利用粗煤气中H_2S合成β-M的气相色谱分析

以粗煤气中硫化氢为原料合成的β-M的分离分析方法。结果表明,气相色谱方法可以将产物与杂质得到良好分离,并且该法有较好的重复性。

高血压病肾功能受损患者血、尿β_2-m RIA的临床评价

本文对150例原发性高血压患者行血、尿β_2-m测定,并与临床检验尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)作对比分析。 资料和方法 将我院临床确诊的原发性高血压患者150例(男72,女78),(Ⅰ期21例,Ⅱ期93例,Ⅲ期36例),年龄28～67岁,平均44岁。 β_2-m RIA kit:由3V公司提供。 β_2-m测定的血清,尿样本按试剂盒要求稀释准备,尿样用0.1NNaOH调pH至6.0～7.50 40例正常对照组血清β_2-m值为2490±801(ng/ml),尿值88±75(ng/ml)。血BUN 6.40±1.92(mmol/L),Cr80.36±26.52(μmol/L)。 结果 结果见表1。 讨论 本文对150例原发性高血压患者血、尿β_2-m RIA与临床常规检验BUN、Cr对比分析,BUN、Cf阳性检出率低,在反映早期肾功能受损上并不敏感,而血。

合肥市产超广谱β-内酰胺酶菌株CTX-M型耐药基因的初步分布

目的 了解 1999～ 2 0 0 0年合肥市多所医院临床分离的产超广谱 β-内酰胺酶 (ESBL s)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中 CTX- M-型耐药基因的初步分布情况。方法 根据 Gen Bank的基本序列 (CTX- M- 1、CTX- M- 9和CTX- M- 8)而设计 3对引物 ,分别用这些引物对表型确认试验证实产 ESBL s的细菌进行 PCR扩增。结果 98株产 ESBL s细菌中 ,5 6株产 CTX- M-型 β-内酰胺酶 ,其中 CTX- M- 1、CTX- M- 9和 CTX- M- 8来源的分别为 30、2 9和 0株。结论 合肥市有产 CTX- M-型

细菌CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因定点突变对酶活性的影响研究

目的构建CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因突变体,比较突变前、后酶活性的变化,进一步阐明酶的分子结构特征和生化特性。方法利用重叠延伸PCR定点诱变技术将CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因Ser240(丝氨酸)AGC定点突变为Gly240(甘氨酸)GGC,分别构建CTX-M型酶的原核重组表达载体及其突变表达载体,重组载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌JM109,比较突变前、后酶活性的改变。结果酶切鉴定和DNA测序鉴定表明CTX-M型酶的原核重组表达载体及其突变表达载体构建成功,转化大肠埃希菌JM109后,发现含野生型CTX-M基因的重组菌其酶活性与来源菌株相近,而含突变型CTX-M基因的重组菌未检测到酶活性。结论Ser240对于维持CTX-M型超广谱β-内酰胺酶活性具有重要作用。

鸡大肠杆菌TEM和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

【目的】检测鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型和基因亚型,了解河南省产酶鸡大肠杆菌ESBLs基因型分布。【方法】对河南省7个地区不同鸡场临床分离28株产ESBLs鸡大肠杆菌分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增及测序分析,确定其基因型和基因亚型。【结果】21株鸡大肠杆菌检出TEM型基因,2株检出CTX-M型基因,5株检出TEM型和CTX-M型两种基因,未检出SHV型。TEM基因亚型以TEM-1变异型为主,与AY293072(TEM-1)相比同源性为98%—99%,核苷酸序列除发生18T→C沉默突变外,尚有3株分别有另一处碱基发生变化:783G→A(C3菌,序列号为FJ405207)、21T→A(X2菌,序列号为FJ405208)和269G→A(F4菌,序列号为FJ405211),其中前两处为沉默突变,F4菌的碱基突变引起92甘氨酸变为天冬氨酸,为TEM-57型。CTX-M基因亚型包括两种:CTX-M-65亚型4株(C2、C3、C4和K1,序列号分别为FJ405191,FJ405192,FJ405212和FJ405214)和CTX-M-14亚型3株(F2、X3和B5,其中F2菌的相关序列已上传至GenBank,获序列号为FJ405213)。【结论】目前河南省产ESBL鸡大肠杆菌基因亚型以TEM-1变异型为主,CTX-M-65和CTX-M-14型次之。

儿童尿道分离大肠埃希菌CTX-M耐药基因型的分布及pH值变化对其耐药性的影响

目的明确儿童尿道分离大肠埃希菌CTX-M耐药基因型的亚型分布以及pH值变化对其耐药性的影响。方法对2013年10月—2014年5月收治的尿路感染患儿清洁中段尿中分离获得的113株大肠埃希菌进行培养,检测和统计产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌株的药敏结果,并采用PCR及基因测序法分析CTX-M耐药基因的亚型分布。在体外建立不同梯度的酸碱培养环境,评估pH值变化对CTX-M耐药基因型大肠埃希菌耐药性的影响。结果 113株大肠埃希菌中有68株(60.18%)产ESBLs,产ESBLs大肠埃希菌对美罗培南和亚胺培南的耐药率分别为1.47%和2.94%。41株携带CTX-M耐药基因,其中CTX-M-14型和CTX-M-15型为主要亚型,均为18株。相对于中性环境,pH值为6.0、6.5时,大肠埃希菌对头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶和头孢曲松的耐药率差异无统计学意义(P>0.05),粪pH值为6.0时头孢吡肟的耐药性加重,差异均有统计学意义(P<0.01);pH值为8.0、8.5时,大肠埃希菌对头孢他啶和头孢吡肟的耐药率明显下降,pH值为8.5时,大肠埃希菌对头孢噻肟的耐药率明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论产ESBLs大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率低;CTX-M耐药型大肠埃希菌的携带率较高,其中CTX-M-14型和CTX-M-15型为最主要的流行亚型,适当碱化尿液可能有助于CTX-M耐药型大肠埃希菌尿路感染患儿的治疗。

肠杆菌科产CTX-M酶细菌耐药性与β内酰胺酶基因型的关系

目的 了解我院肠杆菌科产 CTX -M酶细菌耐药性与β内酰胺酶基因型的关系。方法 采用琼脂 2 倍稀释法测定 8种β内酰胺类抗生素的最低抑菌浓度;用针对SHV、TEM、CTX -M基因的特异性引物进行PCR扩增确定β内酰胺酶基因型;对扩增的CTX M基因进行DNA序列分析。结果 16株产CTX M酶菌中有15株产2种或2种以上β内酰胺酶。产 CTX- M酶菌对头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶和头孢哌酮 舒巴坦的耐药率分别为 81.3%、75.0%、31.3%和 31.3%。结论 产CTX -M酶菌株绝大多数产多种β内酰胺酶,其对头孢噻肟、头孢吡肟的耐药水平高于不产 CTX -M型 ESBLs株,耐药表型呈多样性,临床中不推荐使用头孢他啶治疗产CTX M酶菌株感染。

CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶原核表达载体的构建及其抗药活性分析

目的分析头孢噻肟—水解酶-14(CTX-M-14)型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)型菌抗药活性,为临床治疗提供参考。方法收集分离产ESBL大肠埃希菌46株,采用PCR克隆目的基因,采用基因重组技术构建pET28a-CTX-M-14质粒,采用BL21大肠埃希菌作为宿主菌进行表达,采用液体稀释法检测其抗药活性。结果PCR扩增条带在约900bp位置处,序列分析结果显示其与目的基因符合;转化子对青霉素类、头孢一、二代及三代中头孢噻肟、头孢曲松耐药,对庆大霉素、四环素、喹诺酮类药物、碳青酶烯类敏感;对头孢他啶体外试验敏感,对加有酶抑制剂的抗生素稳定敏感。结论本研究成功构建了CTX-M-14型ESBL原核表达载体,且具有广泛抗药活性;此为临床合理选择治疗药物提供了理论依据。

CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的序列分析与原核表达

目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)进行基因克隆和重组表达,探讨其特性。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌49号菌总基因组DNA为模板,PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列,再将CTX-M-3基因克隆到pBV220/DH5α系统进行重组,重组菌经42℃热诱导,SDS-PAGE电泳鉴定酶蛋白的表达。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。大肠杆菌DH5α转化pBV220/CTX-M-3重组质粒后,ESBLs试验为阳性,药敏试验结果与原菌株相比耐药性下降。此基因能在大肠埃希菌中大量表达,SDS-PAGE电泳显示,蛋白分子质量大约为31KD。结论成功表达重组的CTX-M-3型酶,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。

安徽省产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌耐药性和基因型研究

目的了解安徽地区产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBIs)的肺炎克雷伯菌检出率,确定其基因型,并对其流行病学特征进行研究。方法纸片法进行表型鉴定;PCR检测产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶菌株;分析基因型;琼脂稀释法进行药物敏感试验。结果52株肺炎克雷伯菌经通用引物PCR检测证实产CTX-M酶,占所有分离菌株的23.4%(52/222),占产ESBLs菌株的49.5%(52/105);经序列分析显示:15株CTX-M-1组阳性结果有12株表达CTX-M-22,2株表达CTX-M-15,1株表达CTX-M-3;37株CTX-M-9组阳性结果有35株表达CTX-M-14,2株表达CTX-M-24;CTX-M-2组和CTX-M-8组未检测出;其中有2株新基因被检出(序列号分别为EU136031和EU202673);药敏结果显示临床野生菌株对多种β-内酰胺类耐药,对哌拉西林/三唑巴坦、阿米卡星、头孢他啶相对较敏感。结论安徽地区CTX-M酶以CTX-M-14型和CTX-M-22型为主,同时存在变异型;药敏结果显示产酶菌株对头孢噻肟和头孢曲松、氨苄西林高度耐药。

革兰阴性杆菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶调查研究(首次发现产blaCTX-M-14的斯氏普罗威登斯菌)

目的调查某院临床分离的革兰阴性(G-)杆菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)株的流行情况,并确定其基因型。方法收集2004年10月—2005年7月临床标本分离的多重耐药G-杆菌233株,按美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的方法进行ESBLs表型确证试验,聚合酶链反应(PCR)法对表型阳性株进一步进行CTX-M酶基因型的扩增,对PCR产物测序并确定其基因型。结果从大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、弗劳地柠檬酸杆菌和斯氏普罗威登斯菌中检出CTX-M型ESBLs,首次从斯氏普罗威登斯菌中检出CTX-M-14型ESBLs。结论该地区多种G-肠杆菌科细菌携带CTX-M型ESBLs,斯氏普罗威登斯菌也能产生CTX-M型ESBLs。

8株产变异型CTX-M-14细菌的耐药基因分析

目的 分析本地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶的变异株基因序列。方 法使用通用引物经聚合酶链反应，自本地区1999～2000年间分离的确认产ESBLs 98株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分离出产CTX-M-9组的所有菌株，将PCR产物送交测序公司完成测序，提交GenBank进行比对，并作结构分析。结果 本地区的产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶菌株中有8株变异株存在。结论 合肥市存在新的CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶基因型，来自CTX-M-14。

某医院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的分子流行病学研究

目的了解某医院产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌检出率,确定其基因型,并对其相关流行病学进行研究。方法收集2004年10月—2005年7月医院临床标本分离的多重耐药大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌134株,按美国临床实验室标准化研究所(CLSI/NC-CLS)所推荐的方法进行表型确证试验,以聚合酶链反应(PCR)法进一步检测CTX-M酶基因型,PCR产物测序并确定其基因型。随机扩增多态DNA(RAPD)对携带CTX-M酶的阳性菌株作流行病学分析。结果112株ESBLs表型阳性的肠杆菌科细菌中90株携带CTX-M基因,共检出3种基因型,即CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。RAPD共测40株菌,19株大肠埃希菌有7种RAPD类型,11株肺炎克雷伯菌有5种RAPD类型,10株阴沟肠杆菌有7种RAPD类型。结论肠杆菌科细菌产CTX-M型ESBLs相当普遍,主要为CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。CTX-M酶存在克隆传播。

10-23脱氧核酶对CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶的抑制作用

目的:探讨10-23脱氧核酶(10-23DRz)抑制CTX-M-38型ESBLs的可行性。方法:依据CTX-M-38型ESBLs序列及其mRNA构象特征,设计针对其mRNA结构的10-23DRz脱氧核酸序列及反义核酸序列;采用氯化钙法对10-23DRz及反义核酸进行转化;依据转化菌在平板上菌落形成状况及菌液吸光度选择10-23DRz应用量;采用K-B法体外药敏试验检测耐药活性。结果:45nmol10-23DRz用量时转化菌菌落形成量及菌液吸光度较为理想。除哌拉西林、头孢噻肟及亚胺培南外,其他抗菌药物10-23DRz组与反义核酸组抑菌环直径间差异有统计学意义(P均<0.001)。结论:10-23DRz可抑制CTX-M-38型ESBLs的表达。

产ESBLs大肠埃希菌CTX-M型耐药基因分析

目的了解某院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)在大肠埃希菌中的检出率,并确定其基因型。方法对该院2005年1—12月临床送检标本中分离的197株大肠埃希菌进行ESBLs表型确证试验和接合试验;采用聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M酶基因型,对PCR产物测序并确定其基因型。结果197株大肠埃希菌中有104株(52.79%)ESBLs表型检测阳性,其中91株符合供体菌标准,64株(70.33%)接合成功,接合子均确证产ESBLs。PCR扩增结果示104株产ESBLs大肠埃希菌中共有98株(94.23%)携带CTX-M型基因,其中38株(36.54%)检出blaCTX-M-1组基因,69株(66.35%)检出blaCTX-M-9组基因。64株接合子中共有51株(79.69%)携带CTX-M型基因,其中18株(28.13%)检出blaCTX-M-1组基因,35株(54.69%)检出blaCTX-M-9组基因。基因测序确定存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15、CTX-M-14、CTX-M-27五种基因亚型,以CTX-M-14为主。结论该院大肠埃希菌产ESBLs和耐药质粒水平传播情况严重,产ESBLs细菌基因型以CTX-M-9组的CTX-M-14亚型为主,同时存在CTX-M-22、CTX-M-28、CTX-M-15和CTX-M-27等多种亚型。

汕头地区产CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌分析

目的了解汕头地区产CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌的情况。方法用通用引物blaCTX-M对已确定为产ESBLs的肺炎克雷伯菌进行PCR扩增、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,检测其对常见抗菌药物的耐药性。结果本地区CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌检出率为30.1%(25/83),标本来源主要为痰液(24株);分布的临床科室为新生儿科、呼吸内科、神经外科、神经内科、儿科、外科ICU、心血管内科及普外科。与其它基因型同时存在较普遍。药敏结果表明对头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、阿米卡星、环丙沙星的敏感率分别为32.0%、4.0%、56.0%、36.0%、12.0%、48.0%,对头孢他啶、哌拉西林/三唑巴坦耐药率分别达56.0%和44.0%。随机将8株产CTX-M型ESBLs的肺炎克雷伯菌作PFGE分析,结果显示2株为相同的PFGE型,其它为不相关的PFGE型。结论产CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌广泛分布于临床各科室,绝大多数菌株来自不同克隆株;多种基因型ESBLs的存在提高了它对抗生素的耐药水平。加强对产ESBLs细菌的检测及分子流行病学研究,对控制院内感染的流行十分重要。

Aβ显像剂^(99)Tc^m-MAMA-DMABP的合成及生物分布

制备了新的Aβ斑块显像剂99Tcm-酰胺基氨基二硫醇(MAMA)-4-氨基-4′-二甲氨基联苯(DMABP),并研究了其在正常小鼠体内的生物分布。实验结果表明,99Tcm-MAMA-DMABP具有较高的初始脑摄取,较快的正常脑组织清除,尾静脉注射后2 min的脑摄取达0.88%/g,2 min与60 min的脑摄取率比值为2.8。

住院患者产CTX-M型ESBLs和KPC的大肠埃希菌感染分布与耐药基因分析

目的了解住院患者产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和碳青霉烯酶(KPC)大肠埃希菌感染的临床分布与耐药情况。方法收集某院2011—2012年临床送检标本分离的多重耐药大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法检测抗菌药物最低抑菌浓度(MIC);聚合酶链反应(PCR)扩增ESBLs和KPC基因,确定CTX-M和KPC基因型别及MLST分型。结果 48株多重耐药大肠埃希菌中单产ESBLs 45株(93.75%),携带blaCTX-M基因者44株(91.67%),其中blaCTX-M-1组基因20株(41.67%)、blaCTX-M-9组基因32株(66.67%),同时携带两组基因者8株(16.67%)。经基因测序确定的基因亚型有CTX-M-14(65.91%,29/44)、CTX-M-55(31.82%,14/44)、CTX-M-15(11.36%,5/44)、CTX-M-3(2.27%,1/44)、CTX-M-24(2.27%,1/44)和CTX-M-65(2.27%,1/44),其中CTX-M-14+CTX-M-55(11.36%,5/44)、CTX-M-14+CTX-M-15(4.55%,2/44)和CTX-M-55+CTX-M-65(2.27%,1/44)。产ESBLs+KPC菌株中2株(4.17%)经PCR扩增均携带blaKPC和blaCTX-M基因,经测序分析1株为CTX-M-14+KPC-2,1株为CTX-M-3+KPC-2。ST131(53.66%)是主要的MLST型别,检测到ST648、ST405、ST167、ST1193等ST型。结论该院大肠埃希菌产ESBLs基因型中CTX-M-14、CTX-M-55和CTX-M-15亚型最常见,存在多种不同亚型;ST131是主要的MLST型别,检测到产KPC-2型碳青霉烯酶菌。

实时定量PCR检测细菌中bla_(CTX-M-14)基因

目的探索实时定量PCR检测临床、环境细菌中blaCTX-M-14基因流行情况。方法将收集的65份标本先用ESBL表型确认试验及其KB琼脂扩散法初筛,然后通过菌落平板计数,实时定量PCR方法测出细菌blaCTX-M-14基因C(t)值,最终计算得到平均每个待测细菌中的blaCTX-M-14基因的单个拷贝数。结果从65份标本中分离得到4株产ESBLs的大肠埃希菌,实时定量PCR检测后得到四株细菌的blaCTX-M-14基因C(t)值依次为11.08,11.63,11.80,13.46,拷贝数分别为6.92×107copies/μl菌液,4.67×107copies/μl菌液,4.22×107copies/μl菌液,1.35×107copies/菌液,即1.05copies/细菌,1.90copies/细菌,2.92copies/细菌,1.10copies/细菌。结论细菌blaCTX-M-14基因拷贝数的高低与细菌多重耐药现象正相关,建立的实时定量PCR检测细菌中blaCTX-M-14基因的方法具有直观,快捷的优点,有助于检测临床及其环境中耐药菌blaCTX-M-14基因流行情况。