福建黄兔卵泡抑制素βA亚基cDNA的克隆与序列分析

从性成熟的福建黄兔母兔脑垂体中提取总RNA,经RT-PCR扩增目的片段,获得长为1 275bp的黄兔卵泡抑制素βA亚基cDNA片段。将扩增的片段与pMD18-T载体连接,转化至DH5α感受态细胞中。随机挑选阳性重组子进行鉴定、测序,将测序结果与包括人、大猩猩、奶牛、绵羊、小鼠在内的多种哺乳动物基因序列进行同源性比对分析,相似度在85%以上,同时遗传进化分析结果表明兔形目的INHBA基因与灵长目动物的亲缘性相近。黄兔INHBA基因cDNA序列编码424个氨基酸,整个蛋白包括1段20个氨基酸的信号肽和404个氨基酸的成熟肽,该蛋白还同时存在2个结构域,分别为TGFβ和TGFβ前体肽结构域。

人抑制素βA亚基单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备人抑制素βＡ（ＩＮＨβＡ） 亚基多肽单克隆抗体（单抗，ＭｃＡｂ）。方法和结果：用固相多态合成法合成了人抑制素βＡ亚基１ － ２８，８２ － １１４ 多肽片段。以粗提的猪卵泡液抑制素（ＩＮＨ） 和合成肽段纯品作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，经细胞融合与筛选，获得４ 株杂交瘤细胞株，ＥＬＩＳＡ检测腹水效价为１×１０－ ４ ～１ ×１０－ ５ ，抗体特异性试验表明与α亚基片段及其他多肽激素无交叉反应。表位分析表明３ 株ＭｃＡｂ（ 抗ＩＮＨβＡ（８２－ １１４）） 可能针对同一抗原位点。相对亲和力试验表明４Ｇ３＞ ３Ｂ７＞ ６Ｃ５ ＞２Ａ３。抗原竞争试验表明腹水中抗体能明显被人卵泡液和猪卵泡液中和， 而绝经期妇女血清不能中和抗体活性。

大熊猫及其近种活化素基因β_A亚基成熟肽序列的克隆分析及其在分类地位上的应用

借鉴互联网中已经克隆到的Activin基因 βA 亚基成熟肽序列 ,设计并合成 1对兼并引物 ,利用PCR技术从大熊猫、小熊猫、马来熊的基因组DNA中直接扩增目的基因片段 ,并分别克隆到大肠杆菌载体pBlueScript+ 当中 ,然后对培养产物进行序列测定。DNA序列分析表明 ,三种物种的Activin基因 βA 亚基成熟肽序列长度均为 35 9bp ,无内含子。基因片段编码一个含有 119个氨基酸残基的肽段。大熊猫、小熊猫、马来熊在该成熟肽核苷酸和氨基酸序列上表现出高度的同源性 ,其中核苷酸同源性为 93.9% ,氨基酸同源性高达 99%以上。此外 ,3种动物的核酸限制性酶切图谱也高度相似。与GenBank中收录的其他物种Activin基因 βA 亚基成熟肽序列相比较 ,显示此片段在处于不同进化程度的物种之间仍具有高度保守性。运用系统发育与进化树软件包PHILIP ,并结合克隆序列对大熊猫、小熊猫、马来熊进化与分类地位进行了探讨。采用不同的统计学分析方法 ,所得到的 3个物种系统发育进化树的拓扑结构完全一致。相比较而言 ,大熊猫与马来熊有着较近的亲缘关系 ,而小熊猫与上述两个物种的亲缘关系相对疏远。结果支持将大熊猫与马来熊归为熊科、而将小熊猫单列成科的学术观点。这是首次以生殖相关的核基因作为研究对象 。

鸭各级卵泡中抑制素α和抑制素/活化素β_A亚基信使RNA表达丰度的研究

采用非常灵敏的定量竞争 ＲＴ－ＰＣＲ技术对鸭各级卵泡中抑制素α和βＡ亚基的ｍＲＮＡ表达丰度作了研究，发现在各级卵泡中均有此两亚基ｍＲＮＡ的表达，大卵泡中的α亚基表达量要高于βＡ亚基。α亚基ｍＲＮＡ在小黄卵泡（ＳＹＦ）中表达量最高，以其ｍＲＮＡ的平均相对丰度为１．００，则Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４／５、ＬＷＦ（大白卵泡）中α亚基ｍＲＮＡ的平均相对含量分别为： ０.２６±０．０５、０．２８±０．０７、０．５７±０．１２、０．９８±０．０９、０．０２６±０．００６。βＡ亚基 ｍＲＮＡ在Ｆ１中表达量最高，以其ｍＲＮＡ的平均相对丰度为１．００，则 Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４／５、ＳＹＥ、ＬＷＦ中βＡ亚基ｍＲＮＡ的平均相对含量分别为：０．２１８±０．０９、０．１１１±０．０３、０．０５８±０．０１１、０．０５３±０．０１３、０．００５±０．００２。结果显示，随着卵泡的增大α亚基表达量降低， βＡ亚基却增加，说明在卵泡发育过程中， α和βＡ亚基的表达是独立调节的，另外，βＡ亚基在Ｆ１中的大量表达，说明Ｆ１可能是形成二聚体抑制素／活化素的主要场所。

林麝、马麝及梅花鹿活化素基因β_A亚基成熟肽序列的克隆和分析

活化素 (Activin)对睾丸和卵巢产生多重调节作用 ,对动物的繁育非常关键。本文参考已克隆的其它物种的活化素基因 βA 亚基成熟肽序列 ,设计一对简并引物 ,通过PCR方法从林麝 (Moschusberezovskii)、马麝 (Moschuschrysogaster)和梅花鹿 (Cervusnippon)的基因组DNA中直接扩增目的基因片段。将目的片段分别克隆到pMD1 8 T载体中 ,并进行序列测定。DNA序列测定及分析表明 ,林麝、马麝和梅花鹿的活化素基因 βA 亚基成熟肽序列长 3 45bp ,三物种核苷酸序列同源性在 98%以上 ,氨基酸序列同源性在99%以上 ,核酸限制性酶切图谱也高度相似。将它们与GenBank中已公布的其它物种的活化素序列进行比较 ,发现该片段在不同进化程度的物种间高度保守。这是首次从麝科动物中成功克隆与生殖相关的核基因 。

仙居鸡抑制素/活化素β_A亚基成熟区的cDNA克隆及序列分析

本研究根据发表的来航鸡抑制素 /活化素βA 亚基序列设计引物 ,运用RT PCR技术从仙居鸡卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素 /活化素βA 亚基成熟区序列 ,并进行了克隆和测序。结果显示 ,所测鸡成熟βA 亚基是由 116个氨基酸 (aa)残基组成的蛋白质 ,共有 9个半胱氨酸残基 ,与发表的鸡及哺乳类相应序列对比 ,其核苷酸序列的同源性分别为 99.2 %和 81%～ 85 .2 % ,其预测氨基酸序列的同源性分别为 10 0 %和 96 .6 %～ 97.4 % ,且所测鸡 βA 亚基成熟区半胱氨酸残基的数目和位置与发表的鸡和哺乳类相同 ,说明该亚基的序列及结构在不同物种间具高度保守性 。

巴美肉羊INHA和INHBA基因多态性与产羔数关系研究

为了研究INHA和INHBA这两个基因对巴美肉羊产羔数的影响,采用PCR-SSCP技术检测抑制素α亚基(α-inhibin,INHA)和βA亚基(βA-inhibin,INHBA)基因在巴美肉羊中的单核苷酸多态性。结果发现,引物1,4,6扩增片段有多态性,其余3对引物的扩增片段均不存在多态性。引物1,巴美肉羊有2种基因型AB型和AA型,平均产羔数AB型比AA型多0.17只(P<0.01)。引物4,巴美肉羊存在3种基因型(CC、DD和CD),巴美肉羊平均产羔数DD型比CC型多0.44只(P<0.01)。引物6,巴美肉羊有3种基因型(EE、FF和EF),EE型比EF型平均产羔数多0.21只(P<0.01),结果表明,抑制素α亚基(α-inhibin,INHA)和βA亚基(βA-inhibin,INHBA)基因是影响巴美肉羊产羔数的重要基因。

山羊抑制素βA基因多态性的分析

抑制素βA(inhibin-βA,INHβA)是性腺分泌的一种糖蛋白激素,它具有抑制垂体促卵泡素合成和分泌的作用,采用PCR-SSCP(聚合酶链式反应-单链构象多态性)技术分析了INHβA在黄淮山羊、长江三角洲白山羊和波尔山羊等3个山羊品种中的多态性,结果表明,引物1和引物3在黄淮山羊和长江三角洲白山羊中都存在多态性,引物1的基因型为AA、AB型,不存在BB型,引物3的基因型为CC、CD型,不存在DD型,但在波尔羊中,引物1和引物3均没有检测到多态性。测序结果表明,AB型与AA型相比在第110 bp处有一个G碱基的缺失,123 bp处有一处G→A的碱基突变,CC型和CD型相比在第72 bp处存在T→C的突变。