端粒酶、γ-干扰素、腺苷酸脱氨酶及结核感染T细胞斑点试验在诊断结核性和恶性胸腔积液中的作用分析

目的 评价端粒酶、γ-干扰素(IFN-γ)、腺苷酸脱氨酶(ADA)及T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测在诊断结核性和恶性胸腔积液中的价值。方法 纳入40例早期结核性胸膜炎患者(结核组)和40例恶性胸腔积液患者(肿瘤组),分别在治疗前抽取患者胸腔积液及空腹血液,应用酶联免疫吸附分析法检测端粒酶的含量和IFN-γ的浓度,应用比色分析法检测ADA的活性,采用Elispot斑点计数检测T-SPOT.TB阳性率。结果 结核组和肿瘤组的端粒酶含量分别为(1.46±0.73)×10~(-3) nmol/L和(3.34±1.72)×10~(-3) nmol/L,结核组端粒酶含量低于肿瘤组(P<0.01);结核组和肿瘤组的IFN-γ含量分别为(137.44±38.93) U/L和(27.94±8.46) U/L,ADA含量分别为(68.42±9.58) U/L和(15.39±4.43) U/L,2组患者IFN-γ含量和ADA含量比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结核组IFN-γ浓度、ADA活性及T-SPOT.TB阳性率均高于肿瘤组(P<0.01)。联合应用端粒酶、IFN-γ、ADA及T-SPOT.TB 4个诊断指标的诊断试验鉴别诊断结核性和恶性胸腔积液的敏感度为0.974,特异度为0.974。结论 联合应用端粒酶、IFN-γ、ADA及T-SPOT.TB 4个诊断指标的诊断试验在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的鉴别诊断中具有重要意义。

γ-干扰素试验在结核病诊断中的临床应用价值

目的分析CLIA检测γ-干扰素试验诊断结核病的临床应用价值。方法选取2023年5月-2023年9月在本院接受检查的疑似结核病患者1616例,以临床最终诊断结果为金标准,判断全自动化学发光法检测γ-干扰素试验在结核病诊断中的诊断效能。结果临床最终诊断结果显示,阳性患者916例,阴性患者700例。γ-干扰素试验结果显示,阳性患者908例,阴性患者708例。CLIA检验γ-干扰素试验在肺外结核中的阳性检出率较高,但与临床最终诊断结果比较差异有统计学意义(P<0.05);在结核病、肺结核、呼吸道疾病、肺部炎症疾病的阳性检出率与临床最终诊断结果比较差异无统计学意义(P>0.05);在结核病中的敏感度、特异度、准确度与临床最终诊断结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果采用CLIA检测γ-干扰素试验可对结核病进行诊断,可明确患者为结核病或非结核疾病,并且在结核病的诊断中具有较高的敏感度、特异性。

激光联合重组人干扰素α-1b治疗脂溢性角化病的效果及安全性

目的探讨激光联合重组人干扰素α-1b治疗脂溢性角化病的效果及安全性。方法选取2020年8月—2023年7月福建医科大学附属泉州第一医院收治的96例脂溢性角化病患者为研究对象,按照电脑随机法分为干扰素组和激光结合组,各48例。干扰素组患者予重组人干扰素α-1b治疗,激光结合组患者在干扰素组基础上联合激光治疗,2组患者均持续治疗2个月。比较2组临床疗效,治疗前及治疗2个月后血清干扰素-γ(IFN-γ)水平、皮肤生理指标(经皮失水率、皮肤含水率)、皮肤病生活质量量表评分及不良反应。结果激光结合组治疗总有效率高于干扰素组(97.92%vs.81.25%,χ^(2)=7.144,P=0.008)。治疗2个月后,2组血清IFN-γ水平高于治疗前,且激光结合组高于干扰素组(P<0.01);2组经皮失水率低于治疗前,皮肤含水率高于治疗前,且激光结合组降低/升高幅度大于干扰素组(P<0.01);2组症状与躯体感受、心理感受、日常活动、衣物选择评分低于治疗前,且激光结合组低于干扰素组(P<0.01)。激光结合组与干扰素组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(6.25%vs.14.58%,χ^(2)=1.786,P=0.181)。结论激光联合重组人干扰素α-1b治疗脂溢性角化病可增强疗效,有效提高机体免疫功能,改善皮肤状态,降低疾病对生活质量的影响,且安全性较高。

慢病毒介导的稳定表达鸭干扰素-γ细胞株的构建

干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一。为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了duIFN-γ基因,插入到慢病毒表达载体plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-IFN与辅助质粒共转染包装细胞293T,筛选出了携带duIFN-γ基因的重组慢病毒rlenti-IFN,将该病毒感染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞,利用有限稀释法和抗性加压筛选法,筛选出了30个具有嘌呤霉素抗性基因的单克隆细胞系。利用RT-qPCR荧光定量法对这些单克隆细胞的duIFN-γ mRNA水平进行检测,筛选出了duIFN-γ mRNA水平最高的1个单克隆细胞,对其进行扩大培养,获得了1株稳定细胞系。Western blot检测结果表明,duIFN-γ稳定表达于该细胞系中。本研究获得了1株稳定表达duIFN-γ蛋白的细胞系,该研究为开展duIFN-γ生物学功能研究、建立duIFN-γ检测方法及生产廉价鸭(禽)用干扰素奠定了基础。

重组人干扰素α-1b治疗小儿轮状病毒感染性肠炎的效果及安全性

目的:观察重组人干扰素α-1b治疗小儿轮状病毒感染性肠炎的效果及安全性。方法:选取2022年6月—2023年6月枝江市人民医院收治的186例小儿轮状病毒感染性肠炎,依据随机数表法分为对照组和观察组,各93例。对照组采用临床常规治疗及布拉氏酵母菌散,观察组在对照组基础上采用重组人干扰素α-1b,持续治疗3 d。比较两组治疗3 d后临床疗效,临床症状缓解情况,治疗前、治疗3 d后的肠黏膜损伤指标、肠道菌群、免疫功能,以及研究期间安全性。结果:治疗3 d后,观察组总有效率高于对照组;观察组腹痛消失时间、止泻时间、热退时间早于对照组;治疗3 d后,两组乳杆菌、双歧杆菌和大肠埃希菌菌落数较治疗前均升高,观察组高于对照组,两组粪肠球菌菌落数较治疗前均降低,观察组低于对照组;治疗3 d后,两组血清晚期糖基化终末产物(AGEs)、内毒素(ET)、二胺氧化酶(DAO)水平与治疗前相比均降低,观察组低于对照组;治疗3 d后,两组外周血CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)与治疗前相比均升高,观察组高于对照组,外周血CD8^(+)较治疗前均降低,观察组低于对照组;研究期间观察组不良反应发生率低于对照组;上述各指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在小儿轮状病毒感染性肠炎的临床治疗中,应用重组人干扰素α-1b,能明显改善患儿的临床症状,改善肠道菌群,增强机体免疫力,缓解肠道黏膜损伤,安全性较高,且疗效显著。

脑脊液乳酸、白细胞介素-27及干扰素-γ联合检测在神经外科术后细菌性脑膜炎中的诊断价值

目的探讨脑脊液乳酸(LA)、白细胞介素-27(IL-27)及干扰素-γ(IFN-γ)联合检测对重症监护室(ICU)神经外科术后细菌性脑膜炎的诊断价值。方法选取ICU神经外科术后细菌性脑膜炎患者54例作为疾病组,另选取62例术后无细菌性脑膜炎患者作为对照组。采用全自动生化分析仪和酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑脊液LA、IL-27、IFN-γ表达水平;采用Logistic回归模型分析影响术后发生细菌性脑膜炎的相关因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析脑脊液LA、IL-27、IFN-γ对术后细菌性脑膜炎的诊断价值。结果疾病组葡萄糖水平低于对照组,白细胞计数、蛋白质水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。疾病组脑脊液LA、IL-27表达水平高于对照组,而脑脊液IFN-γ表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。Logistic回归分析显示,脑脊液LA、IL-27、IFN-γ为ICU神经外科术后患者发生细菌性脑膜炎的影响因素(P<0.05)。脑脊液LA、IL-27、IFN-γ联合诊断ICU神经外科术后细菌性脑膜炎的曲线下面积(AUC)为0.955,优于脑脊液LA(AUC=0.806,Z=4.029,P<0.001)、IL-27(AUC=0.858,Z=2.513,P=0.012)、IFN-γ(AUC=0.815,Z=3.680,P<0.001)单独诊断,联合诊断的灵敏度和特异度分别为87.04%、93.55%。结论ICU神经外科术后细菌性脑膜炎患者脑脊液LA、IL-27表达水平均显著升高,而脑脊液IFN-γ水平显著较低。相较于单独检测,3项指标联合检测对术后发生细菌性脑膜炎有更高的诊断价值。

重组人干扰素α-2b乳膏治疗小儿传染性软疣的临床效果

目的 探讨重组人干扰素α-2b乳膏治疗小儿传染性软疣的临床效果。方法 选取2022年3月至2023年3月在滨州市中心医院皮肤科就诊的84例传染性软疣患儿作为研究对象,按照奇偶分组法分为参照组(42例)与试验组(42例)。参照组采用夹疣治疗,试验组采用重组人干扰素α-2b乳膏治疗。比较两组治疗效果及复发情况。结果 试验组总有效率高于参照组,复发率低于参照组(P <0.05)。结论 重组人干扰素α-2b乳膏治疗小儿传染性软疣的临床效果较好,复发率较低,值得临床推广应用。

干扰素α-2b对真性红细胞增多症患者血栓再发事件风险的影响

目的:研究干扰素α-2b对真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)患者炎症因子及血栓再发事件风险的影响。方法:选取2017年1月—2021年5月淮南市朝阳医院内科确诊的82例PV患者纳入研究对象,以随机数字表法分为观察组(n=41)与对照组(n=41),对照组患者治疗前测定血液学指标,若血红蛋白(hemoglobin,Hb)>200 g/L,则行静脉放血治疗,300 mL/次,1~2次/周,同时给予阿司匹林,100 mg/次,1次/d;观察组在对照组基础上加用干扰素α-2b注射液皮下注射,300万U/次,3次/周。两组均连续治疗6个月。比较两组临床疗效及不良反应、再次动脉或静脉血栓发生率,治疗前后血液学指标(PLT、RBC、WBC、Hb)、凝血功能[部分活化凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、血浆凝血酶时间(thrombin time,TT)、纤维蛋白原(fibrinogen,Fbg)]、炎症因子[超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、IL-17、IL-21]及促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)水平。结果:观察组总有效率高于对照组(χ2=3.998,P<0.05);治疗后两组血液学指标降低,且观察组各指标低于对照组(P<0.05);两组治疗后APTT、PT、TT升高,Fbg降低,且两组差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后炎症因子水平降低,EPO升高,且两组差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率相当(P>0.05);观察组再次血栓发生率低于对照组(P<0.05)。结论:干扰素α-2b用于PV可有效改善临床症状、外周血象及凝血功能,提升疗效,拮抗炎症反应,降低PV患者血栓再发风险,有推广价值。

康复新液联合重组人干扰素α-2b治疗慢性宫颈炎的效果

目的分析康复新液联合重组人干扰素α-2b治疗慢性宫颈炎的效果。方法随机抽取平顶山第一人民医院2019年1月至2022年12月收治的800例慢性宫颈炎患者,采用摸红蓝球法分为联合组(400例)与单一组(400例)。单一组接受重组人干扰素α-2b,联合组在单一组基础上接受康复新液。对比两组疗效、临床症状缓解时间(阴道分泌物增多、外阴瘙痒、性交后出血)、宫颈修复时间、不良反应发生率、生活质量。结果联合组总有效率[96.75%(387/400)]较单一组[86.50%(346/400)]高(P<0.05)。与单一组比,联合组阴道分泌物增多、外阴瘙痒、性交后出血缓解时间及宫颈修复时间较短(P<0.05)。两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后与单一组比,联合组的患者生活质量评分较高(P<0.05)。结论采用康复新液、重组人干扰素α-2b联合治疗慢性宫颈炎,可改善临床症状,提高生活质量,临床效果和安全性确切。

干扰素-γ对黑色素瘤细胞的影响及作用机制实验研究

目的:探讨干扰素-γ(INF-γ)对黑色素瘤细胞的影响及作用机制。方法:选取人黑色素瘤细胞A375,分为对照组(空白未处理)、INF-γ低剂量组(加入INF-γ10μg/L)、中剂量组(加入INF-γ50μg/L)、高剂量组(加入INF-γ100μg/L)。采用CCK-8法检测A375细胞存活情况。采用流式细胞术检测A375细胞凋亡情况。采用Transwell实验检测A375细胞侵袭能力。采用细胞划痕实验检测A375细胞迁移能力。采用Western blot检测A375细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达。根据细胞分组,将BALB/c裸鼠也相应随机分为4组,每组8只,建立裸鼠皮下移植瘤模型。比较各组裸鼠不同时间皮下移植瘤体积。结果:与对照组比较,INF-γ低、中、高剂量组A375细胞存活率(24、48、72 h)、迁移率、细胞侵袭数、裸鼠皮下移植瘤体积(7、14、21、28 d)以及p-PI3K、p-AKT、mTOR蛋白表达水平依次降低,细胞凋亡率依次升高(均P<0.05)。结论:INF-γ可通过下调PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制黑色素瘤细胞侵袭、迁移以及裸鼠皮下成瘤速度,并诱导细胞凋亡。

聚乙二醇干扰素α-2b联合富马酸替诺福韦二吡呋酯片对乙型肝炎患者的治疗效果

目的探究乙型肝炎患者使用聚乙二醇干扰素α-2b、富马酸替诺福韦二吡呋酯片联合治疗的效果。方法选取2022年1—12月在莆田学院附属医院感染性疾病科治疗的乙型肝炎患者中200例为研究对象,随机分为对照组(100例,服用富马酸替诺福韦二吡呋酯片治疗)和观察组(100例,采用聚乙二醇干扰素α-2b联合富马酸替诺福韦二吡呋酯片治疗)。对比治疗前后两组肝功能、乙型肝炎病毒转阴率和炎症因子水平。结果检测两组肝功能状况,治疗后24周观察组天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、胆红素水平均低于对照组(均P<0.05)。治疗后6、12、18、24周观察组乙型肝炎病毒转阴率均高于对照组(均P<0.05)。治疗后24周,观察组白细胞介素-4、生长分化因子、干扰素诱导蛋白-10水平均低于对照组(均P<0.05)。结论乙型肝炎患者使用聚乙二醇干扰素α-2b、富马酸替诺福韦二吡呋酯片联合治疗,可以改善患者肝功能、提升乙型肝炎病毒转阴率,降低炎症因子水平,促进患者恢复。

聚乙二醇干扰素α-2b联合替诺福韦对乙型肝炎患者肝功能及安全性的影响

目的:探讨聚乙二醇干扰素α-2b联合替诺福韦对乙型肝炎患者肝功能及安全性的影响。方法:选取2018年10月—2020年8月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的96例乙型肝炎患者作为研究对象,采用乱数表法分为A组和B组,每组各48例。A组给予替诺福韦酯片治疗,B组在A组基础上加用聚乙二醇干扰素α-2b治疗。比较两组患者治疗前、后总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、白介素-4(IL-4)和白介素-2(IL-2)水平。比较两组患者乙型肝炎病毒(HBV)-DNA转阴率、乙型肝炎e抗原(HBeAg)转阴率、转换率和ALT复常率。统计两组患者治疗有效率和不良反应发生率。结果:治疗后,B组总胆红素(TBIL)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平均低于A组,两组患者白蛋白(ALB)均升高且B组升高幅度大于A组,差异有统计学意义(t=15.629、27.253、30.580、11.761,P<0.05);治疗后,两组患者酶联免疫吸附测定干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)均升高,且B组升高幅度大于A组,白介素-10(IL-10)和白介素-4(IL-4)均降低,且B组降低幅度大于A组,差异有统计学意义(t=20.777、7.614、24.624、1.609,P<0.05);B组HBV-DNA转阴率、ALT复常率、乙型肝炎e抗原(HBeAg)转阴率、HBeAg转换率均高于A组,差异有统计学意义(χ^(2)=4.381、4.800、4.019、4.909,P<0.05);B组治疗总有效率高于A组,差异有统计学意义(χ^(2)=4.360,P<0.05);两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.079,P>0.05)。结论:聚乙二醇干扰素α-2b联合替诺福韦可有效改善患者肝功能,调节免疫功能且安全性较高。

核苷(酸)类似物序贯联合干扰素α-2b治疗低水平乙型肝炎表面抗原慢性乙型病毒性肝炎的效果观察

目的观察核苷(酸)类似物(NAs)序贯联合干扰素α-2b(IFNα-2b)治疗低水平乙型肝炎表面抗原(HBsAg)慢性乙型病毒性肝炎(CHB)的效果,为临床提供参考。方法选取2016年1月至2021年12月东莞市长安医院收治的80例低水平HBsAg CHB患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,各40例。对照组患者单用NAs治疗,观察组患者在NAs治疗基础上序贯联合IFNα-2b治疗。比较两组患者HBsAg转阴情况、HBsAg水平、谷丙转氨酶(ALT)水平、血清乙型肝炎病毒脱氧核苷酸(HBV-DNA)水平,分析观察组患者不良反应发生情况。结果治疗12、24周,两组患者HBsAg转阴率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗48周,观察组患者HBsAg转阴率高于对照组(P<0.05)。治疗48周,观察组患者HBsAg水平均低于治疗前,且观察组低于对照组(均P<0.05)。两组患者血清ALT水平无时间、组间、交互效应差异(均P>0.05)。两组患者血清HBV-DNA水平无时间、组间、交互效应差异(均P>0.05)。观察组部分患者发生流感样症状、食欲下降、乏力、白细胞计数降低、血小板减少等不良反应,但均能耐受,无严重不良反应发生。结论NAs序贯联合IFNα-2b治疗低水平HBsAg CHB患者能提高HBsAg转阴率,降低HBsAg水平,安全性良好,但对血清ALT水平、HBV-DNA水平影响不明显。

恩替卡韦联合聚乙二醇干扰素-α2b治疗代偿期乙型肝炎肝硬化患者疗效研究

目的探讨应用恩替卡韦(ETV)联合聚乙二醇干扰素-α2b(Peg-IFN-α2b)治疗乙型肝炎肝硬化患者的近期疗效。方法2019年3月~2021年3月安徽医科大学附属巢湖医院诊治的代偿期乙型肝炎肝硬化患者78例,被随机分为对照组40例和观察组38例,分别给予ETV或ETV联合Peg-IFN-α2b治疗24 w,然后两组均继续接受ETV治疗,随访至48 w。常规检测肝功能指标、血清肝纤维化指标、血清HBV标志物定量和HBV DNA载量。结果在随访24 w末,观察组血清白蛋白水平为(45.7±3.2)g/L,显著高于对照组【(38.5±4.3)g/L,P<0.05】;观察组血清IV-C、HA、PⅢP和LN水平分别为(154.3±11.7)μg/L、(130.9±17.5)μg/L、(110.6±16.2)μg/L和(152.7±14.3)μg/L,均显著低于对照组【分别为(200.7±12.4)μg/L、(161.8±18.7)μg/L、(157.4±17.3)μg/L和(200.9±16.3)μg/L,P<0.05】;观察组血清HBsAg水平为1363.8(623.1,2767.6)IU/ml,显著低于对照组【2119.6(1144.9,5094.3)IU/ml,P<0.05】,而血清HBsAg阴转率为15.8%,显著高于对照组的0.0%(P<0.05)。结论联合应用ETV和Peg-IFN-α2b治疗代偿期乙型肝炎肝硬化患者可改善血清肝纤维化指标,提高血清HBsAg阴转率,可能有助于病情恢复。

抗γ-干扰素自身抗体阳性耐多药结核病并发马尔尼菲等多重感染一例并文献复习

目的: 报告1例抗γ-干扰素自身抗体阳性导致的耐多药结核病并发马尔尼菲等多重感染患者的诊治过程,并结合文献分析该病的临床特征、实验室检查、治疗及预后。方法: 回顾性分析2023年8月2日首都医科大学附属北京胸科医院收治的1例抗γ-干扰素自身抗体阳性导致的耐多药结核病并发马尔尼菲等多重感染患者的相关临床资料。检索截止时间2024年5月31日,分别从PubMed数据库中以“Anti-interferon-γ autoantibodies、Multidrug-resistant tuberculosis”同时为检索词,从万方数据库、中国知网以“抗γ-干扰素自身抗体、耐多药结核病”同时为检索词均未检索到相关文献。而以“抗γ-干扰素自身抗体、Anti-interferon-γ autoantibodies”分别为中英文关键词在万方数据库、中国知网和PubMed数据库进行检索,共检出抗γ-干扰素自身抗体并发药物敏感结核病2篇,检出抗γ-干扰素自身抗体并发机会性感染61篇,检出抗γ-干扰素自身抗体相关治疗17篇。总结该例患者特征并进行相关文献复习。结果: 该患者经过免疫评估,发现细胞免疫异常、基因突变,因药物不良反应和患者身体一般情况较差,错过最佳治疗时机,未达到理想效果。结合文献研究,65例并发两种及以上机会性感染,50例存在皮肤损害,而抗γ-干扰素自身抗体并发耐多药结核病患者既往无相关文献报道。文献报道中抗γ-干扰素自身抗体阳性的获得性免疫缺陷综合征患者中,机会性感染病原中马尔尼菲篮状菌病71例,非结核分枝杆菌病31例,结核病2例。其中,65例患者并发两种及以上机会性感染,50例患者存在皮肤损害。结论: 抗γ-干扰素自身抗体阳性患者可能合并多重感染,治疗效果差,尽早应用新型免疫制剂联合相关病原体治疗可能获得更好的预后。

鸡γ-干扰素与补体受体2蛋白相互作用的研究

【目的】研究鸡γ-干扰素(chicken interferonγ,chIFN-γ)与鸡补体受体2(chicken complement receptor 2,chCR2)蛋白的相互作用,为研究chIFN-γ和chCR2新功能奠定基础。【方法】通过同源重组方法构建chIFN-γ相关表达质粒,利用免疫共沉淀、激光共聚焦和表面等离子共振技术鉴定chIFN-γ与chCR2蛋白的相互作用,并通过分子对接技术模拟chIFN-γ与chCR2蛋白的相互作用模式。【结果】成功构建了pCMV-Myc-chIFN-γ表达质粒。将pCMV-Myc-chIFN-γ和pCMV-HA-chCR2-ΔTM质粒共转染HEK-293FT细胞,结果表明chIFN-γ蛋白可以与chCR2蛋白进行相互作用;将pCMV-Myc-chIFN-γ和pCMV-HA-chCR2-ΔTM质粒共转染DF-1细胞,结果表明chIFN-γ蛋白与chCR2蛋白可以在DF-1细胞中进行共定位。表面等离子共振试验结果显示chIFN-γ与chCR2蛋白之间的平衡解离常数(KD)值为0.362μmol/L,二者之间有较高的亲和力。分子对接试验结果显示,chIFN-γ与chCR2蛋白之间的相互作用模式为Asp23-His150间形成1组盐桥作用,Asn37-Ser143、Glu57-Gly179和Ile93-Tyr184间形成3组氢键作用。【结论】本研究结果证明了chIFN-γ与chCR2蛋白可以进行相互作用,且二者之间的作用模式为1组盐桥和3组氢键作用。

基于γ-干扰素释放试验的麻风分枝杆菌感染筛查诊断

目的:探讨γ-干扰素释放试验(IGRA)在麻风分枝杆菌感染诊断中的应用价值。方法:在麻风患者、健康人群的PBMCs中进行IGRA检测。麻风患者进一步按多菌型(MB)和少菌型(PB)展开研究,使用I-SPOT-TB试剂盒(酶联免疫斑点法)检测释放IFN-γ的效应T细胞频数。比较分析MB和PB患者IGRA检测的阳性率,结合qPCR结果对PB患者进行讨论分析。结果:以患者的病理诊断为确诊依据,纳入29例麻风患者,20名健康人群作为对照。用rESAT6-CFP10刺激后,MB和PB患者IFN-γ的激活程度和IGRA阳性率均无统计学差异。37.5%的PB患者qPCR阴性,IGRA阳性;12.5%的PB患者IGRA阴性,qPCR阳性;IGRA阳性或qPCR阳性的PB患者达75%。结论:IGRA阳性提示分枝杆菌感染的可能,IGRA联合qPCR可作为早期筛查麻风的辅助检测方法。

鸡γ-干扰素的原核表达及其单克隆抗体制备与鉴定

【目的】通过原核表达系统表达鸡γ-干扰素(chicken interferon-gamma,ChIFN-γ),并制备其单克隆抗体,为建立检测天然ChIFN-γ的免疫学方法提供试验材料。【方法】将密码子优化的ChIFN-γ基因克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组质粒pET21a-ChIFN-γ;重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,利用IPTG诱导表达重组蛋白;用该纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫合格的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合;用建立的ELISA方法筛选分泌针对ChIFN-γ蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,并制备腹水,Protein A/G纯化腹水获得特异性抗体;对单克隆抗体的类和亚类进行鉴定;Western blotting和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测单克隆抗体的反应性、亲和力和特异性交叉反应;用辣根过氧化物酶标记单克隆抗体,用两两配对的方法进行抗体配对。【结果】成功制备可溶性重组ChIFN-γ蛋白;Western blotting结果显示,ChIFN-γ与相应抗体结合呈现特异性条带(16 ku);获得7株针对ChIFN-γ的特异性杂交瘤细胞株:3E8、5F8、2G12、5A10、3D8、3B5、3G2。Western blotting和IFA结果显示,7株单克隆抗体反应性良好,均能特异性识别真核表达的ChIFN-γ;单克隆抗体的类和亚类鉴定结果显示,3E8、5F8、3D8、3B5和2G12重链均为IgG1,5A10重链为IgG2a,3G2重链为IgM,7株单克隆抗体的轻链均为Kappa型;所获得的7株单克隆抗体解离常数(dissociation constant,Kd)在1.04~58.33 nmol/L之间,为高亲和力抗体,并获得5组配对抗体。【结论】本研究成功制备了ChIFN-γ蛋白及其单克隆抗体,为进一步开展ChIFN-γ在禽类免疫学、病毒学及疫苗效果评价等相关研究奠定基础。

亚低温干预通过改善线粒体功能抑制干扰素-α2b诱导的人心肌细胞AC16凋亡

目的:分析亚低温在Ⅰ型干扰素(干扰素-α2b)诱导的人心肌细胞AC16凋亡过程中的作用及分子机制。方法:不同浓度的干扰素-α2b在不同时间点刺激人心肌细胞AC16,CCK-8检测心肌细胞增殖;流式细胞仪检测干扰素-α2b刺激心肌细胞后常温、亚低温对细胞的影响;线粒体Mito-Tracker绿色荧光探针染色激光共聚焦成像观察线粒体形态的变化;流式细胞仪检测不同干预条件下线粒体膜电位变化情况;通过线粒体Mito-Tracker绿色荧光探针染色激光共聚焦成像评估线粒体动力相关蛋白1(Drp1)与线粒体的共定位情况及不同干预条件对线粒体的影响;使用蛋白免疫印迹法检测不同干预条件下,磷酸化Drp1 Ser616、Drp1、核酶多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1(PARP1)、剪切型PARP1(cleaved-PARP1)蛋白表达变化。结果:CCK-8及流式细胞仪检测发现干扰素-α2b抑制AC16细胞增殖,并可诱导AC16细胞凋亡,亚低温干预发挥心肌保护作用;不同干预条件下,AC16细胞线粒体损伤程度不一,表现为亚低温干预细胞具有较好的线粒体形态和更高的线粒体膜电位;Mito-Tracker绿色荧光探针检测发现心肌细胞损伤时Drp1从胞浆转移至线粒体中参与线粒体分裂,且亚低温干预发挥抑制作用;蛋白免疫印迹法检测发现亚低温干预后磷酸化Drp1 Ser616/Drp1和cleaved-PARP1/PARP1显著降低,且线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)预处理可部分逆转上述现象。结论:亚低温干预通过改善线粒体功能抑制Ⅰ型干扰素-α2b诱导的人心肌细胞AC16凋亡。

α-干扰素联合索拉菲尼对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对STAT3通路的影响

目的:探讨α-干扰素(IFN-α)联合索拉菲尼对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对转录激活因子3(STAT3)的影响。方法:选取人肝癌细胞株HepG2,分为空白对照组(未经任何处理的HL-60细胞)、IFN-α组(加入4000 U/ml IFN-α)、索拉菲尼组(加入2μmol/L索拉菲尼)、IFN-α+索拉菲尼组(加入4000 U/ml和2μmol/L索拉菲尼),取经药物处理后的各组细胞混悬液,继续培养24、48、72 h,采用CCK8检测HepG2细胞存活率,MTT法检测HepG2细胞增殖抑制率,行蛋白质免疫印迹(Western blot)、实时定量PCR(qRT-PCR)测HepG2细胞中STAT3、Survivin mRNA和蛋白表达,并进行细胞形态学观察。结果:空白对照组细胞形态完整,轮廓清晰,呈梭形,贴壁状态良好,IFN-α组、索拉菲尼组部分胞浆肿胀、胞膜破裂、细胞形态、胞膜界限模糊不清,IFN-α+索拉菲尼组,细胞核缩小、染色质固缩、部分细胞碎裂、死亡。IFN-α+索拉菲尼组细胞增殖抑制率高于IFN-α组、索拉菲尼组(均P<0.05)。与空白对照组、IFN-α组、索拉菲尼组比较,IFN-α+索拉菲尼组细胞G 1期细胞器增多,S、G 2期细胞减少(均P<0.05)。与空白对照组比较,IFN-α组、索拉菲尼组、IFN-α+索拉菲尼组细胞中STAT3、Survivin mRNA和蛋白表达均降低,但IFN-α组和索拉菲尼组比较无统计学差异(均P<0.05),IFN-α+索拉菲尼组低于其余三组(均P<0.05)。结论:α-干扰素联合索拉菲尼可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能是通过调节STAT3通路发挥作用。