胃癌中β3GnT8的表达及临床意义

目的探讨β3GnT8在胃癌中的表达及临床意义。方法制作胃癌组织芯片,采用免疫组化En Vision法检测β3GnT8、MMP-2、PCNA在胃癌及癌旁正常组织中的表达,并分析各蛋白之间表达的相关性及其与临床病理特征的关系。结果β3GnT8、MMP-2、PCNA在胃癌组织中的表达均高于癌旁正常组织(P=0. 001)。β3GnT8表达与胃癌临床分期(P=0. 001)、浸润深度(P=0. 011)、淋巴结转移(P=0. 003)呈显著正相关。β3GnT8表达与MMP-2(r=0. 703,P=0. 001)、PCNA的表达(r=0. 231,P=0. 024)呈显著正相关,β3GnT8阳性组的总体生存时间较阴性组显著缩短(χ2=3. 957,P=0. 047)。结论β3GnT8在胃癌中的表达增高,具有促进胃癌侵袭、转移的作用,与胃癌患者的不良预后有关。

糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在多种肿瘤细胞中的表达

目的:探讨一种新的糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在多种肿瘤细胞中的mRNA表达情况。方法:运用半定量RT-PCR方法研究人β3GnT8/β3GalT7基因在11种恶性肿瘤细胞中的表达谱。结果:β3GnT8/β3GalT7基因在多种肿瘤细胞株中都有表达,在A549细胞中的表达最高,在SGC7901细胞中中度表达,在白血病细胞中的表达较低。结论:β3GnT8/β3GalT7基因在11种肿瘤细胞中的表达有显著差异。

c-jun siRNA的构建及其对胃癌细胞株SGC7901中β3GnT8基因表达的影响

目的 构建c-jun干扰载体,有效沉默胃癌SGC7901细胞株中的c-jun基因表达,研究其对胃癌SGC7901细胞株中β3GnT8基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对c-jun基因的靶序列设计合成四条siRNA,将四条siRNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的c-jun siRNA载体质粒pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1949、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1050、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1111、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1276通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染SGC7901细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,通过RT-PCR法检测c-jun和β3GnT8基因mRNA的表达.结果 ①成功构建了四条正确的c-jun siRNA表达质粒;②成功筛选出一条对c-jun有明显抑制作用的siRNA干扰质粒,阻断c-jun表达后,糖基转移酶β3GnT8的表达受到明显抑制.结论 构建的c-jun siRNA表达质粒可以有效抑制胃癌SGC7901细胞株的c-jun基因表达,同时抑制糖基转移酶β3GnT8的表达,为研究胃癌的分子机制提供了一定的理论基础.

β3GnT8基因对HL60细胞体外侵袭能力的影响

目的：初步探讨β3GnT8/GalT7基因对HL60细胞体外侵袭的作用。方法通过脂质体介导将实验室构建好的β3GnT8真核正义表达载体pEGFP-C1-T8-Sense和反义表达载体pEGFP-C1-T8-AntiSense转染入HL60细胞；RT-PCR和Western blot检测浸润转移相关的功能基因TGFβ1、MMP2、MMP14在mRNA水平和蛋白质水平的表达变化；Transwell侵袭实验检测β3GnT8对HL60细胞侵袭转移能力的影响。结果随着β3GnT8表达上调，细胞侵袭能力高于对照组（P＜0.05），MMP2、MMP14在mRNA和蛋白质水平的表达上调，而TGFβ1表达下调；随着β3GnT8表达下调，细胞侵袭能力下降，MMP2、MMP14在mRNA和蛋白质水平的表达下调，而TGFβ1表达上调。结论β3GnT8可在体外增强HL60细胞的侵袭能力，而该作用可能源于它能够诱导肿瘤侵袭相关蛋白的表达变化。

β3GnT8基因对肺腺癌A549细胞黏附、迁移、侵袭的影响

目的探讨β1,3-N乙酰氨基葡萄糖基转移酶Ⅷ(β3GnT8)基因低表达对肺腺癌A549细胞黏附、迁移、侵袭的影响及作用机制。方法通过脂质体介导将反义表达载体pEGFP-C1-β3GnT8-AntiSense和空载体pEGFP-C1转染入肺腺癌A549细胞;运用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测转染前后β3GnT8 mRNA表达水平,Western印迹检测转染前后其蛋白表达;运用细胞划痕实验检测β3GnT8对A549细胞迁移能力的影响,黏附实验检测β3GnT8对A549细胞黏附能力的影响,Transwell侵袭实验检测β3GnT8对A549细胞侵袭能力的影响;Western印迹检测浸润转移相关的功能基因CD147、基质金属蛋白酶(MMP)-2在蛋白水平的表达。结果A549-AS组β3GnT8 mRNA表达水平显著低于A549组和A549-0组(均P<0.05)。A549-AS组β3GnT8的蛋白表达水平显著低于A549组和A549-0组(均P<0.05)。A549-AS组细胞迁移率显著低于A549组和A549-0组(均P<0.05)。A549-AS组对纤维连接蛋白的黏附百分比及侵袭细胞数目显著低于A549组和A549-0组(均P<0.05)。A549-AS组CD147、MMP-2水平显著低于A549组和A549-0组(均P<0.05)。结论β3GnT8低表达可能通过调控CD147、MMP-2的表达抑制肺腺癌A549细胞黏附、迁移和侵袭。

β3GnT8基因对A549肺腺癌细胞增殖侵袭的影响

目的探讨β1,3-N乙酰氨基葡萄糖基转移酶8(β3GnT8)基因对A549肺腺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法将β3GnT8正义真核表达载体(pEGFP-C1-β3GnT8-Sense)和空载体(pEGFP-C1)分别转染A549肺腺癌细胞,分别命名为A549-S组及A549-0组,未转染细胞为A549组。分别采用荧光定量PCR和Western blot检测β3GnT8的mRNA水平表达和蛋白水平的表达;采用MTT法、Transwell侵袭实验分别检测β3GnT8对A549细胞增殖、侵袭能力的影响;Western blot检测浸润转移相关的功能基因基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在蛋白质水平的表达变化。结果随着β3GnT8表达增高,细胞增殖和侵袭能力均高于A549组,MMP-2、MMP-9在蛋白质水平的表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。A549-0组与A549组差异无统计学意义(P>0.05)。结论β3GnT8高表达可促进A549细胞增殖、侵袭转移。

人类β3-糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在恶性血液系统肿瘤细胞中的表达差异及其原核表达和鉴定

目的研究一种新的人类β3-糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在恶性血液系统肿瘤细胞中mRNA水平的表达情况,并在原核体系中克隆和表达。方法运用半定量RT-PCR方法研究人β3GnT8/β3GalT7在13种恶性血液系统肿瘤细胞中的表达谱,以其中表达该基因最高的THP-1细胞的cDNA为模板,克隆目的基因,构建重组表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达。经超声裂菌,尿素溶解包涵体,过Ni-NTA琼脂糖层析柱纯化,透析复性浓缩后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot验证。结果 K562、U937、THP-1和NB4细胞株均较高效表达β3GnT8/β3GalT7,其中THP-1细胞株表达最高;并成功构建原核表达载体pQE30-β3GnT8/β3GalT7,表达出相应的重组蛋白。结论人β3GnT8/β3GalT7在13株细胞中表达有显著差异,并获得大量较纯的目的蛋白,其分子量与预测相符,为单克隆抗体制备及进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。

人类β3-N-乙酰氨基葡萄糖基(β3半乳糖)转移酶β3GnT8/GalT7的抗体制备、免疫组化分析及其亚细胞定位

目的探讨β3GnT8(β3GalT7,AY277592,EC2.4.1.-)基因(人类β3-糖基转移酶家族中的一个新成员)的功能。方法原核表达该蛋白,以纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗血清;以Westernblot和免疫组化分析其在多种组织细胞的表达情况;并通过荧光免疫细胞化学进行亚细胞定位。结果获得了较纯的表达蛋白和高效价、高特异性的抗血清,并且发现该蛋白大部分位于核膜周围的胞浆中;免疫组化分析显示肿瘤细胞和组织中该酶有较高的表达,与正常组织比较具有一定的差异性。结论该实验获得了β3GnT8/β3GalT7基因的蛋白质和相应抗体,并且对该蛋白进行了亚细胞定位,为对其生物学功能的进一步研究奠定了基础。

人类β3GnT8/β3GalT7对人4IgB7-H3蛋白的翻译后糖基化修饰作用

目的探讨人类β1,3N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶8/β3半乳糖基转移酶7(β3GnT8/β3GalT7)与人4IgB7-H3蛋白的相互作用,以期阐明该糖基转移酶对人4IgB7-H3蛋白的翻译后糖基化修饰作用。方法在线预测软件预测人4IgB7-H3蛋白氨基酸序列上潜在的糖基转移酶作用位点;免疫共沉淀探讨β3GnT8/β3GalT7与人4IgB7-H3蛋白的相互结合作用;细胞免疫荧光化学技术研究两种蛋白质在细胞内的空间定位。结果人4IgB7-H3蛋白氨基酸序列上潜在的N-糖基化位点共有8个,O-β-GlcNAc的附着位置共有18个;β3GnT8/β3GalT7与人4IgB7-H3蛋白能相互结合而被共沉淀;两种蛋白质能在人肺癌A549细胞中共定位。结论人类β3GnT8/β3GalT7可能对人4IgB7-H3蛋白有糖基化修饰作用。

β1,3-N乙酰氨基葡萄糖基转移酶8表达与胃癌新辅助化疗疗效相关性研究

目的探讨β1,3-N乙酰氨基葡萄糖基转移酶8(β3GnT8)表达与胃癌病人新辅助化疗疗效相关性研究。方法选取2013年1月至2014年7月在武汉市第一医院确诊为原发性胃癌的病人80例,免疫组织化学法检测胃癌及癌旁组织中β3GnT8和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达,并观察其新辅助化疗疗效和生存状况。采用χ^(2)检验、Kaplan-Meier并log-rank检验及Cox回归分析数据。结果β3GnT8和MMP-2在癌组织中的阳性表达率均高于癌旁组织。β3GnT8和MMP-2在低分化、Ⅲ期、淋巴结转移病人中阳性表达率增高(P<0.05)。χ^(2)检验结果显示:β3GnT8高表达组新辅助化疗有效率为59.70%(40/67),且明显低于β3GnT8低表达组92.31%(12/13)(χ^(2)=5.088,P=0.024)。MMP-2高表达组新辅助化疗有效率为58.46%(38/65),且明显低于MMP-2低表达组93.33%(14/15)(χ^(2)=6.515,P=0.011)。多因素Cox回归分析显示:较低分化程度、Ⅲ期、淋巴结转移、β3GnT8阳性表达、MMP-2阳性表达可增加新辅助化疗胃癌病人死亡风险[HR(95%CI):1.27(1.24~1.31),1.49(1.29~1.72),1.32(1.15~1.51),1.28(1.14~1.44),1.31(1.15~1.50)]。结论胃癌癌组织β3GnT8表达是新辅助化疗预后的独立影响因素,β3GnT8阳性表达者化疗疗效差,死亡风险增加。

追毒方逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药的作用机制

目的基于糖基转移酶β3GnT8探讨追毒方逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药的作用机制。方法通过MTT法观察追毒方对MDA-MB-231耐药细胞增殖的抑制作用,通过转染β3GnT8得到高表达β3GnT8的MDA-MB-231/TAX细胞株,采用Western blot观察糖基转移酶β3GnT8和耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,通过凝集素流式细胞术观察转染β3GnT8MDA-MB-231/TAX细胞膜表面β3GnT8的荧光强度。结果追毒方有效成分能明显抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231耐药细胞的增殖,作用72h抑制率达到50.16%,能有效下调β3GnT8和耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,并且β3GnT8的表达与BCRP、P-gp呈正相关。结论追毒方可通过下调糖基转移酶β3GnT8,从而降低耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药性。

“养阴解毒方”联合化疗治疗阴虚毒热型非小细胞肺癌31例临床研究

目的:观察在化疗基础上加用中药汤剂养阴解毒方对阴虚毒热型非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清β1,3-N乙酰氨基葡萄糖基转移酶(β3GnT8)、跨膜糖蛋白CD147(简称CD147)和肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)等指标的影响。方法:选择符合纳入标准的NSCLC患者61例,随机分为治疗组31例和对照组30例。对照组予规范化疗,治疗组在规范化疗基础上联合使用中药汤剂养阴解毒方。2组均以治疗3周为1个疗程,连续治疗2个疗程后评价疗效。观察并比较2组患者治疗前后血清β3GnT8、CD147和肿瘤标志物CEA、CA125表达,以及中医证候总分改变情况;治疗后比较2组患者中医证候疗效;比较2组患者治疗期间骨髓抑制等化疗不良反应发生情况。结果:治疗后2组患者血清β3GnT8、CD147表达均较治疗前明显降低(P<0.01),治疗组上述指标明显低于对照组(P<0.05)。2组患者血清肿瘤标志物CEA、CA125含量治疗前后组内及治疗后组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后治疗组患者中医证候总分较治疗前显著降低(P<0.01),也明显低于对照组治疗后(P<0.05)。治疗组中医证候总有效率为25.81%,明显高于对照组的6.67%(P<0.05)。治疗组骨髓抑制等化疗不良反应发生率为16.13%,低于对照组的26.67%,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在化疗基础上加用中药汤剂养阴解毒方治疗阴虚毒热型NSCLC患者可显著降低肿瘤相关信号通路β3GnT8、CD147表达,改善临床症状,减轻化疗毒副反应,值得进一步研究。

追毒方调控c-JUN抑制糖基化异常逆转三阴性乳腺癌耐药的机制

目的从c-JUN调控的糖基化角度探究追毒方逆转三阴性乳腺癌(TNBC)耐药的机制。方法MTT检测细胞增殖,采用Western blot检测c-JUN、β3GnT8和ppGalNAc-T1/2、CD147、耐药蛋白BCRP和MDR1的表达。采用转染c-JUN质粒建立过表达c-JUN的MDA-MB-231/ADR细胞。体内实验采用耐药TNBC原位移植裸鼠模型。结果追毒方可显著抑制MDA-MB-231/ADR细胞的增殖(P<0.01),具有时效和量效关系;可明显抑制耐药TNBC原位移植裸鼠的肿瘤质量(P<0.01);降低耐药蛋白BCRP和MDR1表达(P<0.01),并同时明显降低c-JUN、β3GnT8和ppGalNAc-T1/2、CD147蛋白的表达(P<0.05)。过表达c-JUN后,与空白质粒对照组比较,β3GnT8、ppGalNAc T1/2、CD147、BCRP和MDR1的表达均显示增加(P<0.05,P<0.01)。而空白质粒对上述蛋白的表达无影响。追毒方可以显著降低过表达c-JUN后的上述蛋白的表达,但其表达水平还是显著高于空白质粒加药组(P<0.05,P<0.01)。结论追毒方通过作用于调控因子c-JUN,下调β3GnT8和ppGalNAc-T1/2的激活,从而抑制CD147的糖基化修饰,导致耐药蛋白BCRP和MDR1下调而逆转TNBC耐药。