优化新生脉散方调控β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 基于β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路探讨优化新生脉散方对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、卡托普利组和中药低、高剂量组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃4周。超声心动图测定大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS),测定心、肺质量并计算心、肺脏器系数,组织病理学观察心肌纤维化程度,ELISA测定血清N端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)及心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)含量,免疫组化检测心肌组织β1肾上腺素受体(β1-AR)、cAMP阳性表达,Western blot检测心肌组织β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低(P<0.01),心、肺脏器系数明显升高(P<0.01);心肌细胞数目减少、胶原容积分数升高、Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比增加(P<0.01),血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量明显升高,心肌组织cAMP含量明显降低(P<0.01),心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达明显降低(P<0.01),β1-AR、腺苷酸环化酶(AC)1、cAMP、p-蛋白激酶A(PKA)、p-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达明显降低,p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,给药组不同程度增加大鼠LVEF、LVFS,降低心、肺脏器系数;增加心肌细胞数目、减少胶原容积分数和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比,下调血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量,上调cAMP含量,增加心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达,上调β1-AR、AC1、cAMP、p-PKA、p-CREB蛋白表达,抑制p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA蛋白表达,其中中药高剂量组和卡托普利组作用更明显(P<0.01,P<0.05)。结论 优化新生脉散方能减轻心力衰竭大鼠心肌纤维化程度,改善心肌肥厚和重构,增加左心室收缩力,其机制可能与激活β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

腹水草对人胃上皮细胞GES-1的保护作用及其对PKA、CREB、AQP1的调控研究

[目的]研究腹水草(Veronicastrum axillare,V.axillare)含药血清对乙醇损伤的人胃上皮细胞(gastric epithelial cells-1,GES-1)的保护作用及其对环腺苷酸依赖性激酶(protein kinase A,PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)、水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)表达水平的调控作用。[方法]20只雄性SD大鼠随机分为5组(n=4),连续灌胃给药14d,制备正常组(生理盐水20 m L·kg-1)、雷尼替丁组(0.027g·kg-1)以及V.axillare低、中、高剂量组(0.7、1.4、2.8 g·kg-1)含药血清。MTT法检测体外培养的GES-1细胞的活性,研究V.axillare含药血清及PKA抑制剂H-89(25μmol·m L-1)预处理对5%乙醇诱导GES-1细胞活力的影响。荧光定量RT-PCR检测PKA、CREB及AQP1 m RNA的表达水平,Western blot检测AQP1蛋白表达水平。[结果]模型组和H-89组GES-1细胞活性低于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);乙醇造模处理显著上调PKA、CREB及下调AQP1的表达水平,差异有统计学意义(P<0.01);H-89处理显著抑制PKA和CREB m RNA表达水平(P<0.01);加入各剂量V.axillare含药血清不能显著改善H-89对PKA、CREB和AQP1 m RNA表达水平的抑制作用。V.axillare中、高剂量含药血清细胞活性高于模型组,PKA、CREB m RNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01),而V.axillare中、低剂量含药血清AQP1表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]V.axillare含药血清显著减轻乙醇对GES-1细胞的损伤,对GES-1细胞具有保护作用,其保护机制与下调PKA、CREB及上调AQP1的表达有关。

左归丸治疗骨质疏松症相关机制

左归丸是中医经典方剂之一，为“阳中求阴”的代表方，具有滋肾补阴的功效和纯补无泻的特点。骨质疏松症是一种以骨量低，骨组织结构破坏，导致骨脆性增加，骨强度下降及骨折风险增加，易发生骨折为特征的全身性骨病，它已成为威胁人类健康的常见疾病之一。中医学有“肾藏精，主骨生髓”的理论，左归丸在治疗骨质疏松症方面有着较好的临床疗效，同时也具有较少的副作用。近年来，针对左归丸治疗骨质疏松症的实验研究数量与日俱增，相关分子以及信号通路的机制研究亦取得一定拓展，特别是左归丸治疗骨质疏松症的相关机制研究陆续涌现。本研究通过整理左归丸治疗骨质疏松症的文献，对其作用机制及信号通路，包括环腺苷酸（cAMP）／蛋白激酶（PKA）／cAMP应答元件结合蛋白（CREB）通路，Notch信号通路，转化生长因子巾，（TGF-卢，）／Smad信号通路，Wnt／卢一链蛋白（卢一catenin）信号通路和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等方面做一综述。这些研究表明左归丸治疗骨质疏松症具有多靶点、多途径的干预特点。虽然左归丸治疗骨质疏松症的疗效明确，且对于一些基本的机制研究亦取得一定进展，但仍存在一定的局限性，尚需结合现代最新研究方法和技术对其机制进行更全面更深入的探索。