糖基化对β-伴大豆球蛋白热聚集行为的影响研究(Ⅰ)

基于Maillard反应的机理,采用干热法分别制备出7S和不同分子量葡聚糖(67kDa、150kDa、500kDa)的三种糖基化产物,从糖基化产物的热性质分析到热聚集体的浊度、粒径,研究了糖基化对于7S在pH和离子强度诱导下的热聚集行为。结果显示,糖基化具有抑制7S热聚集行为的作用,并且葡聚糖在分子量为67kDa和150kDa时的糖基化产物抑制效果相近且优于分子量为500kDa的葡聚糖糖基化产物。

7S-葡聚糖糖基化产物及其水解物制备纳米颗粒的研究

采用干热法制备β-伴大豆球蛋白(7S)与葡聚糖(67ku)糖基化产物。利用胰蛋白酶对糖基化产物进行限制性酶解,得到了一种具有两亲性结构的水解度(DH)为2.2%的糖基化产物水解物。利用反溶剂法制备了7S、7S-葡聚糖糖基化产物及DH为2.2%的糖基化产物水解物的纳米颗粒,并且考察了戊二醛交联和旋转蒸发去除乙醇对已形成的纳米颗粒的影响。研究了三种纳米颗粒样品的粒度,Zeta-电位和多分散性指数(PDI)。实验发现,DH为2.2%的糖基化产物水解物在反溶剂过程中更容易发生自组装,形成的纳米颗粒比7S和7S-葡聚糖糖基化产物形成的纳米颗粒的粒度小、电位绝对值高、PDI值低。

不同分子量葡聚糖与大豆7S蛋白混合凝胶的流变学性质

采用哈克流变仪对不同分子量葡聚糖与大豆7S蛋白混合体系的凝胶流变学性质进行研究。结果表明:葡聚糖与大豆7S蛋白混合体系形成的蛋白多糖凝胶相对单一浓度的大豆7S蛋白凝胶具有较高的弹性模量;同分子量的葡聚糖与大豆7S蛋白混合体系形成的蛋白多糖凝胶黏弹性质随葡聚糖浓度增加而增加;同浓度葡聚糖与大豆7S蛋白混合体系形成的蛋白多糖凝胶黏弹性质随加入葡聚糖分子量的增加而增加;同浓度同类型葡聚糖体系凝胶形成的起始温度Tp0.25<Tp0.5,且0.25mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.6)中蛋白-多糖复合凝胶的弹性模量值大于0.5mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.6)中蛋白-多糖复合凝胶的弹性模量值。

高膳食纤维青稞馒头的研究

对青稞粉营养成分进行分析,研究具有高膳食纤维的青稞馒头。研究结果表明:青稞粉具有较高的膳食纤维和β-葡聚糖;青稞粉的最佳筛网孔径为180μm,最适添加量为20%。以最佳青稞粉处理条件蒸制出的馒头品质最佳且营养丰富,富含膳食纤维,尤其β-葡聚糖含量较高,是现代居民的良好选择。

(1-3)β-D-葡聚糖水平对侵袭性肺部真菌感染的诊断效能分析

目的:探讨(1-3)β-D-葡聚糖水平对侵袭性肺部真菌感染的诊断效能。方法:选取本院2013年1月-2015年1月呼吸内科侵袭性肺部真菌感染患者119例作为真菌感染组,同期选取肺部细菌感染患者116例作为细菌感染组、健康体检者115例作为对照组,采用免疫比浊法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和血浆(1-3)β-D-葡聚糖(G试验),以真菌培养法作为IPFI的诊断金标准,分析BALF G试验、血浆G试验及联合两者G试验的诊断阳性率、阴性率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度。结果:真菌感染组BALF和血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平均明显高于细菌感染组和对照组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),其中细菌感染组与对照组BALF和血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。真菌培养阳性99例,真菌培养阴性20例,其中真菌培养阳性者BALF和和血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平分别为(18.45±5.01)ng/L、(90.26±6.25)ng/L;明显高于真菌培养阴性者的(2.03±0.02)ng/L、(77.94±5.01)ng/L,两者比较差异均有统计学意义(t=14.61、8.28,P<0.001)。BALF+血浆G试验对IPFI的诊断阳性率、灵敏度、阴性预测值和准确度均明显高于单独BALF G试验和血浆G试验,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:BALF联合血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平检测操作简便、快速,且显著提高对侵袭性肺部真菌感染的诊断阳性率、灵敏度和准确度,值得临床推广应用。

四种调节血糖保健食品的血糖生成指数测定

目的:测定冲调谷膳粉、多种谷膳粉、辅助降血糖营养粉及燕麦β-葡聚糖棒等4种调节血糖保健食品的血糖生成指数(GI),为患有糖尿病等慢性代谢性疾病的患者食物选择提供科学依据。方法:选取12名健康志愿者,于服用25g葡萄糖粉后0、15、30、45、60、90、120min各测其血糖水平。按同样方法,于不同天进食含25g碳水化合物的4种受试食物,分别测定7:00血糖水平。以葡萄糖为参照物,根据Wolever方法计算各食物的GI值。结果:冲调谷膳粉的GI为37.7±19.0、多种谷膳粉的GI为53.0±27.2、辅助降血糖营养粉的GI为38.7±20.9、燕麦β-葡聚糖棒的GI为56.7±28.2。相比葡萄糖,进食4种受试食物的血糖曲线均较低平。结论:4种调节血糖保健食品均为低GI食物,患有糖尿病等慢性代谢性疾病的患者可以选择。

β-内酰胺抗生素在Sephadex G—10凝胶色谱中色谱行为的定量关系

用β－内酰胺抗生素的一阶价分子连接性指数（１Ｘｖ）、一阶分子连接性指数（１Ｘ）、分子的环状结构数（ｆ）及分子的非氢原子原子总数（Ｎ）等参数描述β－内酰胺抗生素的结构特征，利用回归分析的方法发现，β－内酰胺抗生素的ｋ值与其１Ｘｖ／ｆ的对数值呈明显相关；进一步分析，将β－内酰胺抗生素按其结构分为３类：Ⅰ类包括所有青霉素，Ⅱ类包括３位和７位侧链均不含较大环结构或仅有１个侧链含较大环结构的头孢菌素，Ⅲ类包括３位和７位侧链均有较大环平面结构的头孢菌素，发现Ⅰ类青霉素类抗生素的ｋ值和其诸结构参数间的关系较好地符合关系式：ｋ＝ａ＋ｂｌｎ（１Ｘｖ／ｆ）＋ｃ１Ｘｖ＋ｄ１Ｘ＋ｅ（１Ｘ－１Ｘｖ）／Ｎ（１）Ⅱ类和Ⅲ类头孢菌素类抗生素的ｋ值与其诸结构参数间的关系更符合关系式：ｋ＝ａ＋ｂ１Ｘｖ＋ｃ１Ｘ＋ｄ１Ｘ２ｖ＋ｅ１Ｘ２＋ｆ１Ｘｖ１Ｘ（２）并发现流动相中不同阴离子的１Ｘｖ和其平均电荷数（Ｑ）之和（１Ｘｖ＋Ｑ）与溶质的ｋ值呈线性关系；溶质的半峰宽（Ｗ１／２）和其保留时间（ｔＲ）呈线性关系；ｋ值的对数和流动相缓冲液浓度（Ｃ）的对数呈线性关系。

微生物多糖/葡聚糖体系氢氧化铁生物矿化的实验研究

本文通过观察在尿素和Stoke培养基中生长的球衣菌细胞壁内及其周围氢氧化铁凝胶的矿化过程,研究球衣菌分泌的多糖和蛋白质对氢氧化铁凝胶矿化结晶行为的调控作用。采用TEM、UV和FTIR对两种矿化体系微生物矿化产物进行了观察和分析,同时对比以纯葡聚糖为有机基质作用下氢氧化铁凝胶的矿化过程,结果表明微生物多糖和葡聚糖均能控制水溶液中铁离子及氢氧化铁凝胶的成核机制、结晶相和晶体的生长速度,主要矿化产物为纳米级四方纤铁矿(β-FeOOH)。

硫酸化酵母葡聚糖体外和体内对大肠杆菌抑制作用的比较

以酵母碱不溶性葡聚糖为原料,硫酸为酯化剂,在尿素-二甲基亚砜溶液中进行硫酸酯化反应得到易溶于水的白色硫酸化葡聚糖。利用得到的硫酸化葡聚糖进行体外和体内抑制大肠杆菌效果研究。体外抑菌实验结果表明:硫酸化葡聚糖在体外对大肠杆菌的生长没有抑制作用。小鼠活体实验显示:硫酸化葡聚糖能显著提高大肠杆菌致腹膜炎的小鼠的成活率。

多糖调制氢氧化铁矿化结晶作用研究

以葡聚糖和壳聚糖为有机基质,进行铁的生物(有机质)矿化模拟实验,研究多糖对氢氧化铁凝胶矿化结晶行为的调控作用。实验结果表明,氢氧化铁凝胶在多糖分子中成核、生长,通过有机大分子的自组装作用,形成纳米级的正方纤铁矿(β-FeOOH)。产物的形状、大小及其结构类型由多糖分子的结构和浓度决定。

不同干燥方式的绣球菌中多糖提取工艺的优化

本文对绣球菌进行多糖提取及其含量测定,通过单因素条件实验分析绣球菌的干燥方式,料液比,浸提时间,浸提温度对β-葡聚糖提取率的影响。在此基础上,设计正交法优化多糖提取工艺。由此确定了绣球菌多糖的最佳提取工艺条件。此方法快捷,准确,提取率较高,可作为绣球菌中多糖提取的方法。

非血液标本的1,3-β-D-葡聚糖检测对放疗后侵袭性真菌感染的诊断价值

目的评估1,3-β-D-葡聚糖在非血液标本中对放射性肺部真菌感染的诊断价值。方法分析肺癌患者放疗后血液、气道分泌物、胸水中1,3-β-D-葡聚糖(1,3-beta-D-glucan,BG)表达差异。结果不同标本G试验检测结果对放射性肺部真菌感染患者诊断效能存在差异。血液标本的敏感性、准确性、特异性均最高;阳性预测值和阴性预测值最优为胸水标本。结论在G试验阳性判断阈值为≥10pg/mL的条件下,胸水和气道分泌物标本的G试验检测结果能够检测肺癌患者放疗后肺部真菌感染。

干热法及大分子拥挤体系制备的共价复合物的物化性质

通过干热法和大分子拥挤体系分别制备大豆7S球蛋白-葡聚糖共价复合物,讨论不同反应体系制备的产物的物化性质差异.根据糖基化产物在7S等电点(p H=4.8)和中性条件(p H=6.5)下的溶解性将其分成两组分,对其接枝度、蛋白质二级结构、内置荧光和浊度进行分析.结果表明:在大分子拥挤环境下,7S在液相环境中发生了一定程度的水解,生成小分子的肽链,有利于多糖的共价接入;MC48(p H=4.8时制得,大分子拥挤体系)中主要是接枝程度较高的糖基化产物,MC65(p H=6.5时制得,大分子拥挤体系)中含有的糖基化产物接枝度较低,且程度不均匀;干热法制备得到的DH48(p H=4.8时制得)和DH65(p H=6.5时制得)接枝度较低,差异性不及大分子拥挤环境显著.SDSPAGE、圆二色光谱、内置荧光分析结果表明,大分子拥挤环境下制得的MC48和MC65物化性质差异显著,而干热法制得的DH48和DH65的物化性质差异不明显.

硫酸右旋糖苷对人胃癌MKN1细胞的黏附以及整合素β_1表达影响的研究

目的 通过观察细胞的黏附过程和整合素 β1的cDNA的表达 ,研究硫酸右旋糖苷 (DS)抑制人胃癌MKN1细胞株的黏附过程的机制。方法 用位相差显微镜对MKN1细胞在培养盘上的附着过程及形态变化进行了观察。用半定量RT -PCR法对整合素β1的cDNA的表达水平进行了测定。结果 DS抑制了MKN1细胞在培养盘上的附着 ,培养 4 8小时后仍有部分细胞处于游离状态。在DS治疗组 ,黏附细胞和游离细胞内整合素 β1的cDNA的表达水平分别减少到非治疗细胞的 74 %和 38%。结论 DS对人胃癌细胞株MKN1的黏附过程的抑制与对整合素 β1cDNA表达的抑制有关。

大豆7S球蛋白与葡聚糖共价键合纳米凝胶的制备与表征

基于蛋白质与多糖的Maillard反应与自组装制备一种新型的绿色的具备核壳结构的纳米凝胶。利用干热反应制备大豆7S球蛋白与葡聚糖的共价接枝物(soy β-conglycinin-dextran conjugates,SDC),通过对SDC热处理使其自组装成大豆7S球蛋白-葡聚糖纳米凝胶(soy β-conglycinin-dextran nanogels,SDN),对其形貌、结构及性质进行分析,并利用多糖的空间位阻效应抑制蛋白质宏观过度聚集的理论指导,探讨尺寸均一SDN的形成机制。形貌学与zeta电位分析表明SDN为具备核壳结构的球状粒子,其外壳由亲水性的葡聚糖构成,内核由凝胶化的蛋白构成;表面疏水性分析表明内核蛋白的三级结构发生转变,疏水基团暴露,从而形成多个疏水空腔;稳定性分析表明SDN具有高度的pH稳定性与储存稳定性,对疏水活性物质的输送载体构建具有重要的借鉴意义。

多糖的共价键合对7S球蛋白凝胶性能的影响

引入细胞学说中的大分子拥挤体系并在该体系通过Maillard反应制备了大豆7S球蛋白(β-conglycinin,7S)和葡聚糖(dextran,Dex)的共价复合物,利用转谷氨酰胺酶(transglutaminase,TGase)的交联作用制得蛋白-多糖共价复合物凝胶。对其流变学、质构特性及微结构进行分析。结果表明,在大分子拥挤环境下,7S-葡聚糖比例为2:1的共价复合物制得具有致密且孔洞分布均匀的凝胶网络结构。单纯的蛋白自聚集或者与多糖的共混状态时形成的凝胶弹性模量都较高,但蛋白过度的聚集并不能得到孔洞均匀的凝胶网络结构,共价复合物制备的凝胶中葡聚糖的共价键合作用抑制了TGase交联过程中蛋白质分子间发生过度的相互作用。形貌学观察表明,共价复合物制备的凝胶形成了网络孔径均匀且非常致密的凝胶网络结构。

β-谷甾醇和豆甾醇对小鼠急性结肠炎的治疗作用研究

为研究β-谷甾醇和豆甾醇对由葡聚糖酸钠(DSS)诱导C57BL/6J雄性小鼠结肠炎的抑制作用。将20只小鼠随机分为4组,分别为阴性对照组、DSS处理组(1.5%DSS处理7 d),DSS+β-谷甾醇治疗组以及DSS+豆甾醇治疗组(植物甾醇溶于纯净玉米油40 mg/mL,按400 mg/kg/day的剂量灌胃小鼠)。结果显示:经过13 d的试验,DSS处理使小鼠出现严重的急性结肠炎,伴随有明显溃疡、结肠上皮组织损伤及结肠短缩等现象。豆甾醇能显著抑制结肠缩短,降低粪便中的血红素含量,降低结肠炎病理学评分(P <0.05)。并且显著降低了结肠组织炎症因子IL-1β、IL-6、MCP-1和环氧合酶COX-2的mRNA表达。β-谷甾醇也显著降低了结肠炎病理学评分,但只显著抑制IL-6和COX-2的表达。豆甾醇比β-谷甾醇表现出了更好的抗急性结肠炎活性。饮食中摄入β-谷甾醇和豆甾醇能有效改善DSS引起的小鼠结肠炎,但其在人体中的作用有待进一步调查研究。

自溶-碱法提取啤酒酵母β-(1,3)-D葡聚糖工艺研究

通过单因素和正交实验得出自溶-碱法提取啤酒酵母β-(1,3)-D葡聚糖的最佳工艺条件为:定量酵母粉,以料液比1∶30加入3%NaCl水溶液,40℃水浴24h;4000r/min离心去上清,以料液比1∶30加入2%NaOH水溶液,95℃水浴提取3h,4000r/min离心去上清,蒸馏水洗两次,60℃烘干,得成品。

近红外法对酵母细胞壁活性成分的快速定量检测

试验旨在研究快速检测酵母细胞壁中活性成分β-葡聚糖和甘露聚糖含量的方法。试验通过偏最小二乘法(PLSR)算法,将近红外光谱与液相检测值相结合,建立酵母细胞壁活性成分含量定量模型,根据拟合优度(R-Square)、校正均方根误差(RMSEC)以及预测均方根误差(RMSEP)的大小,判断出偏最小二乘法所建模型有良好精确度与稳健性。结果显示:β-葡聚糖检测模型R-Square为0.90,RMSEC值为1.16%,甘露聚糖检测模型R-Square为0.71,RMSEC值为0.99%。研究表明,通过近红外光谱法检测酵母细胞壁中的活性物质β-葡聚糖和甘露聚糖能够有效解决传统方法高效液相色谱法步骤烦琐、耗时长、试剂消耗量大的缺点,可以在酵母细胞壁中活性成分含量的快速检测中应用。