α_(1A)-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2稳定共表达细胞的构建

目的建立α_(1A)-肾上腺素能受体(α_(1A)-AR)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)稳定共表达细胞。方法①将pcDNA3.1-α_(1A)-AR-3×FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFPNFAT2细胞,经潮霉素B(Hygro-B)200 mg·L^(-1)压力筛选后加入α_(1A)-AR激动剂去甲肾上腺素(NE,10μmol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度,验证EGFP-NFAT2核转位,筛选得到稳定表达α_(1A)-AR的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测该细胞和对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中α_(1A)-AR mRNA和蛋白的表达水平。③将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞接种于96孔板,分别加入NE(10^(-8)~10^(-5) mol·L^(-1))或α2-AR激动剂右美托咪定(DMED,10^^(-8.8)~10^(-5) mol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位。④将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞分为溶剂对照组、α1-AR拮抗剂萘派地尔(1μmol·L^(-1))组、NE(1μmol·L^(-1))组、萘派地尔+NE(各1μmol·L^(-1)共孵育)组、α2-AR拮抗剂阿替美唑(0.1μmol·L^(-1))组、DMED(0.1μmol·L^(-1))组、阿替美唑+DMED(各0.1μmol·L^(-1)共孵育)组和萘派地尔+DMED(萘派地尔1μmol·L^(-1)与DMED 0.1μmol·L^(-1)共孵育)组,药物孵育时间均为30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位,验证该细胞α_(1A)-AR功能的特异性。结果①Hygro-B压力筛选得到58株U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞,NE 10μmol·L^(-1)孵育后,其中50号细胞核内绿色荧光强度最强,故选定其为稳定共表达α_(1A)-AR和EGFPNFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②Western印迹法结果显示,U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞可明显表达α_(1A)-AR蛋白,而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见α_(1A)-AR蛋白表达。RT-qPCR结果显示,该细胞在传代5~20代内α_(1A)-AR mRNA均稳定表达,其表达水平为对照细胞的500~800倍。③NE或DMED使U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加,半数有效浓度(EC50)分别为5.94×10^(-7)和6.15×10^(-8) mol·L^(-1)。④与溶剂对照组和萘派地尔组比较,NE组U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),而萘派地尔+NE组EGFP-NFAT2核转位较NE组明显减弱(P<0.01)。与溶剂对照组和阿替美唑组比较,DMED组EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),阿替美唑+DMED组EGFP-NFAT2核转位与DMED组比较无明显差别,而萘派地尔+DMED组EGFP-NFAT2核转位较DMED组明显减弱(P<0.01)。结论成功构建稳定共表达α_(1A)-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFPNFAT2-α_(1A)-AR细胞,可用于靶向α_(1A)-AR化合物筛选和受体分子机制研究。

β2肾上腺素受体通过TGF-β1/Smad3信号通路调控创面愈合中的纤维增生

目的探讨β2肾上腺素受体(β2 adrenergic receptor,ADRB2)在创面愈合过程中对纤维增生的调控机制。方法将12只小鼠背部皮肤随机注射非特异性敲减ADRB2基因的腺相关病毒(AAV-ADRB2组,n=6)和对照病毒(AAV-NC组,n=6)21 d后,在背部建立全层皮肤缺损创面愈合模型。记录术后第1、3、5、7天创面愈合率;采用H-E染色、Masson染色和免疫组化染色观察创面组织结构、纤维化程度及α-平滑肌肌动蛋白表达;定量PCR检测ADRB2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)mRNA水平;Western印迹法检测胶原纤维1A1、胶原纤维3A1、TGF-β1、Smad3蛋白表达水平。结果术后第5、7天,AAV-ADRB2组创面愈合率显著下降(P<0.05),伴随表皮增厚、炎症细胞增多、纤维细胞减少、胶原沉积降低;α-SMA水平显著下降(P<0.05);COL1A1/COL3A1比例减少(P<0.05);ADRB2 mRNA水平显著降低(P<0.01),MMP-1和MMP-8 mRNA水平升高(P<0.01);TGF-β1/Smad3蛋白水平显著下降(P<0.05)。结论ADRB2敲减通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减少创面纤维化反应和结缔组织含量,提高MMP mRNA水平,降低Ⅰ型/Ⅲ型胶原比例。

海马β_1和β_2肾上腺素受体与抑郁症的关系

目的:通过大鼠学习无助(learnedhelplessness,LH)抑郁症模型,研究抑郁症的行为学变化及其与海马β1和β2肾上腺受体关系。方法:建立大鼠学习无助抑郁症动物模型,以强迫游泳实验探讨抑郁症大鼠的行为学变化,通过检测海马β1和β2肾上腺素受体mRNA含量研究β1和β2肾上腺素受体与抑郁症的关系。结果:LH抑郁症模型大鼠在强迫游泳实验中悬浮时间明显延长,其海马β1和β2肾上腺素受体mRNA含量明显增加。结论海马β1和β2肾上腺受体含量的增加与抑郁症的发生有关。

卤代烷烃脱卤素酶标签α1A-肾上腺素受体色谱方法的建立与评价

受体色谱技术是将色谱技术的高分离能力和药物-受体间的高特异性识别能力结合起来的一种分析技术,能够对中药等复杂体系中靶向活性成分进行高效筛选与准确辨识。该技术的关键在于发展高效、温和、简便的固定化方法,使得固定化受体活性得以保持。传统的以生物交联剂为核心的随意共价固定化技术存在反应特异性较差、需要纯化蛋白质等不足。针对该问题,本研究将卤代烷烃脱卤素酶(Halo)与6-氯己酸的特异性生物正交反应引入至α_(1A)-肾上腺素受体(α_(1A)-AR)的固定化过程,将Halo标签α_(1A)-AR一步固定至6-氯己酸修饰的氨丙基硅胶表面,无需对α_(1A)-AR进行纯化。采用扫描电子显微镜和色谱法对Halo-α_(1A)-AR色谱固定相进行形貌及活性表征,证明受体已成功固定且具有特异性识别配体的能力,30天内稳定性良好。非线性色谱法研究结果显示:盐酸哌唑嗪、盐酸特拉唑嗪和乌拉地尔通过一类结合位点与Halo-α_(1A)-AR色谱固定相作用,结合常数分别为3.85×10^(5)、5.00×10^(5)和5.90×10^(5)L/mol;甲磺酸酚妥拉明和盐酸坦索罗辛在Halo-α_(1A)-AR色谱固定相上则存在两类位点,前者与受体亲和力分别为3.12×10^(6) L/mol和6.01×10^(5)L/mol,后者则为9.98×10^(5)L/mol和2.11×10^(4) L/mol。与传统物理吸附法或N,N′-羰基二咪唑法制备的α_(1A)-AR色谱柱相比,本文所用固定化方法无需纯化受体,在一定程度上避免了受体活性损失,实现了蛋白质一步固定化方法,亲和力测定值更接近于溶液中受体-药物的真值,为复杂体系靶向活性成分高效筛选与准确测定奠定了基础。

吡格列酮治疗β1肾上腺素能受体自身抗体诱导的大鼠室性心律失常的作用和电生理机制研究

目的:探讨吡格列酮对β1肾上腺素能受体自身抗体(β1AAb)诱导的大鼠室性心律失常治疗作用及电生理机制。方法:将48只SD大鼠按随机数字表法等分为四组:对照组(佐剂注射)、β1AAb组[β1肾上腺素能受体细胞外第二环功能表位肽段(β1AR-ECLⅡ)配以佐剂背部多点注射进行主动免疫,2 mg/(kg·次)]、吡格列酮组[与β1AAb组同等主动免疫8周后,吡格列酮灌胃2周,4 mg/(kg·d)]、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ特异性抑制剂GW9662组[与β1AAb组同等主动免疫8周后吡格列酮灌胃+GW9662腹腔注射2周,其中吡格列酮予以4 mg/(kg·d),GW9662予以1 mg/(kg·d)]。每2周Powerlab多通道生理仪记录心电图,取血。基线和第10周记录超声心动图,10周后进行心电生理、组织病理、免疫组化染色及电镜检查。结果:相较于对照组,β1AAb组室性心律失常诱发率较高、心室有效不应期(VERP)缩短、激动-恢复间期(ARI)延长;左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)低;葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和肉碱棕榈酰转移酶1a(CPT1a)阳性染色面积占比较低;线粒体形态异常及网络损伤明显,P均<0.05。而吡格列酮组较β1AAb组,室性心律失常诱发率降低、VERP延长、ARI缩短;LVEF和LVFS恢复;GLUT1和CPT1a阳性染色面积占比增加;线粒体形态异常及网络损伤改善,P均<0.05。GW9662组较吡格列酮组室性心律失常诱发率较高、VERP缩短、ARI延长;LVEF和LVFS较低;GLUT1和CPT1a阳性染色面积占比低;线粒体形态异常及网络损伤未恢复,P均<0.05。结论:吡格列酮可降低β1AAb诱导的室性心律失常,改善心室电传导和激动恢复时间异质性;并可在组织病理水平缓解β1AAb所致心室重塑,并伴随心室肌糖脂转运通道蛋白的上调和受损线粒体网络的修复。

β_(2)-肾上腺素能受体与神经丝在山羊脾中的分布和共定位研究

为探讨肾上腺素能神经与脾功能联系,用免疫组织化学SP法和免疫荧光双标记法观察β_(2)-肾上腺素能受体(β_(2)-AR)和羊脾神经丝(NFs)在山羊脾中的表达分布特点。结果显示,β_(2)-AR免疫反应阳性产物在山羊脾中分布广泛,白髓、红髓、中央动脉、被膜、小梁、边缘区均有不同程度的着色,白髓中免疫组化染色阳性相对表达量极显著高于红髓(P<0.01),极极显著高于边缘区和被膜(P<0.001);红髓中免疫组化染色阳性相对表达量极显著高于边缘区和被膜(P<0.01);NFs免疫反应阳性产物在山羊脾中红髓、被膜、小梁、小血管、白髓和边缘区均有不同程度的着色,红髓中免疫组化染色阳性相对表达量显著高于白髓(P<0.05),极显著高于边缘区(P<0.01);被膜中免疫组化染色阳性相对表达量极显著高于边缘区和白髓(P<0.01)。共定位研究表明β_(2)-AR和NFs在3个区域存在共定位关系,在平滑肌细胞构成的被膜和小梁中存在,在富含平滑肌细胞的小血管(如中央动脉)中存在,在T、B淋巴细胞丰富区域(如白髓、红髓和边缘区)存在。表明交感-肾上腺素能神经系统对机体免疫具有调控作用。β_(2)-AR和NFs共定位结构证明脾受到交感-肾上腺素能神经的调控,交感神经纤维通过释放神经递质-去甲肾上腺素,作用于脾上的肾上腺素能受体实现功能调控。

β_(1)肾上腺素受体自身抗体激活对心室空间电生理特性的影响及其干预研究

目的室性心律失常的发生与β_(1)肾上腺素受体自身抗体(β_(1)AAbs)有关。本研究旨在探讨β_(1)AAbs对大鼠心室空间电生理特性的作用及干预效果。方法将30只6~8周龄雄性SD大鼠(体重180~220 g)随机分为3组(每组n=10):对照组、β_(1)AAbs组和比索洛尔组。在0、2、4、6周经背部多点注射β_(1)肾上腺素受体第二细胞外环抗原肽建立主动免疫室性心律失常易感模型。测定不同时间节点的血清β_(1)AAbs水平验证模型。在心室不同区域测量电生理参数心室有效不应期、有效不应期离散度、传导速度和传导异质性。马松染色检测心室组织不同区域的纤维化水平。结果与对照组相比,β_(1)AAbs组与比索洛尔组自第2~8周β_(1)AAbs水平显著增高(P<0.05)。与对照组和比索洛尔组相比,β_(1)AAbs组的心率显著增加,RR间期、QT间期和QTc间期明显缩短(P<0.05);不同区域心室有效不应期均明显缩短,有效不应期离散度显著增加(P<0.05),不同区域传导速度减慢、传导异质性增加(P<0.05),不同部位胶原容积百分比明显升高(P<0.05),以上参数改变在中间部最为明显,均可被比索洛尔逆转(P<0.05)。结论β_(1)AAbs可增加心室空间电生理特性改变,其潜在机制可能与不同区域纤维化程度有关,比索洛尔具有潜在治疗价值。

β_(2)肾上腺素受体在erastin诱导的前列腺细胞铁死亡和自噬中的作用及其机制

目的探讨β2肾上腺素受体(ADRB2)在铁死亡激活剂erastin(Era)诱导的前列腺癌细胞铁死亡、自噬中的作用及可能的分子机制。方法取慢病毒或对照感染的PC-3细胞,设置sh-NC组(正常培养)、sh-NC+Era组(10μmol/L Era处理24 h)、sh-ADRB2组(正常培养)与sh-ADRB2+Era组(10μmol/L Era处理24 h)。采用CCK-8法检测铁死亡激活剂Era和铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)处理后的细胞存活率,透射电镜观察细胞形态变化,丙二醛(MDA)检测试剂盒检测MDA含量,铁离子比色法检测铁离子含量。Western blotting检测胱氨酸谷氨酸转运体(XCT)、铁蛋白重链1(FTH1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、p62、LC3、c-Jun N-末端激酶(JNK)、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平。注射ADRB2敲低的PC-3稳转株,构建裸鼠成瘤模型并用Era处理,分为sh-NC组、sh-NC+Era组、sh-ADRB2组与sh-ADRB2+Era组,每组4只。隔天记录瘤体体积及最终瘤体重量,并采用免疫组化检测ADRB2、JNK、c-Jun、p-c-Jun的表达情况。结果Era处理后PC-3细胞存活率下降(P<0.01),加用Fer-1处理后PC-3细胞存活率恢复(P<0.01)。透射电镜下可见,Era处理后PC-3细胞发生铁死亡和自噬形态学改变,MDA和铁离子含量增高(P<0.05或P<0.01);敲低ADRB2并用Era处理后PC-3细胞存活率进一步下降(P<0.05),MDA和铁离子含量进一步升高(P<0.01),FTH1、XCT、GPX4和LC3蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),p62蛋白和JNK通路相关基因JNK、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平升高(P<0.01);JNK抑制剂处理后,FTH1、XCT和LC3表达水平升高,p62表达水平降低(P<0.01)。PC-3裸鼠模型中,sh-ADRB2+Era组瘤体体积明显小于sh-NC+Era组和sh-ADRB2组(P<0.05或P<0.01);免疫组化检测结果显示,与sh-NC组比较,sh-ADRB2组ADRB2蛋白表达水平降低(P<0.05),JNK、c-Jun和p-c-Jun蛋白表达水平升高(P<0.01);与sh-NC+Era组比较,sh-ADRB2+Era组ADRB2蛋白表达水平降低,JNK、c-Jun和p-c-Jun蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论ADRB2可能通过JNK/c-Jun通路调控前列腺癌细胞中Era诱导的铁死亡和自噬。

基于β1-AR/TGF-β1/Smad2通路探讨稳心颗粒对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨稳心颗粒通过β1-AR/TGF-β1/Smad2通路对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导大鼠心肌纤维化的影响。方法雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、ISO组与稳心颗粒低、中、高剂量组以及胺碘酮组,每组10只,连续给药14天。第15天起,ISO组、各药物组大鼠以ISO 5 mg/(kg•d)皮下多点注射构建大鼠心肌纤维化模型。检测大鼠心脏质量指数的变化;采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌形态学变化,Masson染色观察心肌胶原分布和含量变化;检测心肌组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测大鼠心肌组织交感神经系统-β1肾上腺素能受体(β1 adrenoceptor,β1-AR)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)、p-Smad2蛋白表达变化。结果ISO组大鼠心脏质量指数明显升,细胞结构紊乱,胶原沉积和心肌纤维化明显,心肌HYP含量显著增多,GSH含量减少,β1-AR、TGF-β1与p-Smad2表达水平显著升高(P<0.01);与ISO组相比,各治疗组心脏质量指数降低,细胞结构损伤与胶原沉积减轻,心肌纤维化改善,HYP含量降低,GSH含量增多,β1-AR、TGF-β1与p-Smad2表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。稳心颗粒高剂量组效果较稳心颗粒低剂量组更为明显(P<0.05),与胺碘酮组相比无明显差异(P>0.05)。结论稳心颗粒能够改善ISO引起的心肌纤维化,减轻心肌细胞损伤与胶原纤维堆积,其机制可能与β1-AR/TGF-β1/Smad2通路有关。

β_(1)-肾上腺素能受体基因多态性对STEMI患者室性心律失常和短期预后的影响

目的:分析β_(1)-肾上腺素能受体基因多态性对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者室性心律失常以及6个月预后的影响。方法:采用回顾性队列研究方式,按照纳入与排除标准选择云浮市人民医院2021年1月至2023年2月间收治的STEMI患者为研究对象,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析患者β_(1)-肾上腺素能受体Arg389Gly基因型多态性,并根据β_(1)-肾上腺素能受体Arg389Gly基因型多态性类别分为CC组(Arg389Arg,87例)、CG组(Arg389Gly,73例)和GG组(Gly389Gly,18例)三组。对比三组患者收集的入院临床资料[包括Killip分级、心率、收缩压、舒张压、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末径(LVDD),以及血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)等]和出院后通过门诊或电话对其进行6个月随访的结果(包括心率、NT-proBNP、CK-MB、LVEF、LVDD及主要心脏不良事件)的差异。结果:研究共纳入178例STEMI合并室性心律失常的患者,其中CC组有87例(48.9%),CG组有73例(41.0%),GG组有18例(10.1%);三组患者的年龄、性别、体重、BMI、吸烟史、饮酒史、合并疾病、收缩压、舒张压、心率、Killip分级(Ⅲ和Ⅳ级)以及血清TNF-α、NT-proBNP、CK-MB、hs-CRP及LVEF和LVDD均没有显著差异(P>0.05);随访6个月GG组和CG组心功能各项指标结果均显著优于CC组(P<0.05),而GG组的NT-proBNP和CK-MB结果显著低于CG组(P<0.05);统计三组患者随访期间主要心脏不良事件的发生情况,显示CC组的总发生数为17例(19.5%),CG组的总发生数为5例(6.9%),GG组的总发生数为1例(5.6%),组间差异显著(χ^(2)=6.887,P<0.05)。结论:β_(1)-肾上腺素能受体Arg389Gly基因多态性与STEMI合并室性心律失常患者的病情严重程度无关,但与治疗后心功能改善情况以及短期预后有关。

太原市不同污染区域6~12岁儿童哮喘与β_(2) 肾上腺素能受体基因多态性的关系

目的探讨太原市不同污染区儿童哮喘与β_(2)肾上腺素能受体基因多态性的关系。方法选取太原市3个不同空气质量地区的儿童,哮喘患儿共181例,150例健康儿童作为对照组。哮喘组儿童高污染区67例、中污染区61例,低污染区53例,对照组三区各50例。采用ELISA法测血清总IgE水平,提取血清中DNA,采用聚合酶链反应法(PCR)检测β_(2)肾上腺素能受体16、27位点基因多态性,即精氨酸(Arg)16甘氨酸(Gly)位点和谷氨酰胺(Gln)27谷氨酸(Glu)位点基因多态性,统计各基因型和等位基因频率。比较哮喘组与对照组血清总IgE水平的关系,比较哮喘组儿童不同污染区不同基因型血清总IgE水平的差异,同时比较不同污染区域各基因型频率和等位基因频率的分布。结果①哮喘组血清总IgE水平较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),哮喘组儿童检测的β_(2)肾上腺素能受体16、27位点不同基因型之间血清总IgE水平差异无统计学意义。②哮喘组β_(2)肾上腺素能受体16位点基因型Arg/Arg频率较对照组均下降(P<0.05),哮喘组该基因型频率与空气污染程度呈负相关(t=-15.588,P<0.05);Gly/Gly频率哮喘组较对照组均升高(P<0.05),哮喘组该基因型频率与污染程度呈正相关(t=29.445,P<0.05)。③27位点基因型Gln/Glu、Glu/Glu频率哮喘组与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05),高污染区哮喘组Gln/Glu基因型显著高于对照组(P<0.05),中、低污染区哮喘组Gln/Glu基因型显著低于对照组(P>0.05),高、中、低污染区哮喘组Glu/Glu基因型均显著高于对照组(P<0.05),但各基因型频率与污染程度均未见相关性(P>0.05)。结论不同空气质量下,哮喘患者血清总IgE水平与β_(2)肾上腺素能受体16、27基因多态性可能无关;不同空气质量下,哮喘可能与β_(2)肾上腺素能受体16位点基因表达有关,Gly/Gly基因型频率的增加会提高儿童哮喘的发病率;不同空气污染程度下哮喘患者发病率与27位点基因表达无关,所以推测空气污染可能未通过影响27位点基因表达而影响哮喘发病。

β_1肾上腺素受体与CYP2D6基因多态性对美托洛尔抗高血压治疗的影响

目的:探讨β1肾上腺素受体与CYP2D6基因多态性对美托洛尔抗高血压治疗的影响。方法:将2008年10月至2009年10月在安徽省皖南地区收集的120例原发性高血压患者进行β1肾上腺素能受体(β1-AR)和代谢酶细胞色素2136(CYP2D6)基因多态性检测,将β1-AR 389位携带Arg的118例患者按照CYP2D6基因表型分为弱代谢组(PM组,55例)、中等代谢组(IM组,36例)和强代谢组(EM组,27例),给予相同剂量(100mg/d)美托洛尔,均分2次口服降压治疗,共随访4周,观察血压、心率和不良反应等指标。结果:PM、IM、EM组血压和心率均下降,尤以PM组血压和心率降幅最大,但不良反应发生率明显增加。结论:β1肾上腺素受体和CYP2D6基因多态性与美托洛尔降压疗效有一定相关性。

β_2肾上腺素受体通过HIF-1α调控NNK诱导的胰腺癌细胞进展

目的探讨β_2肾上腺素受体在4-甲基亚硝氨基-3-吡啶-1-丁酮(NNK)诱导胰腺癌细胞进展中的具体作用机制。方法采用NNK干预胰腺癌MIA PaCa-2和BxPC-3细胞,通过HIF-1α-shRNA稳定转染胰腺癌细胞及运用ICI118551,以NNK组作为对照,Transwell小室侵袭试验检测各组胰腺癌细胞的侵袭能力,Western blot检测HIF-1α、Cyclin D1和VEGF蛋白表达水平。流式细胞技术检测各组细胞周期变化。结果 NNK能够显著上调MIA PaCa-2和BxPC-3细胞HIF-1α水平及促进胰腺癌细胞的增殖及侵袭能力;β_2肾上腺素受体抑制剂ICI 118551及sh-HIF-1α能够显著下调NNK所诱导的MIA PaCa-2和BxPC-3细胞HIF-1α水平,以及抑制胰腺癌细胞的增殖及侵袭能力。另外,运用CoCl2上调HIF-1α表达水平后能够逆转ICI 118551对NNK效应的抑制作用,重新上调胰腺癌细胞的侵袭能力。结论β_2肾上腺素受体通过HIF-1α来介导NNK诱导的胰腺癌细胞增殖及侵袭。

肾上腺素β受体基因、G蛋白基因和CYP2D6基因多态性对美托洛尔导致脂代谢异常的影响

目的:研究肾上腺素β受体基因、G蛋白基因和CYP2D6基因多态性对美托洛尔导致脂代谢异常的影响。方法:选取2019年10月至2022年10月该院收治的初治高血压患者120例,检测β_(1)受体基因Ser49Gly、Gly389Arg多态;β_(2)受体基因Arg16Gly、Gln27Glu多态;β3受体基因Trp64Arg多态;代谢酶基因CYP2D6*10的P34S多态;G蛋白基因GNB3 C825T多态。比较美托洛尔单药治疗3个月后不同表型总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平变化。结果:各基因位点不同基因型患者的年龄、性别、体重指数、基线TC和基线TG等指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗3个月后,β_(2)肾上腺素受体基因Arg16Gly患者的TG水平升高,其中Gly/Gly型患者升高幅度最高,Arg/Gly型次之,二者均高于Arg/Arg型,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:β_(2)肾上腺素受体Arg16Gly多态与美托洛尔引起的血浆TG水平升高相关,携带2个G等位基因会导致服药后血脂水平明显升高。

β_2肾上腺素受体16,27位遗传多态性与哮喘关系研究

目的 :探讨 β2 肾上腺素受体编码区 16 ,2 7位点遗传多态性与哮喘的关系 .方法 :通过测序确定15 4名受试者的基因突变类型 (正常对照组 86名 ,哮喘组 6 8名 ) ,并测定哮喘患者的FEV1,调查患者使用 β2激动剂情况 ,以分析哮喘与 16 ,2 7位点遗传多态性的关系 .结果 :中国人群存在 16位点Arg→Gly及 2 7位点Gln→Glu的突变 ,但与高加索人群比较突变频率较低 ,16位点分别为 42 31%和 70 0 % (P <0 0 0 1) .2 7位点分别为 8 7%和 49 1% (P <0 0 0 1) .16位点基因型分别为Arg/Arg ,Arg/Gly ,Gly/Gl的患者 ,FEV1分别为 0 6 4± 0 0 6 ,0 73± 0 0 4及 0 82± 0 0 5 (F =78 85 ,P <0 0 0 1) ,差异显著 .平均每周使用 β2 激动剂(1 7± 0 3) ,(3 8± 1 4)及 (6 5± 2 2 )mg (F =6 5 73,P <0 0 0 1) .结论 :中国西南地区人群与高加索人群 16 ,2 7位点的基因突变频率不同 ,β2 肾上腺素受体的遗传多态性不是哮喘发病的基本原因 。

β_2-肾上腺素能受体基因Arg16/Gly多态性与原发性高血压的关系

目的检测贵州汉族人群β2-肾上腺素能受体基因Arg16/Gly多态性,并研究其与原发性高血压(EH)及其它心血管病危险因素的关系。方法选择131例EH患者及40个正常人为研究对象,通过特异性等位基因聚合酶链反应确定其基因型,并测定每个对象的体重指数、腰围/臀围、空腹血甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇以及脂蛋白(α)值等指标。结果(1)Arg16/Gly多态性的基因型和等位基因频率EH组和对照组间差异无显著性(P>0.05);(2) Arg16/Gly多态性与体重指数、腰围/臀围、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白以及脂蛋白(α)等指标无关联(P>0.05)。结论β2-AR基因Arg16/Gly多态性与EH及心血管病危险因素无关。

β_2肾上腺素受体基因Arg16Gly变异与高糖低脂膳食诱导的健康青年女性血脂及载脂蛋白比值的关联分析

目的探讨β2肾上腺素受体(β2-adrenoceptor,β2AR)基因(β2AR)Arg16Gly多态性对健康青年血脂及载脂蛋白比值的影响及在高糖低脂(high-carbohydrate/low-fat,HC/LF)膳食诱导的血脂及载脂蛋白比值变化中的作用。方法56例健康志愿者,给予7d平衡膳食和6dHC/LF膳食,于第1、8天及第14天取12h空腹静脉血,测定血脂和载脂蛋白(apolipoprotein,apo)AI、B100水平,计算TG/HDL-C、log(TG/HDL-C)、TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C、apoAI/apoB100值。提取基因组DNA,聚合酶链反应-限制性酶切法分析Arg16Gly多态性。结果不同性别AA基因型受试者与G等位基因携带者之间血脂比值的基础值差异无统计学意义(P>0.05)。平衡膳食后及HC/LF膳食后,无论是受试人群整体还是将男女分组分析,AA基因型受试者与G等位基因携带者之间血脂及载脂蛋白比值亦无明显差异(P>0.05)。与HC/LF膳食前相比,HC/LF膳食后,在受试人群整体,AA基因型受试者TG/HDL-C(P=0.017)、log(TG/HDL-C)(P=0.031)、apoAI/apoB100(P=0.006)显著升高,LDL-C/HDL-C和TC/HDL-C显著降低(P<0.01),而G等位基因携带者仅LDL-C/HDL-C和TC/HDL-C显著降低(P<0.01)。男女分组分析发现,与HC/LF膳食前相比,男性受试组中HC/LF膳食后LDL-C/HDL-C(AA基因型:P=0.035,G等位基因:P=0.002)和TC/HDL-C(AA基因型:P<0.01,G等位基因:P<0.01)在AA基因型受试者与G等位基因携带者中均显著下降,apoAI/apoB100仅在AA基因型显著升高(P=0.003);女性受试组中,HC/LF膳食后LDL-C/HDL-C(AA基因型:P=0.011,G等位基因:P=0.043)和TC/HDL-C(AA基因型:P<0.01,G等位基因:P<0.01)在AA基因型受试者与G等位基因携带者均显著下降,TG/HDL-C(P=0.001)和log(TG/HDL-C)(P=0.001)仅在AA基因型较膳食前显著升高。结论β2肾上腺素受体基因Arg16Gly变异能抑制HC/LF膳食诱导的健康青年女性TG/HDL-C和log(TG/HDL-C)升高,而HC/LF膳食诱导的TG/HDL-C和log(TG/HDL-C)改变在该位点野生型(AA基因型)和变异携带者(G等位基因)健康青年男性之间没有明显差异,可能与apoAI/apoB100有关。

β_2肾上腺素能受体基因R16G多态与哈萨克族男性肥胖的相关性

目的探讨β2肾上腺素能受体基因R16G多态在哈萨克族人群肥胖发病中所起的作用。方法应用Taqman技术检测331例哈萨克族正常体重者,380例超重者以及232例肥胖者中ADRB2基因R16G多态性,观察各基因型和等位基因频率在不同BMI水平的分布及其与超重肥胖的关系。结果哈萨克族正常体重组、超重组与肥胖组组间基因型和等位基因频率的分布无统计学差异,但突变型纯合子基因型频率在哈萨克族超重组及肥胖组有增高趋势;将哈萨克族人群按性别分层并用logistic回归模型校正年龄、血压之后,显示男性组间基因型频率分布存在统计学差异(χ2=8.707,P=0.013),携带突变型纯合子(AA基因型)的个体患肥胖的风险为GG基因型的2.18倍。结论ADRB2基因R16G多态与哈萨克族男性肥胖相关,AA基因型可能是哈萨克族男性肥胖的风险因子。

巴戟天多糖对骨质疏松大鼠骨质量、生物力学、β2肾上腺素能受体及OX-LDL水平的影响

目的探讨巴戟天多糖对骨质疏松大鼠骨质量、生物力学及β2肾上腺素能受体(ADRB2)及氧化修饰低密度脂蛋白(OX-LDL)水平的影响。方法选取54只大鼠分为正常组、模型组、西药组和低、中、高剂量组各9只。除正常组外,其余组别均用去双侧卵巢方法建立骨质疏松大鼠模型,建模成功后,模型组与正常组不进行用药,西药组采用普拉芬进行每天喂药干预,低剂量组、中剂量组、高剂量组每日灌胃不同剂量的巴戟天多糖。分别检测各组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,骨生物力学和骨质量,ADRB2的表达水平。结果模型组血清中TC、TG、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、LDL-C及OX-LDL、ADRB2蛋白显著高于正常组(P<0.05),西药组、中剂量组及高剂量组上述指标显著低于模型组(P<0.05),高剂量组上述指标显著低于西药组(P<0.05);模型组弹性模量、最大载荷、屈服强度、断裂点载荷、股骨、胫骨骨密度和刚性系数表达显著低于正常组(P<0.05),西药组、中剂量组及高剂量组上述指标显著高于模型组(P<0.05),高剂量组上述指标显著高于西药组(P<0.05)。结论巴戟天多糖对于降低骨质疏松大鼠血清TC、TG和OX-LDL水平、增强骨质量及骨生物力学及平衡肾上腺素(ADRB2)水平方面具有积极影响。

β_2肾上腺素受体对Aβ_(1-40)诱导阿尔茨海默病大鼠脑内胆碱能水平的影响

目的:研究β2肾上腺素受体激动剂和抑制剂对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力和脑内乙酰胆碱含量的影响。方法:40只健康雄性SD大鼠随机平均分为4组:对照组、AD组、克伦特罗组和ICI118,551组。AD组给予海马内注射Aβ1-401μl(10μg),克伦特罗组和ICI118,551组同样注射Aβ1-40后分别腹腔注射克伦特罗0.5 mg/kg和ICI118,551 1 mg/kg。对照组注射生理盐水。Y迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力后检测海马内胆碱酯酶(AChE)和乙酰转移酶(ChAT)的含量,Nissle染色观察海马CA1区神经元的形态学改变。结果:与AD组相比,克伦特罗组的学习记忆能力明显下降(P<0.01),海马ChAT、AChE活力下降,CA1区神经元凋亡明显(P<0.01);而ICI118,551组学习记忆能力、海马ChAT、AChE活力均较AD组提高,海马神经元的损伤情况较AD组有所改善(P<0.05)。结论:β2肾上腺素受体激动剂、抑制剂分别能加重和减轻AD病变,其机制可能与改变脑内胆碱能水平有关。