诊断抗原的纯化在牛γ-干扰素ELISA法中的应用

比较皮内变态反应(TST)、抗酸染色、牛结核ELISA(PPD-ELISA)和γ-干扰素ELISA法(IFN-γ-ELISA)对牛结核的检测结果,并通过比较牛PPD、禽PPD、亲和层析牛PPD(牛PPD’)的IFN-γ-ELISA检测结果,探索诊断抗原的纯化在牛IFN-γ-ELISA法中的应用.结果表明,与抗酸染色相比,IFN-γ-ELISA的敏感性、特异性和符合率都比较高,分别为83.33%(5/6),98.14%(53/54),98.33%(58/60);牛PPD、禽PPD、牛PPD’3种特异性抗原刺激产生IFN-γ释放反应的结果表明,1例抗酸染色阳性的牛,未经亲和层析处理牛PPD的IFN-γ-ELISA检测OD值偏高,判为牛结核阳性,亲和层析纯化牛PPD的IFN-γ-ELISA检测OD值较低,判为牛结核阴性,表明亲和层析处理能排除环境分支杆菌对试验的干扰,IFN-γ-ELISA法有望替代TST法在中国推广使用。

γ-干扰素ELISA法检测江西省宜春市肉牛场结核病流行情况

江西省宜春市肉牛规模化养殖场发展迅速,肉牛结核病一旦蔓延将造成巨大经济损失。为掌握宜春市某规模化肉牛养殖场结核病的感染情况,采用γ-干扰素ELISA检测方法对该养殖场的300余头肉牛进行随机抽检。结果表明,随机抽取的30头肉牛样品的阳性检出率为3.33%。其中,所调查的2个年龄段的肉牛群中,以12月龄以上的肉牛群阳性检出率最高,为6.67%。在春、夏两季节调查的牛群中,春季阳性检出率最高,为6.67%。数据表明,该牛场结核病的免疫效果较差,须加强防控措施。

皮试法与γ-干扰素ELISA法在奶牛结核病检疫中的对比试验

为制定奶牛结核病净化方案提供参考,通过颈部皮内变态反应(SICT)检测上海某奶牛场的483头奶牛,然后用γ-干扰素ELISA方法检测皮试法阳性牛及与阳性牛密切接触牛共50头。结果发现:颈部皮内变态反应与γ-干扰素ELISA的阳性符合率100%;在变态反应阴性牛中,仍然检出了部分ELISA阳性牛。我们考虑在高风险牛场增加皮内变态反应试验频率,再随之实施抗体检测,会更有利于结核牛场的净化与防制。

基于荧光免疫层析法的γ-干扰素释放试验对活动性肺结核的诊断价值

目的 评价荧光免疫层析法(IGRA)的γ-干扰素释放试验对活动性肺结核的诊断价值。方法 回顾性分析2023年1~6月浙江金华广福肿瘤医院疑似或待排肺结核患者758例,均进行IGRA检测。根据最终诊断将患者分为活动性肺结核病组268例和非结核病组490例,探讨IGRA对话动性肺结核的诊断效能。结果 IGRA检测活动性肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为86.57%、83.06%、73.65%、91.87%。ROC曲线分析得出最佳诊断界值为0.353IU/mL,其检测敏感度及特异度分别为86.57%(95%CI:81.96-90.14)、82.86%(95%CI:79.27-85.94)。结论 IGRA的γ-干扰素释放试验对辅助诊断活动性肺结核具有较好的敏感度和阴性预测值,该检测产品操作简单、报告时间短,非常适用于结核感染的筛查和活动性肺结核的快速辅助诊断。

γ-干扰素试验在结核病诊断中的临床应用价值

目的分析CLIA检测γ-干扰素试验诊断结核病的临床应用价值。方法选取2023年5月-2023年9月在本院接受检查的疑似结核病患者1616例,以临床最终诊断结果为金标准,判断全自动化学发光法检测γ-干扰素试验在结核病诊断中的诊断效能。结果临床最终诊断结果显示,阳性患者916例,阴性患者700例。γ-干扰素试验结果显示,阳性患者908例,阴性患者708例。CLIA检验γ-干扰素试验在肺外结核中的阳性检出率较高,但与临床最终诊断结果比较差异有统计学意义(P<0.05);在结核病、肺结核、呼吸道疾病、肺部炎症疾病的阳性检出率与临床最终诊断结果比较差异无统计学意义(P>0.05);在结核病中的敏感度、特异度、准确度与临床最终诊断结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果采用CLIA检测γ-干扰素试验可对结核病进行诊断,可明确患者为结核病或非结核疾病,并且在结核病的诊断中具有较高的敏感度、特异性。

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用

以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL(30.5 pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。

γ-干扰素ELISA检测方法在广西牛结核病流行病学调查中的应用

【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况，为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查，共检疫5478头奶牛和1580头奶水牛。【结果】2008～2011年从广西南宁、柳州、北海、钦州、桂林等市累积检测出皮内变态反应阳性奶牛63头、水牛17头，阳性检出率分别为1.15％和1.08％，总体上广西奶牛及水牛结核病阳性率呈现逐年降低的趋势。通过采用自制水γ－干扰素EusA检测试剂盒和Bovigam牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒对牛结核病进行检测，发现γ-干扰素ELISA检测的牛结核病阳性率低于皮内变态反应，且准确度高。【结论】对牛群进行结核病检测时，先以变态反应检疫牛群，再结合γ-干扰素ELISA检测进行综合判断，更有利于牛结核病的检测与净化。

化学发光法干扰素-γ释放试验在肺结核辅助诊断中的价值

目的探讨化学发光法干扰素-γ释放试验在肺结核辅助诊断中的临床应用价值。方法选取2019年3月1日—2020年12月31日潍坊市人民医院183例肺结核患者和33名健康体检者(对照组);将183例肺结核患者分为活动性肺结核组(109例)和非活动性肺结核组(74例)。对所有研究对象行化学发光干扰素-γ释放试验、结核菌素皮内试验、T-SPOT TB试验和血常规检测,比较不同方法诊断肺结核的效能和活动性肺结核组干扰素-γ释放试验阳性、阴性患者血常规检测结果的差异。结果活动性肺结核组、非活动性肺结核组、对照组化学发光干扰素-γ释放试验阳性率分别为92.66%、62.16%、9.09%,3个组阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。干扰素-γ释放试验和结核菌素皮内试验、T-SPOT TB和结核菌素皮内试验诊断肺结核的敏感性差异有统计学意义(P<0.05),特异性、阳性预测值、阴性预测值差异均无统计学意义(P>0.05)。干扰素-γ释放试验诊断肺结核的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值均稍高于T-SPOT TB试验,但差异均无统计学意义(P>0.05)。活动性肺结核组干扰素-γ释放试验阳性、阴性患者外周血白细胞计数、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论化学发光法干扰素-γ释放试验方便、快捷,对辅助诊断肺结核有一定的价值。

双抗体夹心ELISA法测定猪α-干扰素的浓度

为了能够准确测定猪血清中猪α-干扰素（Po IFN-α）含量及猪α-干扰素制品的浓度,本研究以制备并经过亲和层析提纯的兔抗猪α-干扰素Ig G多克隆抗体为包被抗体,以制备的鼠抗猪α-干扰素单克隆纯化抗体作为二抗,建立了测定猪α-干扰素浓度的双抗体夹心ELISA法（DAS-ELISA）。通过条件优化,最佳兔抗猪α-干扰素Ig G多克隆纯化抗体包被浓度为12.5μg·m L^-1,最佳鼠抗猪α-干扰素单克隆纯化抗体作用浓度为6.25μg·m L^-1,利用本实验室制备的已知浓度猪α-干扰素标准蛋白建立标准曲线,确定该方法检测猪α-干扰素浓度范围为0.0781-2.50μg·m L^-1。与Lowry法、冻干称量法测定猪α-干扰素浓度相比较,3种方法检测结果无显著差异,但所建立的双抗体夹心ELISA法能够检测血清中猪α-干扰素浓度,且方法简便。

马γ-干扰素双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的:建立检测马γ-干扰素的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法:将识别不同表位的抗马γ-干扰素的2株单克隆抗体(mAb,A5和SB10)纯化后,利用生物素标记试剂盒对其中1株纯化的mAb(SB10)进行标记,通过对重组马IFN-γ进行ELISA检测来建立马γ-干扰素双抗体夹心ELISA。结果:经过方阵滴定实验确定捕获抗体的最佳浓度为1mg/L,检测抗体的工作效价为1∶1000。利用建立的方法对不同稀释度的重组马γ-干扰素和丝裂原刺激的马外周血单核细胞培养上清进行检测。结论:此方法检测敏感度达到1μg/L,特异性良好,为马的细胞免疫学研究提供了方法,并为建立马γ-干扰素ELISPOT检测方法奠定了基础。

夹心ELISA检测牛γ-干扰素方法的建立及应用

为建立检测牛γ-干扰素(Bo IFN-γ)的双夹心ELISA方法,将前期获得的针对Bo IFN-γ的单克隆抗体作为捕捉抗体进行夹心ELISA检测天然Bo IFN-γ,结果表明单克隆抗体Bo IFN-γ-6E5、Bo IFN-γ-3E1、Bo IFN-γ-3C2三株能捕捉到天然的牛γ干扰素。经过条件摸索和优化,最终建立了以3E1/HRP-6E5为最佳组合的检测Bo IFN-γ的夹心ELISA方法。用建立的双夹心ELISA检测方法和进口试剂盒同时对66份血样进行检测,结果表明双夹心ELISA方法和进口试剂盒检测结果的符合率达95.45%,说明该方法能有效地对牛结核病γ-干扰素进行检测。

牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

建立牛结核病的γ-干扰素(BovIFN-γ)免疫学检测方法。本研究利用rBovIFN-γ抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,通过淋巴细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备抗BovIFN-γ的单克隆抗体,在McAb及多克隆抗体的基础上建立双抗体夹心ELISA,并进一步优化ELISA反应条件。结果表明,获得一株能稳定分泌抗BovIFN-γMcAb的杂交瘤细胞株A12E9,分泌单克隆抗体腹水效价为1∶107,属于IgG1亚类,具有良好的特异性;所建立的双抗体夹心ELISA方法,BovIFN-γ最低检测限为40 ng/mL,与其他蛋白不发生交叉反应,表现出良好的特异性。该方法为建立牛结核病的γ-干扰素诊断方法奠定了基础。

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附试验检测外周血γ-干扰素诊断结核分枝杆菌感染的结果分析

目的对化学发光免疫分析法(CLIA)检测外周血γ-干扰素(IFN-γ)结果为阴性、灰区、弱阳性、不确定和阳性标本进行分析,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行复测,同时对γ-干扰素释放试验(IGRA)辅助诊断结核分枝杆菌(MTB)感染的临界值设定及应用价值进行探讨。方法将行CLIA-IGRA检查的患者标本共299例纳入研究,根据检测结果分为3组,A组(T-N<14 pg/mL)118例,B组(T-N:14~50 pg/mL)138例,C组(T-N>50 pg/mL)43例,T为测试培养管,N为本底对照培养管。利用ELISA进行复测,比较两种检测方法的结果一致性。计算不同临界值下的灵敏度和特异度,Kappa检验评价两种检测方法的一致性、灵敏度、特异度;ROC曲线分析两种检测方法的诊断性能。结果两种检测方法对于A组和C组样本的检测结果一致性较高,符合率分别为96.61%和93.02%,与B组样本检测得到的IGRA阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=142.04,P<0.001)。CLIA和ELISA检测确诊结核患者、潜伏性MTB感染患者、非结核患者的阳性率分别为68.97%、72.60%、49.23%和44.83%、32.88%、14.21%,两者对潜伏性MTB感染和非结核患者检测的阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。当以40 pg/mL为临界值时,两种检测方法的特异度均较高,分别为88.80%和91.37%,一致性较好(总符合率94.60%,Kappa=0.779)。结论两种检测方法在检测MTB感染的样本具有较好的一致性,但对于易与结核混淆的非MTB感染者标本需要提高临界值来判定IFN-γ的结果,CLIA检测具有检测时间短、自动化优势,在MTB感染筛查方面具有较高的临床应用价值。

应用ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素

为了验证ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素的可行性,应用建立的ELISA方法检测30份牛全血,结果为阴性和阳性对照均成立,30份全血的牛结核分枝杆菌γ-干扰素均为阴性,结果表明应用ELISA方法检测牛结核分枝杆菌γ-干扰素诊断牛结核分枝杆菌可行,可以适用于牛结核分枝杆菌的大规模监测。

重组人干扰素α-2b中残余假单胞菌菌体蛋白定量ELISA检测方法的建立

目的 建立假单胞菌菌体蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附分析（ELISA）定量检测方法，用于重组人干扰素α-2b中残余宿主菌菌体蛋白（HCP）含量的检测。方法 采用带有不含干扰素基因空质粒的假单胞菌，按既定工艺发酵纯化并制备HCP，免疫小鼠和白兔后制备抗HCP多抗体，以抗HCP兔抗体为包被抗体，将抗HCP鼠抗体标记辣根过氧化物酶（HRP）为酶联抗体，建立双抗体夹心ELISA法，并对该方法进行验证及应用。结果 所建立的方法线性范围为2.5 - 80.0 ng/mL，相关系数R2 〉 0.98，定量限为2.5 ng/mL；检测不同浓度的加样回收样品，回收率为85 % - 115 %，变异系数均 〈 10 %；与重组人干扰素α-2b和牛血清白蛋白（BSA）均无交叉反应；检测3批供试品，准确度及重现性良好。结论 已建立假单胞菌菌体蛋白的双抗体夹心ELISA定量检测方法，该方法线性好，专属性强，灵敏度高，准确度和精密度较高，可用于重组人干扰素α-2b中HCP的质量控制。

γ-干扰素ELISA检测方法在牛结核病流行病学调查中的应用

[目的 ]了解宁夏贺兰县奶牛结核病的流行情况,为制定宁夏地区牛结核病净化方案提供参考。[方法 ]2015年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法,对宁夏贺兰县2个规模化奶牛场开展牛结核病流行病学调查,共检测奶牛2 230头。[结果 ]在2个规模化奶牛场累计检测出皮内变态反应阳性奶牛79头,皮内变态反应和γ-干扰素ELISA双阳性奶牛72头,双阳性率为3.23%(72/2 230)。[结论 ]γ-干扰素ELISA检测方法准确度较高;在对牛群进行结核病检测时,先以皮内变态反应方法筛测,再结合γ-干扰素ELISA检测结果确诊,更有利于牛结核病的检测与净化。

酶联免疫斑点法检测慢性乙型肝炎患者HBcAg特异性分泌γ-干扰素细胞及其临床意义

目的观察免疫应答不同期的慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血中HBcAg特异性γ-干扰素（IFNγ）分泌细胞数，探讨其在评价患者体内非溶细胞机制清除乙型肝炎病毒（HBV）能力中的临床意义。方法采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测83例免疫耐受期、49例免疫清除期患者和18名健康人HBcAg特异性IFNγ分泌细胞。结果健康人HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数为11—19个／4×10^5个外周单个核细胞（PBMC），62．2％的免疫耐受期CHB患者低于正常值，44．9％的免疫清除期CHB患者高于正常值。HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数与HBV DNA水平未发现有相关性，而HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数与HBeAg S／N值在一定范围内有正相关趋势。13例免疫耐受期患者经乙型肝炎疫苗及草分枝杆菌制剂治疗3—6个月后，12例患者HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数有不同程度提高。结论采用ELISPOT测定HBcAg特异性IFNγ分泌细胞数可从一个侧面反映大多数CHB患者免疫应答能力，并可以作为治疗效果的评价指标。

温通针法联合丹红注射液对血管性痴呆患者血清白细胞介素-18、干扰素-γ的影响

目的:探讨温通针法联合丹红注射液对血管性痴呆(VD)患者血清白细胞介素-18、干扰素-γ的影响。方法:选取2015年4月至2016年10月辽宁中医药大学附属医院收治VD患者132例,按照随机数表法分为对照组、温通组、丹红组及联合组,每组33例。对照组给予安慰剂,温通组给予温通针法治疗,丹红组给予丹红注射液治疗,联合组给予温通针法联合丹红注射液治疗。观察4组治疗前及治疗后(治疗6周)改良长谷川痴呆量表(HDS)评分变化,治疗前后血清白细胞介素-18、干扰素-γ水平变化,并进行统计学分析。结果:治疗后,对照组HDS评分及血清白细胞介素-18、干扰素-γ水平与治疗前差异无统计学意义(P>0.05);温通组、丹红组及联合组HDS评分与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05),且以联合组为最高,温通组、丹红组为其次,温通组、丹红组及联合组血清白细胞介素-18、干扰素-γ水平与治疗前比较显著降低(P<0.05),且均以丹红组为最高,丹红组次之,温通组为最低。相关性分析显示,温通组HDS评分与血清白细胞介素-18、干扰素-γ水平无明显相关性(P>0.05),丹红组HDS评分与血清白细胞介素-18、干扰素-γ水平呈负相关(P<0.05),丹红组HDS评分与血清白细胞介素-18、干扰素-γ水平呈负相关(P<0.05)。结论:温通针法联合丹红注射液治疗VD具有较好的效果,降低血清白细胞介素-18、干扰素-γ水平可能是其分子生物学机制之一。

健脾化湿法对脾虚湿困证溃疡性结肠炎大鼠血清干扰素-γ和白介素-4含量的影响

目的观察健脾化湿法对脾虚湿困证溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠血清干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和白介素-4(interleukin-4,IL-4)含量的影响,探讨健脾化湿法治疗UC的作用机制。方法将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、健脾化湿组。采用多因素相结合的方法,模拟中医传统病因"久居湿地,饮食失宜,过于劳倦"复制脾虚湿困证大鼠模型,采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制UC模型。采用酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清IFN-γ和IL-4含量。结果与模型组比较,健脾化湿组大鼠血清IFN-γ含量显著降低(P<0.05),IL-4含量显著升高(P<0.01),IFN-γ/IL-4比值显著降低(P<0.01)。结论健脾化湿法治疗脾虚湿困证UC的作用机制与降低血清IFN-γ含量,升高血清IL-4含量,抑制1型辅助T细胞介导的炎性反应有关。