一种体外扩增人γδΤ细胞的新方法

目的:建立一种简单快速的体外扩增人外周血γδΤ细胞的方法,以便进一步对γδΤ细胞生物学特性和肿瘤免疫治疗的研究。方法:取健康人外周血100mL,分离单个核细胞,置于含100mL/L小牛血清,50mL/L人AB血清,异戊烯焦磷酸(2μg/L)和IL-2(100IU/mL)RPMI1640培养液中培养,进行细胞毒杀伤活性测定和流式细胞术分析。结果:细胞培养10d时γδΤ细胞从扩增前4·21%增加到70·35%,增殖倍数可达80倍,悬浮生长γδΤ细胞CD44表达为86·39%、贴壁生长γδΤ细胞为94·0%。效靶细胞比为40:1时,对K562细胞和SGC-7901胃腺癌细胞的杀伤活性分别为75%和61%。结论:用一种简单、快速和特异性的体外扩增人外周血中γδΤ细胞新方法,培养的γδΤ细胞具有较强的抗肿瘤活性。

TCR和CD3ε在αβ和γδΤ细胞上表达的比较研究——TCR/CD3复合物内2个TCR异二聚体结合3条CD3ε链的证据

关于TCR/CD3复合物的化学计量测定法的公认模式是每个复合物由1或2个TCR异二聚体与2个CD3ε相结合.它们主要建立在分解细胞膜复合物等生化研究的基础上.最近定量研究αβ和γδ淋巴细胞的CD3ε和TCR链的相关比例是在未变性条件下进行.定量流式细胞测定法(QFCM)研究表明αβ和γδPBL表达的CD3ε链分别为β-和δ-链的1.56和1.52倍.相应地,CD3ε分别与TCR-α,TCR-β,TCR-γ及TCR-δ的比值表现在三株多克隆细胞株和Jurkat细胞上均非常接近于l.50.这些结果清楚地表明αβ以及γδT细胞表达的CD3ε大约为每一种TCR链的1.50倍.这强烈地显示αβ和γδ的TCR/CD3复合物由2个TCR异二聚体与3个CD3ε链相结合(或这种结合比例的成倍增大).此外,本研究显示γδSPBL表达的TCR和CDε链1.90倍于αβPBL(-δ对一β).进一步发现,CD4^+αβPBL的TCR-β和CD3ε.表达较高,同时在CD8^+和CD8^-的γδPBL上均有TCR-δ和CD3ε表达.这些结果证明,CD8^+或CD8-γδPBL,CD4^+aβPBL和CDS8^+αβPBL表达的TCR/CD3复合物水平是依次减少的.

关于αβ和γδΤ细胞受体识别抗原性质的讨论

自从第8届国际免疫学会在布达佩斯召开以来,一些关于T细胞识别的重要争议问题已经得到或至少是部分得到答案.但遗留下来的其它问题希望将在第9届大会上提出来讨论.

流式细胞术检测γδΤ细胞内白细胞介素-2的临床应用价值

目的建立一种人外周血γδΤ细胞细胞内白细胞介素-2(IL-2)的检测方法。方法分离获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)刺激PBMC,获取较高比例的γδΤ细胞。用佛波醇酯+离子霉素(PMA+IM)刺激PBMC和γδΤ细胞,用蛋白转运抑制剂(Brefeldin A,BFA)阻断细胞内因子的分泌,用皂角素破膜,流式细胞术检测CD3+T细胞内CD69阳性率,以确定最佳的破膜时间,用流式细胞术检测γδΤ细胞内的IL-2的表达。不同组间CD3+T细胞内CD69阳性率及细胞内IL-2的阳性率比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用最小显著性(LSD)法检验.。结果刺激时间不同,CD3+T细胞胞内CD69的阳性率表达不同,皂角素破膜时间为15 min时,CD3+T细胞胞内CD69的阳性率最高,达(87.82±2.28)%,与处理5 min[CD69的阳性率(66.86±1.99)%]和25 min[CD69的阳性率(81.73±2.51)%]比较,差异有统计学意义(F=112.81,P<0.05);不同处理组γδΤ细胞内IL-2表达不同,γδΤ细胞受PMA和IM刺激并有BFA存在时表达最高,达(50.65±6.25)%,与γδΤ细胞组(0.55±0.07)%、γδΤ细胞+PMA+IM组(0.91±0.12)%和PBMC+PMA+IM+BFA组(0.21±0.03)%比较,差异有统计学意义(F=321.07,P<0.05)。结论流式细胞术是一种检测γδΤ细胞内IL-2的较好方法,为γδΤ细胞内其他分子的检测分析奠定了方法学基础。

γδΤ细胞在肿瘤免疫治疗中的作用

γδΤ细胞是介于获得性免疫与自然免疫之间的特殊免疫细胞类型,主要位于皮肤、小肠等黏膜及皮下组织和外周血中,具有抗原特异性识别功能而无MHC限制性。γδΤ细胞是一个数量较少的亚群,但在机体的抗感染、抗肿瘤、免疫监视、免疫调节和维持免疫耐受等方面起着重要作用。近年来诸多研究发现其具有广泛的抗肿瘤免疫活性,因此逐渐成为肿瘤免疫治疗基础研究和临床应用的新方向,本文就γδΤ细胞的生物学特性及其在肿瘤治疗中的作用进行了综述。