与C-myc的表达也呈正相关(P=0.030,r=0.331)。结论干细胞相关基因Sox-2与宫颈癌的发生相关,其机制可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路参与肿瘤的发生发展。

嘧啶合成关键酶CAD促进食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的机制探讨

目的:通过体外细胞学实验研究嘧啶核苷酸从头合成的关键酶氨基甲酰磷酸合成酶2-天冬氨酸转氨甲酰酶-二氢乳清酶(CAD)三功能酶对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用,并初步探讨其潜在机制。方法:利用生物信息学方法分析癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)中食管癌数据集的肿瘤组织与癌旁正常组织中CAD的表达高低。在食管癌细胞中敲减或过表达CAD,用Western blot验证敲减或过表达效率。利用活细胞动态成像与分析系统(IncuCyte)和集落形成实验检测细胞的生长和增殖能力,Transwell实验检测迁移和侵袭能力。通过基因集富集分析(GSEA)获得TCGA食管癌组织中富集在CAD高表达组的信号通路。利用基因表达谱交互分析(GEPIA)网站对CAD与潜在下游基因MYC的mRNA表达相关性进行分析(Pearson法),应用RT-qPCR方法检测CAD调控的下游通路基因的mRNA水平,通过Western blot检测MYC和上皮-间充质转化(EMT)通路相关蛋白的表达。在食管癌细胞中敲减CAD,同时过表达MYC,观察细胞的生长和增殖能力是否改变。结果:(1)TCGA和GEO食管癌数据集显示肿瘤组织的CAD表达水平显著高于癌旁正常组织。(2)敲减CAD表达后,食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到显著抑制。(3)过表达CAD能够促进食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。(4)基因富集分析显示,β-catenin、MYC和糖酵解通路富集在CAD高表达组。(5)Pearson关联分析显示,CAD与MYC的mRNA水平呈正相关(r=0.43,P<0.001);Western blot结果显示,敲减CAD能够降低β-catenin、MYC及EMT相关蛋白的表达水平;RT-qPCR结果显示,敲减CAD后,己糖激酶2(HK2)、血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)、磷酸甘油酸酯激酶1(PGK1)、烯醇化酶1(ENO1)、丙酮酸激酶肌肉同工酶2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)等一系列糖酵解相关基因的表达水平都受到了抑制。(6)敲减CAD抑制食管癌细胞的增殖能力,而过表达MYC后细胞的增殖能力得到部分恢复。结论:体外细胞实验表明,CAD可能通过调控β-catenin/MYC/糖酵解及EMT信号通路而增强食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

茶多酚对糖尿病心肌病大鼠心功能的保护作用及其机制

目的观察茶多酚(green tea polyphenol,GTP)保护糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)大鼠心功能的作用机制。方法建立链脲佐菌素诱导的1型糖尿病大鼠并随机分为正常对照组(NG,n=15)、糖尿病组(DM,n=12)、GTP组(n=12)、GTP+氯喹(CQ)组(n=11)、CQ组(n=12)。NG组和DM组灌胃蒸馏水,GTP组灌胃GTP[400mg/(kgd)]溶液,CQ组灌胃CQ溶液(50mg/kg),GTP+CQ组灌胃等量的CQ和GTP溶液。Western blot检测左心室心肌组织中β-catenin/TCF4/GSK-3β和MTOR通路相关蛋白的表达。结果与NG组相比,DM组中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和BECN1表达显著降低(P<0.05),且SQSTM1水平显著增加(P<0.05)。与DM组相比,GTP组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和BECN1蛋白表达水平显著增加(P<0.05),同时SQSTM1蛋白水平显著降低(P<0.05)。与NG组相比,DM组β-catenin、TCF4和MYC的蛋白表达均显著提高(P<0.05),且p-GSK3β/GSK3β和p-MTOR/MTOR的比值显著提高(P<0.05)。与DM组相比,GTP组的β-catenin、TCF4和MYC蛋白表达水平及p-GSK3β/GSK3β和p-MTOR/MTOR的比值显著降低(P<0.05)。结论 GTP可以通过调节与自噬相关的β-catenin/TCF4/GSK-3β和MTOR通路参与对DCM大鼠的心功能保护作用。