ε-AChR和γ-AChR在神经肌肉疾病中的表达变化

烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)分布于神经肌肉接头突触后膜上,分为ε–AChR和γ–AChR两种亚型。周围神经损伤和重症肌无力等神经肌肉疾病时,这两种亚型存在着亚基转换。它们在突触后膜上的表达转换可用作评价神经肌肉功能疾病恢复的指标。

肌肉LIM蛋白增强生肌素对AChRγ启动子的反式激活作用

采用RT PCR技术克隆了大鼠肌肉LIM蛋白 (MLP) 6 40bp的全长cDNA序列 .以此cDNA为探针进行的Northern印迹表明 ,MLP于C2C12细胞在分化的第 3d至第 5d表达 .将MLPcDNA亚克隆至pcDNA3,构建真核表达质粒pcDNA3 MLP ,同时构建AChRγ启动子序列 (96 0bp)调控的荧光素酶报告基因真核表达质粒pGL3 γ .C2C12细胞转染及荧光素酶活性分析表明 ,复合转染pcD NA3 MLP和pGL3 γ的分化肌细胞表达的荧光素酶活性约为对照的 4倍 ;而在 3T3或未分化肌细胞复合转染pcDNA3 MLP和pGL3 γ均未检出报告基因表达 ,说明MLP可促进生肌素对AChRγ亚基基因启动子的反式激活作用 .

鸡发育过程肌组织核提抽物结合活性与AChRγ亚基基因持续表达的关系

烟碱样乙酰胆碱受体 ( n ACh R)是由 4种亚基组成的五聚体 .哺乳类动物出生后γ亚基由ε亚基取代 ,迄今为止鸡 n ACh Rγ基因是否存在上述置换规律尚无定论 .为探索发育过程鸡骨骼肌n ACh R基因表达是否存在γ/ε亚基的置换及其机制 ,采用 RT- PCR技术和凝胶阻滞试验检测了鸡胚发育 9d至出生后 6周小鸡 γ基因表达的动力学及骨骼肌核抽提物的 DNA结合活性 .RT-PCR检测结果显示 ,在鸡胚发育 9d至出生后 6周的雏鸡骨骼肌组织均检出有 γ亚基 m RNA转录 .提示与哺乳类不同 ,出生前后鸡骨骼肌组织 ACh Rγ亚基基因持续表达 ,不存在 γ/ε亚基的置换表达规律 .以 γ基因 - 2 60 /- 2 4 0 (含 E盒与 M- CAT盒重叠序列 )和 - 2 39/- 50 (含 M- CAT盒及 GC富含区 )片段为探针 ,分别与鸡胚发育 9d至出生后 2周小鸡骨骼肌的核抽提物进行凝胶阻滞试验 .在发育各阶段的骨骼肌核抽提物中均有识别 - 2 39/- 50片段的结合活性存在 ,但在出生后 2周小鸡骨骼肌的核抽提物中未检出 - 2 60 /- 2 4 0结合活性 .结果提示 ,在出生后第 1 4d的肌核抽提物中存在的、识别并结合 - 2 39/- 50片段的活性物质与鸡 ACh Rγ基因在出生后持续表达有关 .

升陷汤对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠免疫机制研究

目的:探讨升陷汤治疗实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis,EAMG)大鼠的免疫机制。方法:采用人工合成鼠源乙酰胆碱受体(acetylcholinergic receptor,ACh R)α亚基97-116肽段免疫Lewis大鼠制备EAMG模型,经模型评估确定建模成功后将大鼠随机分为佐剂对照组,模型对照组,西药对照组(强的松),升陷汤低、中、高剂量组。给药1个月后检测各组大鼠肌电图,血清中乙酰胆碱抗体(ACh R-Ab)滴度和IFN-γ(Interferon,IFN)含量,及外周血中淋巴细胞亚型CD_4^+、CD_8^+细胞及CD_4^+/CD_8^+的比例。结果:与佐剂对照组相比,造模组AChR-Ab、IFN-γ均显著上升(P<0.05);与模型对照组相比,给药组的AChR-Ab、IFN-γ含量都显著下降(P<0.05)。与模型对照组相比:升陷汤低、中剂量组CD_4^+/CD_8^+显著下降(P<0.01);西药对照组CD_4^+、CD_8^+、CD_4^+/CD_8^+显著下降(P<0.01)。结论:升陷汤可能通过升高CD_4^+淋巴细胞含量,降低CD_4^+/CD_8^+的比例,从而降低IFN-γ含量,进而抑制ACh Rab的合成或促进其降解,起到治疗EAMG大鼠的作用。

NK1.1^+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力疾病发病中的免疫调节作用

目的:探讨NK1.1+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)疾病发病中的作用以及其调节机制。方法:腹腔注射抗小鼠NK1.1单克隆抗体(mAb)清除C57BL/6(B6)小鼠体内的NK1.1+细胞,建立NK1.1+细胞缺陷小鼠模型;用AChR+CFA免疫小鼠诱发EAMG,通过Lennon等的肌无力评分标准分析各组小鼠之间EAMG的发病情况和病情严重程度;应用ELISA法检测单核细胞(MNC)上清液中IFN-γ、IL-4的分泌和表达;应用放射免疫测定法检测血清中AChRIgG含量;用抗IFN-γmAb中和小鼠体内IFN-γ,观察发病情况及血清中AChRIgG的含量。结果:NK1.1+细胞缺陷的小鼠同正常免疫组小鼠相比,发病率和病情严重程度均明显降低(发病率:36%vs86%,P<0.01);免疫后NK1.1+细胞缺陷组和正常免疫组小鼠相比,发病率和病情严重程度无明显统计差异;NK1.1+细胞缺陷降低IFN-γ的表达,但是IL-4的分泌和表达无统计学意义;NK1.1+细胞缺失降低AChR特异性抗体的产生;中和体内IFN-γ后,EAMG的发病率和病情严重程度均减轻,并且AChR特异性抗体减少。结论:NK1.1+细胞在EAMG发病初期发挥重要作用。在EAMG发病中,NK1.1+细胞可以使AChR特异性T细胞产生IFN-γ,增加AChR特异性抗体产生,从而加重EAMG的发病。

Depolarization-induced PKC activities suppress myogenin-driven AChR γ gene promoter activity

NICOTINIC acetylcholine receptor （AChR） is a pentameric complex （α2βγ/εδ）, which is com-posed of four different subunits; its expression is regulated by neurally evoked electrical activi-ty. Before innervation in skeletal muscle during embryonic stage, AChR is expressed on thefiber surface; after synaptic formation, the expression of AChR is restricted to the motor end-plate. Denervation of the neonate or blockage of the electrical activity by sodium channel in-

针药结合治疗眼肌型重症肌无力:随机对照试验

目的:比较针药结合治疗与单纯西药治疗眼肌型重症肌无力(OMG)的临床疗效,并探讨其可能作用机制。方法:将60例OMG患者随机分为针药组(30例,脱落1例)和西药组(30例,脱落2例)。西药组予口服溴吡斯的明片与醋酸泼尼松片治疗;针药组在西药组治疗基础上予“通督调气”法针刺,穴取百会、风府、合谷、足三里等,每日1次,每周6 d,两组均治疗8周。观察两组患者治疗前后OMG临床绝对评分,采用单纤维肌电图(SFEMG)检测患者眼轮匝肌电生理指标[平均颤抖(jitter)值、jitter>55μs百分比和阻滞百分比],ELISA法检测患者血清抗乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)、γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平。结果:治疗后,两组患者OMG临床绝对评分、平均jitter值、jitter>55μs百分比、阻滞百分比及血清AChR-Ab、IFN-γ、IL-4水平均低于治疗前(P<0.05),且以上指标针药组均低于西药组(P<0.05)。结论:针药结合治疗可有效改善眼肌型重症肌无力患者上睑下垂、上睑疲劳、眼球运动障碍及神经肌肉接头损害,疗效优于单纯西药治疗,其机制可能与下调血清AChR-Ab、IFN-γ、IL-4水平,促进眼轮匝肌功能恢复有关。