微小RNA-148a-3p靶向核心1β13-半乳糖基转移酶1增强肺腺癌细胞的放疗敏感性的研究

目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)在肺腺癌中的表达及临床意义,分析miR-148a-3p靶向蛋白核心1β13-半乳糖基转移酶1(C1GALT1)对肺腺癌细胞放疗敏感性的影响及机制。方法选取肺腺癌组织芯片中76例患者肿瘤组织及肺腺癌A549细胞株为研究对象。对组织芯片分别进行miR-148a-3p原位杂交(ISH)染色和C1GALT1免疫组织化学染色,分析76例肺腺癌患者肿瘤组织中miR-148a-3p的表达与临床病理、预后及C1GALT1表达的关系。采用细胞转染技术对A549细胞进行miR-148a-3p过表达质粒的转染;转染细胞接受2 Gy放疗后采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性;采用蛋白质印迹法检测细胞C1GALT1蛋白表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与C1GALT1的靶向调控关系;采用共转染技术分析miR-148a-3p调控A549细胞放疗敏感性的机制。结果76例肺腺癌组织中低表达miR-148a-3p与患者淋巴结转移显著相关(P=0.012);miR-148a-3p高表达者预后显著优于miR-148a-3p低表达者(P=0.005);肺腺癌组织中miR-148a-3p与C1GALT1的表达呈显著负相关(P=0.023)。多因素分析显示,miR-148a-3p低表达、T分期及淋巴结转移是预后的独立危险因素。克隆形成实验显示,过表达miR-148a-3p组克隆形成数显著低于对照组(P<0.001);Western Blot结果显示,miR-148a-3p过表达可以显著下调细胞中C1GALT1蛋白水平(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-148a-3p通过结合C1GALT1的3′UTR来调控C1GALT1的表达。功能拯救试验显示C1GALT1能够部分抵消miR-148a-3p的放疗增敏效应。结论肺腺癌中miR-148a-3p低表达与淋巴结转移、C1GALT1高表达及预后不良显著相关,miR-148a-3p通过负调控C1GALT1的表达增强肺腺癌细胞的放疗敏感性。

The role of cell surface β1， 4－galactosyltransferase duringectoplacentacone outgrowth on laminin

Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅβ１，４－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｄｕｒｉｎｇｅｃｔｏｐｌａｃｅｎｔａｃｏｎｅｏｕｔｇｒｏｗｔｈ ｏｎ ｌａｍｉｎｉｎＺｈａｎｇＣｈｕｎｙｕ（张春雨），ＣａｏＹｕｊｉｎｇ（曹宇靖），ＤｕａｎＥ...

Schwann细胞表达β1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ对神经元轴突生长的影响

为了探讨周围神经Schwann细胞中不同β1,4半乳糖基转移酶-1(β-1,4-GalT-I)表达水平对神经元轴突生长的影响,本实验首先构建了正、反义β-1,4-GalT-I表达质粒,然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠Schwann细胞,最后将转染的Schwann细胞与分离的大鼠背根神经节共培养;根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积,分析Schwann细胞中不同β-1,4-GalT-I表达水平对神经元轴突生长的影响。结果发现:转染正义β-1,4-GalT-I的Schwann细胞能促进共培养神经节神经元轴突的长出和延伸。在一定的转染浓度内,这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强,而转染反义β-1,4-GalT-I却有相反的作用。提示周围神经Schwann细胞中表达β-1,4-GalT-I可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复发挥重要作用。

β1,4-半乳糖基转移酶I影响雪旺氏细胞增殖的机制

目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶I影响雪旺氏细胞增殖的机制。方法:将不同浓度的β-1,4-GalT-I表达质粒转染雪旺氏细胞,采用Westernblot方法检测增殖相关信号分子cyclinD1、p16INK4以及p27Kip1的表达水平,North-ernblot方法检测p19ARF的表达变化。结果:随着β-1,4-GalT-I在雪旺氏细胞中的表达增加,cyclinD1表达降低,而p16INK4a和p19ARF呈现相反的变化;p27Kip1变化不明显。结论:β-1,4-GalT-I影响雪旺氏细胞增殖可能与cyclinD1、p16INK4a和p19ARF介导的信号传导途径有关。

TNF-α与β1,4-GalT-Ⅰ在骨关节炎滑膜炎症过程中的关系研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(1,4-Gal T-Ⅰ)在骨关节炎滑膜炎症中的关系。方法选取2013年1月至2014年7月在治疗的骨关节炎患者15例,同时选取15例行膝关节探查未见异常健康者作为健康组,检测两组滑膜组织中TNF-α与β1,4-Gal T-Ⅰ表达水平;采用免疫荧光双标法检测TNF-α与β1,4-Gal T-Ⅰ共定位情况;同时培养成纤维滑膜细胞(FLSs),检测TNF-α刺激后β1,4-Gal T-Ⅰ的表达变化。结果观察组TNF-α和β1,4-Gal T-Ⅰ相对表达量分别为(1.22±0.17)和(0.91±0.14),明显高于健康组的(0.41±0.06)和(0.40±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);TNF-α和β1,4-Gal T-Ⅰ在骨关节炎滑膜组织中表达,融合图有明显的共定位;各剂量TNF-α组FLSsβ1,4-Gal T-Ⅰ表达与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),说明TNF-α能够诱导FLSsβ1,4-Gal T-Ⅰ表达增加,从0.1 ng/ml TNF-α时开始增加,在5 ng/ml TNF-α时达到最高(24.18±2.16)×10-4。结论在骨关节炎滑膜炎症过程中,TNF-α可诱导β1,4-Gal T-Ⅰ表达增高。

β1,4-GalT-I通过调节CXCL10/CXCR3激活影响RA成纤维样滑膜细胞的侵袭

目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶-I(β1,4-galactosyltransferase-I,β1,4-GalT-I)与趋化因子CXC配体10(CXC ligand 10,CXCL10)/CXC受体3(CXC receptor 3,CXCR3)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的相互关系及其在RA成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)侵袭中的作用。方法:(1)建立胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型,评估β1,4-GalT-I的作用;(2)运用免疫共沉淀和免疫荧光双标检测β1,4-GalT-I与CXCR3间的相互作用;(3)运用凝集素结合测定检测Galβ1,4GlcNAc糖链的合成;(4)运用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测截短基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)水平;(5)运用Transwell分析检测FLS侵袭性的变化。结果:(1)抑制β1,4-GalT-I减轻CIA小鼠模型的炎症反应;(2)β1,4-GalT-I与CXCR3在体外和体内存在相互作用并在FLS中存在共定位;(3)肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激细胞时,CXCR3上的Galβ1,4GlcNAc糖链合成显著增加;(4)在CXCR3转染的细胞中,si-β1,4-GalT-I降低了截短MMP-1的水平,当使用CXCR3抑制剂AMG487时,β1,4-GalT-I不能增加截短MMP-1的表达;(5)β1,4-GalT-I影响CXCL10/CXCR3介导的FLS侵袭性。结论:β1,4-GalT-I通过调节CXCL10/CXCR3激活影响RA成纤维样滑膜细胞的侵袭。

β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ对施万细胞增殖的影响

目的 探讨周围神经施万细胞表达 β1,4 半乳糖基转移酶 Ⅰ (β 1,4 GalT Ⅰ )对其增殖的影响。 方法 将构建的正、反义 β 1,4 GalT Ⅰ表达质粒 ,转染到施万细胞中 ,分析转染细胞倍增时间、3H TdR掺入情况以及细胞周期变化。 结果 转染正义β 1,4 GalT Ⅰ后施万细胞的增殖受到抑制 ,这种作用随转染浓度增大而增强 ;在G1 /G0 期的细胞数目增加 ,S期的数目减少。而转染反义 β 1,4 GalT Ⅰ有相反的作用。 结论 β 1,4 GalT Ⅰ对施万细胞的增殖有抑制作用 ,可能在周围神经施万细胞的增殖调节中发挥重要作用。

精神分裂症患者血清β1,4半乳糖转移酶的定量检测分析

目的定量检测精神分裂症患者血清β1,4半乳糖转移酶的表达水平,探讨其免疫学意义。方法应用酶联免疫吸附法定量检测了45例精神分裂症患者及44例对照组血清中β1,4半乳糖转移酶水平。结果精神分裂症患者β1,4半乳糖转移酶水平(407.85±121.56)pg/mL,明显高于对照组(358.34±84.40)pg/mL水平(P<0.05);不同性别、不同病程的精神分裂症患者间β1,4半乳糖转移酶水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论精神分裂症患者血清β1,4半乳糖转移酶水平高于对照组,血清β1,4半乳糖转移酶水平增加可能是诱发患者血清免疫球蛋白过度半乳糖基化并造成患者血清中循环免疫复合物清除障碍的病理机制之一。

正义和反义β1,4-半乳糖基转移酶V表达质粒在星形胶质细胞瘤细胞中的表达与鉴定

目的构建β1,4-半乳糖基转移酶V(β1,4-galactosyltransferase V,β-1,4-GalT-V)正、反义表达质粒,为探讨神经胶质瘤细胞表达β-1,4-GalT-V的生物学意义提供研究基础。方法构建β-1,4-GalT-V表达质粒,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中;用Western blot和Northern blot鉴定转染后基因表达情况。结果通过酶切鉴定和测序分析证实,成功构建了β-1,4-GalT-V表达质粒。将构建的表达质粒转染到胶质细胞瘤细胞SHG-44中,正义表达质粒能增加胶质细胞瘤细胞SHG-44中的β-1,4-GalT-V表达量,而转染反义质粒则能降低细胞中β-1,4-GalT-V表达量。结论正、反义β-1,4-GalT-V表达质粒在人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中的稳定转染和表达,对分析胶质瘤细胞表达β-1,4-GalT-V的意义以及对肿瘤细胞的增殖、迁移和黏附等的影响,提供了研究基础。

β1,4-半乳糖基转移酶-I表达质粒在许旺细胞中的转染与鉴定

目的 构建 β1,4 半乳糖基转移酶 I(β1,4 galactosyltransferaseI,β 1,4 GalT I)表达质粒 ,并将其转染到许旺细胞中 ,为探讨周围神经许旺细胞表达 β 1,4 GalT I的生物学意义提供研究基础。 方法 构建 β 1,4 GalT I表达质粒 ,并将其转染到分离培养的许旺细胞中 ;用特异识别 β1,4 半乳糖苷键的蓖麻凝集素 I(RicinusCommunisAgglutinin I,RCA I)免疫组织化学方法和NorthernBlot鉴定转染情况。结果 通过酶切鉴定和测序分析 ,实验成功构建 β 1,4 GalT I表达质粒。将构建的表达质粒转染到许旺细胞中 ,经鉴定表明 ,转染的表达质粒在许旺细胞中能表达 β 1,4 GalT I,并随转染浓度增高而表达增加。 结论 β 1,4 GalT I在许旺细胞中的转染和表达 ,对分析许旺细胞表达 β 1,4 GalT I的意义如对其自身增殖的影响和对神经元生长作用 。

β1—4半乳糖基转移酶受体底物的动力学

研究β1-4半乳糖基转移酶（β1-4GT）与受体底物的亲和性、其底物的天线偏爱性以及糖基对亲和性的影响，以及β1-4GT对不同底物的天线特异性（branchspecificity）。用两种荧光标记的底物1（Gnβ1－2Mal－6（Gnβ1—2Mal－3）Mβ1－4Gnβ1—4Gn－PA）和底物2（Gnβ1－2Mal—6（Gnβ1－2Mal－3）Mβ1—4Gnβ1－4（Fucal－6）Gn－PA），用正常雄性大鼠的肝组织的高尔基体作为酶，测定β1－4GT的不同底物的Km值[1]。结果：底物1和2的Km值分别为2．31×10－3mol／L和3.12×10－3mol／L；对底物1，α1，3天线的N-乙酰氨基葡萄糖基比α1，6天线的反应性强，形成Gnβ1－2Mal－6（Gβ1－4Gnβ1－2Mal—3）Mβ1—4Gnβ1－4Gn—PA产物是Gβ1－4Goβ1—2MQl一6（Goβ1－2Mal－3）Mβ1－4Gnβ1－4Gn－PA的2．10倍左右；对底物2，α1，3天线的N-乙酰氨基葡萄糖基比α1，6天线的反应性更强，形成Gnβ1－2Mal－6（Gβ1－4Gnβ1－2Mal－3）Mβ1－4Gnβ1－4（Fucα1－6）Gn－PA的产物是Gβ1－4Gnβ1－2Mal－6（Gnβ1－2Mal－3）Mβ1－4Gnβ1－4（Fucα1—6）Gn－PA的4.59倍左右。结论：核心岩藻糖对酶与受体底物的亲和性有一定影响。

正、反义β1,4半乳糖基转移酶-V表达质粒的构建

目的 :探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 -V (β -1,4-GalTV)表达水平的生物学意义 ,构建正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。方法 :设计 β -1,4-GalTV全长引物 ;提取小鼠脑总RNA ,通过RT -PCR方法 ,得到全长 β -1,4-GalTV基因片段 ,将其克隆到 pGEM -T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将 β -1,4-GalTV全长序列克隆到 pcD NA 3 .1表达载体中。设计反义引物 ,以pGEM -β -1,4-GalTV质粒为模板 ,将PCR产物克隆到 pcDNA 3 .1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,得到了正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。 结论 :正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β -1,4-GalTV表达水平的生物学意义奠定基础。

正、反义β1,4半乳糖基转移酶-I表达质粒的构建

目的 :为了探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 - I(β1,4 - galactosyltransferase I,β- 1,4 - Gal T- 1)表达水平的生物学意义。方法 :通过分子生物学手段 ,构建正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒。:设计β- 1,4 - Gal T- I全长引物 ;提取小鼠脑总 RNA,通过 RT- PCR方法 ,得到全长 β- 1,4 - Gal T- I基因片段 ,将其克隆到 p GEM- T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将β- 1,4 - Gal T- I全长序列克隆到 pc DNA3.1表达载体中。设计反义引物 ,以 p GEM- β- 1,4 - Gal T- I质粒为模板 ,将 PCR产物克隆到 pc DNA3.1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,实验得到了正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒。结论 :正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β- 1,4 - Gal T-

高糖环境下视网膜微血管周细胞β1,4半乳糖基转移酶-1的表达

目的了解高糖培养环境下牛视网膜微血管周细胞β1,4半乳糖基转移酶-1(galactosyltrans-ferase-1,GalT-1)的表达情况以及细胞凋亡情况。方法原代培养牛视网膜微血管周细胞,在含不同浓度葡萄糖的培养基(5 mmol/L,10 mmol/L,20 mmol/L,30 mmol/L)培养72 h,以5 mmol/L 浓度葡萄糖培养组作为正常对照组。采用 RT-PCR,蛋白凝集素染色法观察不同浓度葡萄糖培养下 GalT-1表达的改变情况,同时采用流式细胞观察高糖诱导的细胞凋亡。结果高糖培养环境下,视网膜微血管周细胞内 GalT-1 mRNA 表达上调,凝集素染色提示视网膜微血管周细胞蛋白由 Galβ 1→4GlcNAc 糖基化基团的修饰表达上调;视网膜微血管周细胞凋亡加剧,各葡萄糖浓度组的凋亡细胞平均死亡率为:7.35±1.82%,16.34±2.25%,29.85±6.66%,39.48±6.48%。结论高糖环境下,牛视网膜微血管周细胞内β1,4半乳糖基转移酶-1的表达上调,其可能参与了高糖环境下的视网膜微血管周细胞凋亡,参与机制有待进一步研究。(中国眼耳鼻喉科杂志,2007,7:147-149)

β1，4-N-乙酰半乳糖胺转移酶的表达调节及其在检测肿瘤微转移中的应用研究

β1,4-N-乙酰半乳糖胺转移酶是糖基转移酶的家族成员之一,它是神经节苷脂GM_2、GD_2以及糖脂GA_2合成的关键酶。目前,动物模型研究结果表明,该酶在神经组织的维持与修复、精母细胞的分化以及白细胞介素-2受体复合体的调节等方面具有重要的作用。它在许多恶性肿瘤组织和细胞株中表达增加,与肿瘤的发生发展密切相关,近年来,应用该酶检测肿瘤微转移已经引起肿瘤学界的重视。

细胞表面β1,4-半乳糖基转移酶1功能研究进展

β1,4-半乳糖基转移酶1(β1,4-galactosyltransferase1,β4GalT1)是人们研究最广泛、最深入的糖基转移酶之一。β4GalT1的基因编码了长形和短形两种蛋白,长形的=βGalT1比短形的β4GalT1在胞浆区多了13个氨基酸的尾巴,正是由于这种差异造成了β4GalT1定位以及功能上的不同,短形的βGalT1和部分长形的β4GalT1分布在高尔基体上,发挥糖基转移酶的基本功能,还有一部分长形的β4GalT1分布在细胞表面,发挥粘附分子样作用,在精卵结合、神经突触生长、神经元迁移、肿瘤细胞迁移等过程中有非常重要的意义。文章主要从β4GalT1的基本结构、β4GalT1与多种配体之间的相互作用介导了细胞不同的生物学功能、β4GalT1与细胞骨架蛋白的关系等几个方面综述细胞膜表面F4GalT1的研究进展。

鬼臼乙叉甙对星形胶质细胞瘤表达β1,4-半乳糖基转移酶的影响

目的 研究鬼臼乙叉甙(Etoposide ,又称VP16)影响人星形胶质细胞瘤SHG 44细胞周期过程中,与N 糖链合成有关的β1,4 半乳糖基转移酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ(β- 1,4 -galactosyltransferaseⅠ、Ⅱ、Ⅴ,β- 1,4- GalT- Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ)表达变化。方法 首先应用流式细胞仪技术分析VP16处理SHG 44细胞过程中细胞增殖情况的变化,再采用NorthernBlot方法分析处理过程中的SHG 44细胞中β- 1,4 -GalT- Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ的表达变化。结果 流式细胞仪检测表明,细胞培养基加入12 0 μmol/LVP161～6h后能引起SHG 44细胞的S期阻滞。NorthernBlot显示,VP16作用1～6h过程中,β- 1,4 GalT -Ⅰ、Ⅴ表达无显著变化。而β- 1,4- GalT -Ⅱ表达在此过程中则有升高趋势。结论 VP16能够引起星形胶质细胞瘤细胞SHG 44细胞周期改变过程中,β- 1,4 -GalT- Ⅰ、Ⅴ的表达无变化,而β- 1,4 -GalT- Ⅱ的表达明显升高。提示VP16引起肿瘤细胞周期改变,可能通过影响β- 1,4- GalT- Ⅱ的表达,引起有关蛋白质的糖基修饰而实现的。

爪哇根结线虫-β1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长克隆和序列分析

以爪哇根结线虫为材料,根据同源序列法分别进行3′末端和5′末端的RACE,获得-β1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长。此cDNA全长序列为1 675 bp,包括1 521 bp的完整ORF,编码一含506 aa的多肽。该基因命名为M j-eng3-,其推导蛋白的编码氨基酸与南方根结线虫的-β1,4-内切葡聚糖酶基因M I-ENG-1、M I-ENG-3和M I-ENG-4的同源性为95.3%、95.8%和85.3%,与另外5个植物寄生线虫β-1,4-内切葡聚糖酶基因推导蛋白PP-ENG-1、GR-ENG-1、GT-ENG-1、HG-ENG-1、HS-ENG-1编码氨基酸的同源性分别为51.2%、43.7%、43.7%、46.8%和45.3%。

人类β1,3半乳糖基转移酶7对人4IgB7-H3的修饰作用初探

目的:探讨人4IgB7-H3基因转染人胃癌细胞株SGC7901后人类β1,3半乳糖基转移酶7(β1,3-galacto-syltransferase 7,β3GalT7)的表达变化,以期发现4IgB7-H3与β3GalT7的相互关系。方法:脂质体介导重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/4IgB7-H3转染SGC7901细胞,筛选获得稳定表达4IgB7-H3的亚克隆细胞株,通过RT-PCR和蛋白质印迹方法检测β3GalT7的表达。结果:成功获得稳定表达4IgB7-H3的亚克隆细胞株SGC7901/4IgB7-H3;β3GalT7随4IgB7-H3的表达上调而上调。结论:4IgB7-H3蛋白的修饰成熟可能需要β3GalT7的作用。

肿瘤坏死因子-α和β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在膝关节滑膜炎中的表达及临床意义

目的分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β1,4-Galactosyltransferase-Ⅰ,β1,4-GalT-Ⅰ)在膝关节滑膜炎中的表达及临床意义。方法将2016年11月—2019年11月收治的109例膝关节滑膜炎作为研究组,选取同期进行膝关节探查结果正常者57例作为对照组。观察2组滑膜组织中β1,4-GalT-Ⅰ及TNF-α的表达情况,分析不同剂量、不同时长TNF-α刺激对滑膜组织成纤维样滑膜细胞中β1,4-GalT-Ⅰ表达的影响。结果研究组TNF-α、β1,4-GalT-Ⅰ表达水平高于对照组(P<0.05)。研究组β1,4-GalT-Ⅰ的表达水平随TNF-α剂量、刺激时长的增加不断上升,在5 ng/ml TNF-α时达到顶峰,TNF-α刺激4 h时达到高峰,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论膝关节滑膜炎患者滑膜组织中β1,4-GalT-Ⅰ及TNF-α的表达显著增高。不同剂量及不同时长的TNF-α刺激成纤维样滑膜细胞β1,4-GalT-Ⅰ的表达存在差异。