新生期大鼠反复惊厥后海马区γ-氨基丁酸A受体α1和γ2亚单位表达的改变及其意义

目的 探讨新生期大鼠反复惊厥后海马区γ-氨基丁酸（GABA）A受体（GABAA R） α1和γ2亚单位表达的改变及其意义.方法 72只健康新生大鼠随机分为反复惊厥组（RS组）和对照组（CONT组）,两组又随机分为10日龄、35日龄、70日龄亚组,各亚组12只大鼠.通过三氟乙醚吸入诱导建立新生期大鼠反复惊厥动物模型.采用Western blot法及逆转录-PCR法检测大鼠海马区GABAAR α1和γ2亚单位蛋白及mRNA的表达.结果 与CONT组比较,RS组大鼠10日龄亚组海马区GABAARγ2亚单位蛋白表达明显降低（P ＜0.01）;35日龄亚组和70日龄亚组海马区GABAAR α1和γ2亚单位蛋白表达均明显降低（均P＜0.05）.与CONT组比较,RS组大鼠10日龄亚组、35日龄亚组和70日龄时亚组海马区GABAAR α1和γ2亚单位mRNA表达均明显降低（P ＜0.05～0.01）.结论 新生期大鼠反复惊厥后海马区GABAAR α1和γ2亚单位表达明显降低,这可能在发育期反复惊厥所致的远期GABA介导的抑制功能下降中起重要作用.

X染色体上脆性X智力低下基因1敲除模型小鼠针刺长强穴学习记忆及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达的影响

背景:X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠海马区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达低于野生型小鼠。目的:观察针刺长强穴对X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠学习记忆及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达的影响。方法:采用X染色体上脆性X智力低下基因1敲除纯合子小鼠雌雄各5只,一雌一雄合笼饲养。所繁殖幼鼠经基因型鉴定为X染色体上脆性X智力低下基因1敲除纯合子小鼠者,随机分为模型组、长强组、非穴组,各10只,另取野生型小鼠10只作为空白组。长强组小鼠采用平补平泻,行提插手法针刺长强穴1 min,频率160-200次/min,1次/d,连续治疗10 d;非穴组刺激小鼠右肋弓最低点上1 cm处;模型组及空白组每日只进行模拟抓取。结果与结论:与空白组相比,模型组小鼠水迷宫逃避潜伏期明显延长(P<0.05);而与模型组相比,长强组小鼠水迷宫逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达率增加(P<0.05);而非穴组小鼠水迷宫逃避潜伏期及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达率与模型组接近(P>0.05)。且针刺X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠长强穴后其海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基阳性细胞率与逃避潜伏期呈负相关(r=-0.554,P=0.001)。提示针刺长强穴可改善X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠的学习记忆能力,上调γ-氨基丁酸A型受体α1亚基在海马CA1区的表达。

大鼠脑干运动核内γ-氨基丁酸B受体1亚型的定位分布

用γ 氨基丁酸B受体 1亚型 (GABABR1)特异性抗体免疫细胞化学染色技术 ,研究了其在大鼠脑干运动核团内的定位分布。结果显示 :密集浓染的GABABR1样阳性神经元胞体、纤维和终末分布于E W核、上涎核、疑核和迷走神经背核 ;三叉神经运动核、面神经核内可见中等密度且浓染的GABABR1样阳性神经元胞体、纤维和终末 ;中等密度淡染的阳性神经元胞体、纤维和终末见于动眼神经核、滑车神经核和舌下神经核 ;散在的阳性胞体、纤维和终末见于外展神经核和下涎核。本研究的结果说明GABABR1样阳性结构在脑干不同运动核内的分布存在差异。

急性缺血再灌注大鼠脑中γ-氨基丁酸A型受体α1 mRNA的表达变化

目的观察大鼠脑组织中GABAARα1mRNA在脑缺血再灌注不同时段的表达及动态变化规律,探讨其在脑缺血再灌注损伤中的意义。方法55只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脑缺血2h再灌注6h、12h、24h、3d、7d组(手术组),及其相应的假手术对照组,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,至上述规定时间点后取大脑组织,利用地高辛标记寡聚核苷酸探针原位杂交技术与计算机分析系统在光学显微镜下观察GABAARα1mRNA分别在相应海马区及大脑皮质阳性神经元的表达情况,以及相应海马区及大脑皮质的病理变化。结果假手术组GABAARα1mRNA表达同正常对照组相比没有明显改变。而各手术组GABAARα1 mRNA表达在脑缺血2h再灌注24h开始下降,3d下降显著,7d恢复正常。结论GABAARα1 mRNA在急性脑缺血再灌注时含量降低可能为脑缺血再灌注损伤的重要原因。

A型γ-氨基丁酸受体α1亚基Cys^(166)-Leu^(296)片段的配体结合和结构性质

研究A型γ 氨基丁酸受体 (γ aminobutyricacidtypeA ,GABAAreceptor)α1亚基Cys166 Leu2 96片段的苯并二氮杂 (benzodiazepine ,BZ)结合位点及其结构特性 ,了解该片段结构与功能的关系 .利用PfuDNA多聚酶依赖的点突变技术将该片段的每一残基用丙氨酸替代 ,通过E .coli体系过表达 ,纯化得到各种突变蛋白 .运用圆二色性 (circulardichroism ,CD)技术测定突变蛋白的二级结构 ,借助荧光各向异性 (fluorescenceanisotropy ,FA)、荧光共振能量转移 (fluorescenceresonanceenergytrans fer,FRET)技术测定其与BZ荧光配基Bodipy FLRo 1986 (BFR)的结合强弱 .通过与野生型的比较 ,确定其残基是否与结构和或结合相关 .结果显示 ,突变体R191A、G2 12A、S2 13A、R2 14A及V2 79A的结合能力减弱 2～ 3倍 ,除V2 79A显著增加α螺旋外均无二级结构的改变 .E193A、S2 78A、V2 79A和P2 80A的α螺旋显著增多 ,N2 75A和R2 76A的α螺旋则显著减少 .推测Cys166 Leu2 96的Arg191,Gly2 12 ,Ser2 13 和Arg2 14 可能位于BZ的结合袋 ,其第 4个环区 (Glu2 10 Asn2 16)与结合密切相关 .Glu193 、Ser2 78和Pro2 80 参与维持β折叠结构 ,而Asn2 75和Arg2 76参与维持α螺旋结构 .Cys166 Leu2 96的第 9个环区 (Asn2 75 Pro2 80 )对其结?

迷走神经电刺激对脑外伤昏迷大鼠意识及前额叶皮质γ-氨基丁酸b1受体表达的影响

目的研究迷走神经电刺激(VNS)对脑外伤(TBI)昏迷大鼠的促醒效果及其机制。方法 168只健康Sprague-Dawley大鼠随机分为空白组、TBI组、拮抗剂组和VNS组,每组42只。空白组不做任何处理,TBI组、VNS组、拮抗剂组撞击法复制脑外伤模型,造模后昏迷至少30 min的大鼠入选。VNS组予VNS,拮抗剂组侧脑室注射Orexin A受体1拮抗剂SB334867后加VNS,TBI组予假VNS。分别于干预后6 h、12 h、24 h观察大鼠意识水平,应用免疫组化、Western blotting检测前额叶皮质γ-氨基丁酸b1受体(GABAb1R)表达水平。结果最终空白组42只、TBI组11只、拮抗剂组13只、VNS组28只大鼠觉醒。Western blotting显示,干预后12 h、24 h,GABAb1R蛋白表达TBI组>拮抗剂组>空白组>VNS组(F>60.412,P<0.001)。免疫组化显示,GABAb1R蛋白表达TBI组>拮抗剂组>VNS组>空白组(H=15.121,P=0.002),但不同时间点无显著性差异(H=3.028,P=0.220)。结论 VNS可促TBI昏迷大鼠觉醒,其促醒机制可能与Orexin A介导大鼠前额叶皮质GABAb1R表达水平下调有关。

扶正祛邪方加减治疗失眠症的药效及其对脑组织内GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7表达的影响

目的 探究扶正祛邪方加减对氯苯丙氨酸(para-chlorophenylalanine, PCPA)失眠模型小鼠的镇静催眠作用及其对脑组织内γ-氨基丁酸A受体α1(gamma-aminobutyric acid A receptor subtype α1, GABA ARα1)、5-羟色胺1A受体(5-hydroxytryptamine 1A receptor, 5-HT1AR)、代谢型谷氨酸受体7(metabotropic glutamate receptor 7, mGluR7)表达的影响。方法 将50只小鼠随机分为空白对照组、模型组、艾司唑仑组、高剂量组和低剂量组,连续灌胃给药7 d后,各组小鼠进行戊巴比妥钠协同睡眠实验和旷场试验的行为学测试,分别采用RT-qPCR和Western blot法检测脑组织中GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7 mRNA和蛋白的表达以及mGluR7/GABA ARα1的比值。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠睡眠潜伏期延长(P<0.05),睡眠时间缩短(P<0.05),旷场试验中总的区域路程延长(P<0.05),中心区停留时间缩短(P<0.05),脑组织中GABA ARα1、5-HT1AR m RNA和蛋白的表达均降低(P<0.05),mGluR7 mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05),mGluR7/GABA ARα1上升(P<0.05)。与模型组比较,艾司唑仑组和高剂量组、低剂量组小鼠睡眠潜伏期缩短(P<0.05),睡眠时间延长(P<0.05),总的区域路程减少(P<0.05),中心区停留时间增加(P<0.05),脑组织中GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白的表达上升(P<0.05),mGluR7 m RNA和蛋白表达降低(P<0.05),m GluR7/GABA ARα1下降(P<0.05)。与艾司唑仑组比较,高剂量组、低剂量组小鼠睡眠潜伏期和总区域路程增加(P<0.05),睡眠持续时间和中心区停留时间减少(P<0.05),GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白表达下降(P<0.05)、mGluR7 mRNA和蛋白表达上升(P<0.05),mGluR7/GABA ARα1上升(P<0.05)。与高剂量组比较,低剂量组小鼠睡眠潜伏期、总区域路程增加(P<0.05),睡眠持续时间、中心区停留时间减少(P<0.05),GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白表达下降(P<0.05)、mGluR7 m RNA和蛋白表达上升(P<0.05),mGluR7/GABA ARα1上升(P<0.05)。结论 扶正祛邪方加减可以改善PCPA失眠模型小鼠的睡眠,有较好的镇静催眠作用,其机制可能是通过调节脑组织内GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7水平发挥作用。

七氟醚对幼鼠海马组织神经元凋亡和γ-氨基丁酸A受体α1/α2亚型组成及远期空间探索能力的影响

目的 通过观察七氟醚对幼鼠海马组织多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[Poly（ADP-ribose）polymerase-1,PARP-1]的表达、γ-氨基丁酸A受体（γ-aminobutyric acid subtype A receptor,GABAAR）α1/α2亚型组成及空间探索认知能力的影响,分析七氟醚对发育神经元的毒性作用及可能的相关机制.方法 选取出生后7d的SD幼鼠216只,设定0.8 MAC（2.11％）浓度七氟醚维持时间4h作为麻醉处理条件.利用随机数字表法将幼鼠分为对照组（A组）、假麻醉组（B组）和麻醉组（C组）,每组72只.经不同处理后3组分别于6、24、72 h各取6只幼鼠海马组织进行Western blot检测,确定PARP-1.再以同样方法、数量检测GABAARα1亚型和α2亚型水平,观察GABAAR α1/α2亚型组成与神经元凋亡的关联.3组分别在幼鼠成长至5、8、14周时随机选12只进行旷场实验.结果 与A组（100％）比较,C组于麻醉后6 h PARP-1表达水平明显增加[（216±15）％]（P＜0.05）,而与A组（100％）比较,GABAAR α1/α2蛋白含量比值于麻醉结束后6 h[（126±6）％]、24 h[（127±8）％]及72 h[（183±22）％]均不同程度升高（P＜0.05）.B组各检测指标与A组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.5周时接受七氟醚麻醉的幼鼠（C组）在旷场中平面活动及垂直活动均多于A组,B组各观察指标与A组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.8周和14周时,各组动物旷场表现差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 七氟醚可引起早期的细胞死亡,且其神经毒性作用与受体的影响有关,可引起GABAARα1/α2比值增加,α2亚型向α1亚型进行转化.七氟醚可引起成长中幼鼠在陌生环境中的活动增加,影响其短期内对新环境的适应能力及空间探索认知能力.

γ-氨基丁酸B1型受体对紫杉醇诱发神经痛大鼠背根神经节/脊髓背角核因子-κB通路的调控作用

目的 通过鞘内给予不同药物，观察γ-氨基丁酸B（GABAB）受体对紫杉醇诱发神经痛大鼠背根神经节（DRG）/脊髓背角核因子-κB（NF-κB）通路的调控作用。 方法 清洁级SD雄性大鼠（体重160～180 g），腹腔注射紫杉醇制备大鼠紫杉醇诱发神经痛模型，取模型制备成功的40只大鼠，采用随机数字表法，根据鞘内给药不同分为4组（n＝10）：紫杉醇组（P组）：生理盐水10 μl；巴氯芬（Baclofen）组（B组）：Baclofen 0.5 μg/10 μl；Saclofen（S组）：Saclofen 30 μg/10 μl；SN50组（SN）组：SN50 200 ng/10 μl。另取10只同周龄正常大鼠腹腔注射等体积溶剂并鞘内注射生理盐水10 μl作为对照组（C组）。5组大鼠分别于腹腔给药前1 d（T1）、鞘内给药前1 d（T2）、鞘内给药后120 min（T3）测定大鼠50%机械缩足阈值（PWT），然后快速取腰段DRG和脊髓背角，采用分子生物学方法测定GABAB1受体、NF-κBp65及炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达变化。 结果 与T1比较，除C组外其余各组T2时点的PWT均明显降低（P、B、A、SN组P值分别为0.001、0.000、0.000、0.000）；与T2比较，T3时点B、SN组的PWT升高（B/SN组P值分别为0.003、0.002），而S组PWT降低（P＝0.007）。P组脊髓背角GABAB1受体的mRNA（0.59±0.06）和蛋白（0.42±0.05）与C组的mRNA（0.89±0.05）和蛋白（0.66±0.02）比较表达下调（P＝0.000、0.000），而DRG中GABAB1受体的mRNA（1.31±0.12）和蛋白（0.37±0.02）与C组的mRNA（0.95±0.07）和蛋白（0.28±0.04）比较则表达上调（P＝0.000、0.003）；与C组比较，P组的NF-κBp65、IL-1β和TNF-α的mRNA及蛋白在脊髓背角和DRG上均表达上调（mRNA：P＝0.000、0.001、0.000、0.000、0.000、0.000，蛋白：P＝0.004、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000）。与P组比较，B组GABAB1受体mRNA及蛋白表达在脊髓背角（1.01±0.08比0.59±0.06；0.50±0.03比0.42±0.05）与DRG（1.60±0.10比1.31±0.12; 0.50±0.03比0.37±0.02）一致上调（mRNA：P＝0.000、0.000，蛋白：P＝0.004、0.000），而NF-κBp65、IL-1β及TNF-α的mRNA及蛋白均表达下调（mRNA：P＝0.000、0.000、0.000、0.000、0.001、0.000，蛋白：P＝0.000、0.001、0.000、0.000、0.000 、0.000）；S组和B组的GABAB1受体及上述细胞因子表达则正好相反；在SN组的脊髓背角和DRG中，随着NF-κBp65、IL-1β及TNF-α的mRNA和蛋白表达下调（mRNA：P＝0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000，蛋白：P＝0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000），GABAB1受体mRNA（0.36±0.03比0.59±0.06；0.34±0.03比1.31±0.12）和蛋白（0.29±0.01比0.42±0.05；0.28±0.03比0.37±0.02）表达也明显下调（mRNA：P＝0.000、0.000，蛋白：P＝0.000、0.003）。 结论 激活紫杉醇诱发神经痛大鼠脊髓背角内GABAB受体，或阻断NF-κB通路，均可通过下调DRG和脊髓背角中NF-κB及下游炎性因子表达，缓解神经痛，NF-κB在其中发挥关键作用。

异氟醚对老年大鼠认知功能及大脑颞叶GABA受体1和NMDA受体2B表达的影响

目的观察吸入不同浓度异氟醚后老年大鼠空间记忆以及脑右侧颞叶γ-氨基丁酸受体1(GABAR1)和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NMDAR2B)表达的变化。方法雄性SD老年大鼠90只,9月龄,随机分为对照组(C组,n=10)和实验组(n=80)。C组吸入室温空气,实验组按照异氟醚浓度和吸入持续时间分为S1组(1.5%-2h)、S2组(2.5%-2h)、S3组(1.5%-4h)和S4组(2.5%-4h)。各组均分为两组分别在麻醉后1、7d进行Morris水迷宫实验,采用RT-PCR技术和免疫荧光技术检测右侧脑颞叶GABAR1和NMDAR2B的mRNA表达和蛋白含量。结果与对照组比较,异氟醚吸入1d后S1、S2、S3、S4组的空间记忆能力伴随着药物浓度升高和吸入持续时间延长出现持续下降,颞叶中GABAR1的mRNA表达和蛋白含量明显升高,NMDAR2B的mRNA表达和蛋白含量明显降低(P<0.01)。异氟醚吸入7d后,S1、S2、S3组大鼠的空间记忆能力与对照组差异无统计学意义,S4组明显低于对照组和其他三组(P<0.01);S1、S2、S3组GABAR1和NMDAR2B的mRNA表达和蛋白含量与对照组差异无统计学意义;与对照组比较,S4组GABAR1的mRNA表达和蛋白含量明显升高,NMDAR2B的mRNA表达和蛋白含量明显降低(P<0.01)。结论持续吸入异氟醚对空间记忆能力的影响显著,而且长时间高浓度的吸入方式造成的影响时间较长。这种影响与脑颞叶中GABAR1和NMDAR2B等神经递质受体的表达相关。

神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区GABAAα_1受体的表达变化

目的探讨γ-氨基丁酸A受体α_1(γ-aminobutyric acid type A receptor subunitα_1,GABAAα_1)在神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区(ventrolateral periaqueductal gray,v LPAG)表达变化及其是否参与神经病理性疼痛表达过程。方法成年雄性清洁级SD大鼠15只,随机分为空白对照组(C组)、假手术组(S组)、神经病理性疼痛模型组(NP组)。建立坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve injury,SNI)大鼠神经病理性疼痛模型,分别于术前1 d、术后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d测定大鼠机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT),采用蛋白免疫印迹法检测中脑导水管周围灰质腹外侧区处γ-氨基丁酸A受体α_1蛋白相对表达变化。结果与C组大鼠各时相机械缩足反射阈值比较,S组大鼠无明显改变。S组大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区处γ-氨基丁酸A受体α_1受体蛋白表达水平为0.699±0.027,较C组(0.636±0.023)无明显差异。NP组大鼠术后1 d机械缩足反射阈值为0.907±0.251 g,明显低于S组(8.216±1.428 g),并在后期呈持续性降低(P<0.05)。NP组大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区处γ-氨基丁酸A受体α_1受体蛋白相对表达量为1.442±0.015,明显高于S组(0.699±0.027)(P<0.05)。结论γ-氨基丁酸A受体α_1在神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区表达明显上调,与机械缩足反射阈值呈负相关,可能与神经病理性疼痛相关。

在大鼠肝癌发生过程中GABA-BR1的表达变化及意义

为探讨γ-氨基丁酸B型受体1(γ-aminobutyric acid type B1 receptor,GABA-BR1)与肝癌发生的关系,利用二乙基亚硝胺(DEN)制备诱发型大鼠肝癌模型,模拟人类肝癌发生发展过程,采用免疫组织化学技术对GABA-BR1和细胞周期素E(Cyclin E)蛋白在大鼠肝脏中的表达进行定性和定量分析.结果显示,在正常肝组织中有少量散在分布的GABA-BR1表达阳性的细胞;在变性或坏死灶周围GABA-BR1表达阳性的肝细胞较多;增生结节中部分肝细胞呈过表达;在肝癌细胞中广泛表达.Cyclin E与GABA-BR1阳性表达的细胞分布特点相似.实验结果提示,在肝癌发生发展过程GABA-BR1过表达,可能对肝细胞的异常增生或癌变过程起到抑制作用.

丙泊酚与氯胺酮对老年大鼠远期记忆和大脑两种受体表达的比较

目的通过比较丙泊酚和氯胺酮腹腔注射对老年大鼠远期记忆的影响及脑颞叶和海马CA1区N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NMDAR2B)和γ-氨基丁酸受体1(GABAR1)的表达,初步探讨远期记忆与不同脑区神经递质受体的关系。方法雄性老年大鼠随机分为空白对照组、丙泊酚组、氯胺酮组。3组大鼠于实验前进行为期5 d的Morris水迷宫训练,于第6天给药,丙泊酚组腹腔注射50 mg·m L-1丙泊酚,氯胺酮组腹腔注射80 mg·m L-1氯胺酮,空白对照组给予相同剂量的0.9%氯化钠溶液。给药后第7天进行空间探索实验及定位航行实验,测试对大鼠学习记忆能力的影响,测试结束后免疫荧光及FISH技术检测大鼠脑颞叶及海马CA1区GABAR1及NMDAR2B的表达。结果 Morris水迷宫结果:丙泊酚组(9.49±1.24)s与空白对照组(8.82±2.22)s比较,差异无统计学意义。氯胺酮组(12.04±2.67)s与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)且较空白对照组潜伏期时间延长,穿越目标次数明显减少。免疫组化及FISH技术:大鼠脑颞叶及海马CA1区GABAR1表达:丙泊酚组与空白对照组比较,脑颞叶及海马CA1区均差异无统计学意义,而氯胺酮组与空白对照组比较,大鼠脑颞叶与海马CA1区表达均明显上调(P<0.05)。大鼠脑颞叶及海马CA1区NMDAR2B的表达:丙泊酚组与空白对照组比较,脑颞叶及海马CA1区均差异无统计学意义,而氯胺酮组与空白对照组比较,大鼠脑颞叶及海马CA1区表达均明显下降(P<0.05)。结论丙泊酚单独麻醉对长期的学习记忆无影响,而氯胺酮可导致麻醉长期学习记忆损伤,其机制可能不仅与海马CA1区NMDAR2B受体表达的下调和GABAR1表达的上调有关,其与颞叶等非海马区的受体表达也可能有关。

七氟醚对老年大鼠认知功能及大脑额叶GABAR1和NMDAR2B表达的影响

目的观察七氟醚对老年大鼠学习记忆能力的影响以及与脑右侧前额叶γ-氨基丁酸受体1(GABAR1)和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NMDAR2B)表达变化的关系。方法雄性SD老年大鼠模型50只,随机分为对照组(C组,n=10)和实验组(T组,n=40)。C组吸入室温空气,实验组按3%浓度吸入七氟醚持续时间不同分为T1组(吸入2h)和T2组(吸入4h),C组全部,T1和T2组各取10只大鼠分别在麻醉后1天和7天进行Morris水迷宫实验,检测老年大鼠的空间学习记忆能力,采用定量RT-PCR技术和免疫荧光技术分别检测右侧前额叶GABAR1和NMDAR2B的mRNA转录水平和蛋白含量。结果与C组比较,吸入七氟醚第1天T1和T2组逃避潜伏期明显延长,空间探索穿越次数明显减少,GABAR1的mRNA表达量和蛋白含量明显上调,NMDAR2B的mRNA表达量和蛋白含量明显下调(P<0.05)。与C组比较,吸入七氟醚后第7天T2组逃避潜伏期明显延长,空间探索穿越次数明显减少,T2组GABAR1 mRNA表达量和蛋白含量明显上调,NMDAR2B的mRNA表达量和蛋白含量明显下调,且T2组GABAR1蛋白含量明显高于,NMDAR2B蛋白含量明显低于T1组(P<0.05)结论长时持续吸入七氟醚相较于短时持续吸入对空间学习记忆能力下降的影响较大,且持续影响时间较长。这种影响与脑额叶中GABAR1和NMDAR2B的表达变化相关。

电针抑制PTSD对内侧额叶皮质BDNF的下调和GABAARa1的上调

目的了解创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder,PTSD)对大鼠内侧额叶皮质(medical prefrontal cortex,mPFC)脑源性神经营养因子(BDNF)和γ-氨基丁酸受体a1(GABAARa1)水平的改变及电针对其影响,为电针防治PTSD提供实验依据。方法 Wistar大鼠随机法分为正常对照组,PTSD模型组、电针组。采用连续单一刺激构建PTSD模型。电针组于造模第二天,给予电针"足三里"穴和"百会"穴,频率为2Hz,时间30min,每日1次,连续电针21天。免疫组织化学方法观察mPFC的BDNF和GABAARa1水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠mPFC中BDNF免疫反应性较明显减弱,GABAARa1免疫反应性明显增强;电针组大鼠mPFC中BDNF免疫反应性较模型组明显增强,但与正常对照组相似,而GABAARa1免疫反应性较模型组显著减弱,并弱于正常对照组。结论本研究结果提示,电针可能通过抑制PTSD对内侧额叶皮质BDNF的下调和GABAARa1的上调,调节神经元活性,恢复相关神经环路的功能,促进PTSD条件性恐惧的消除。

脂多糖对大鼠下丘脑室旁核GABA_BR1阳性神经元的激活作用

目的:探讨大鼠下丘脑室旁核(PVN)-氨基丁酸B受体亚单位1(GABABR1)阳性神经元对脂多糖(LPS)刺激的反应.方法:将大鼠腹腔注射LPS建立免疫应激模型,对照组注射等量的生理盐水,采用免疫荧光双标记与激光共聚焦显微镜技术,观察大鼠下丘脑室旁核内神经元Fos和GABABR1的标记情况以及它们在同一神经元内是否有共标记.结果:腹腔注射LPS可使大鼠PVN内表达Fos神经元数量显著增高,且PVN内部分神经元可同时被Fos和GABABR1双重标记,双重标记的神经元大约占Fos神经元的30%,占GAB-ABR1的24%.结论:下丘脑室旁核部分GABABR1阳性神经元参与了LPS诱导的免疫应激反应,它们可能在下丘脑-垂体-肾上腺轴的调节方面起重要作用.

GA_BABR1基因多态性与OSAHS合并高血压的相关性研究

目的探讨云南汉族人γ-氨基丁酸B1型受(GABABR1)Phe658Phe基因多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(0SAHS)合并高血压的相关性.方法以24例重度0SAHS患者(其中12例血压正常,12例高血压)、12例原发性高血压及12例正常对照组为研究对象,用聚合酶链反应(PCR)及限制性内切酶酶切法检测GABABR1 Phe658Phe的基因多态性.结果四组基因型及等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05).男女性别之间基因基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05).结论 GABABR1基因Phe658Phe多态性可能与云南汉族人0SAHS合并高血压的发生无关.

GABA和GABA_AR_(α1)在皮质发育障碍模型鼠大脑中的表达

目的:观察液氮损伤诱导局灶性皮质发育障碍(FCD)大鼠脑皮质和海马中γ-氨基丁酸(GABA)和),γ-氨基丁酸A受体α1亚型(GABAARα1)的表达,探讨其与癫癎发生的关系。方法:实验随机分为正常对照组、假手术组和液氮损伤组,建立FCD大鼠模型,喂养至16～18周处死取脑,经病理学HE、Nissl染色,免疫组织化学方法用SABC法,肉眼观察,光镜下观察小脑回及周围结构和海马CA1～CA4、齿状回中GABA和GABAARα1阳性细胞表达情况,免疫组化图像仪分析。结果:大鼠脑嘴尾方向形成了一微脑回。在液氮冻损伤组,微脑回及前额和海马CA1、齿状回的GABA和GABAARα1阳性着色神经元的表达均较正常对照组或假手术组的表达减少,经统计学分析差异有显著意义(P<0．05),但在其他脑皮质和海马结构区的表达则无明显改变。结论:微脑回及周围和同侧海马结构中CA1及齿状回的GABA和GABAARα1下调和抑制功能的降低可能在癫癎发病机制中起到了重要作用。

催产素预处理对胎鼠海马脑片缺氧无糖损伤后OTR、GABA_ARβ1表达的影响

目的:研究催产素(OT)预处理对胎鼠海马脑片缺氧无糖损伤后催产素受体(OTR)、γ-氨基丁酸A受体β1亚基(GABAARβ1)表达的影响,探讨OT神经保护的作用机制。方法:采用胎龄20dSD大鼠海马脑片,实验组经含10-6mol·L-1OT人工脑脊液(ACSF)孵育预处理后行缺氧无糖损伤(OGD),对照组经正常ACSF孵育后直接行OGD,各15min,SP免疫组化法半定量测定海马CA1区OTR、GABAARβ1表达变化,电镜观察神经元损伤情况。结果:实验组海马CA1区OTR、GABAARβ1表达均显著高于对照组(t=2.118、P=0.048;t=2.272、P=0.036)。对照组大量神经元受损,核固缩或碎裂,部分核膜溶解,实验组细胞核、粗面内质网、线粒体均较对照组有所改善,核膜较光滑,胞浆肿胀较对照组减轻。结论:OT上调胎鼠海马OTR、GABAARβ1表达,减少神经元变性坏死,增强大脑耐受缺氧损伤的能力,对胎儿中枢神经系统起保护作用。

白香丹对PMS肝气逆证模型大鼠GABA_BR亚基分布及表达的影响

目的观察白香丹对经前期综合征(PMS)肝气逆证模型大鼠额区和下丘脑中γ-氨基丁酸(GABA)B1受体(GBR1)、γ-氨基丁酸B2受体(GBR2)分布及表达的影响,探讨白香丹对PMS肝气逆证的干预机制。方法通过旷场实验和阴道涂片法筛选健康雌性Wistar大鼠进入实验,采用电刺激法复制PMS肝气逆证大鼠模型,用免疫荧光双标记技术检测GBR1和GBR2在额区和下丘脑中的表达。结果与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠垂直得分、水平得分和总分均显著增加(P<0.01),GBR1和GBR2蛋白在额区和下丘脑中的表达水平降低(P<0.01);与模型组大鼠比较,白香丹组和巴氯芬组大鼠旷场得分显著降低(P<0.01,P<0.05),GBR1和GBR2蛋白在额区和下丘脑中的表达水平明显上升(P<0.01,P<0.05),但两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GABABR亚基(GBR1和GBR2)表达的下调可能与PMS肝气逆证的发生密切相关;白香丹可对GBR1、GBR2的表达起到调节作用。