麻射安金丸对慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌大鼠模型气道炎症及黏蛋白5AC和γ-氨基丁酸A受体α亚基表达水平的影响

目的 探讨麻射安金丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道黏液高分泌大鼠模型气道炎症及黏蛋白5AC(MUC5AC)和γ-氨基丁酸A受体α亚基(GABAARα)表达水平的影响。方法 将102只体重(195±20)g的7周龄雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、氨溴索阳性对照组及中药低、中、高剂量组,每组17只。除正常组外,其余各组均采用脂多糖滴入联合香烟烟雾暴露方式建立COPD气道黏液高分泌大鼠模型。造模成功后,氨溴索阳性对照组给予氨溴索溶液[54 mg/(kg·d)],中药低、中、高剂量组分别给予4.375、8.750、17.500 g/(kg·d)麻射安金丸(汤剂),正常组和模型组以等容量生理盐水灌胃,六组均连续灌胃28 d。实验结束后采用苏木精-伊红染色、过碘酸希夫染色观察各组肺组织病理学变化,酶联免疫吸附试验检测各组血清炎症因子水平和肺泡灌洗液细胞因子水平,采用蛋白质印迹法检测各组肺组织中MUC5AC、GABAARα含量。结果 模型组气道及肺组织病理变化较重,白细胞介素-1β(IL-1β)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、组织金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MUC5AC、GABAARα水平均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药低、中、高剂量组气道及肺组织病理变化轻于模型组,IL-1β、NE、TNF-α、TGF-β1、TIMP-1、MMP-9、MUC5AC、GABAARα水平均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药中剂量组IL-1β、NE、MMP-9、GABAARα均低于中药低剂量组;中药高剂量组IL-1β、NE、TNF-α、TGF-β1、TIMP-1、MMP-9、MUC5AC、GABAARα表达均低于中药低、中剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 麻射安金丸能改善COPD气道黏液高分泌状态,抑制气道重塑,可能与其减轻炎症损伤,抑制MUC5AC、GABAARα表达有关。

鲫鱼γ-氨基丁酸受体β_3亚基基因克隆及其分析

γ-氨基丁酸受体(GABAR)主要存在于脊椎动物和非脊椎动物的中枢神经系统(CNS),是氟虫腈、阿维菌素、硫丹和林丹等杀虫剂的作用靶标。为了阐明GABAR拮抗剂类农药影响鱼类安全性的分子作用机理,并研究其与农药分子的亲和作用,运用生物信息学方法,在NCBI基因组数据库中找到已经公布的同源的GABAARβ3亚基基因序列,通过多序列同源比对寻找高度保守区,再根据高度保守区设计特异性引物,通过RT PCR和RACE PCR技术,成功地克隆了鲫鱼GABAR A型β3亚基基因的全长cDNA序列(GenBank登录号:KC964110),该基因长2 767 bp,开放阅读框(ORF)为1 506 bp,编码502个氨基酸,与已知的其他物种β3亚基具有高度的保守性。应用qRT-PCR扩增,检测到该基因在鲫鱼不同组织器官的差异性表达。

老年帕金森病大鼠模型皮质中γ-氨基丁酸A受体β亚基含量的变化

目的探讨在帕金森病(PD)状态下皮质中γ-氨基丁酸(GABA)A受体各个β亚基表达水平的变化。方法分离6-羟基多巴(6-OHDA)制作成功的PD动物模型的皮质,应用高效液相(HPLC)法测定皮质中GABA的含量,应用qRT-PCR的方法检测GABA A受体中β1、β2、β3亚基的mRNA表达水平,应用Western印迹的方法检测GABA A受体中β1、β2、β3亚基的蛋白质表达水平。结果 PD模型大鼠注射侧的皮质中GABA的浓度较对照侧及正常对照的双侧均有不同程度的升高(P<0.05)。皮质中,β1、β2、β3亚基的mRNA表达均有所降低,β2和β3亚基降低更明显(P<0.01);各个亚基的蛋白水平的变化趋势与mRNA的变化一致。结论 GABA A受体的β1、β2、β3亚基在皮质中均有表达,且与GABA在PD动物脑组织中含量相适应,β1、β2、β3亚基均有受体下调的情况。

X染色体上脆性X智力低下基因1敲除模型小鼠针刺长强穴学习记忆及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达的影响

背景:X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠海马区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达低于野生型小鼠。目的:观察针刺长强穴对X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠学习记忆及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达的影响。方法:采用X染色体上脆性X智力低下基因1敲除纯合子小鼠雌雄各5只,一雌一雄合笼饲养。所繁殖幼鼠经基因型鉴定为X染色体上脆性X智力低下基因1敲除纯合子小鼠者,随机分为模型组、长强组、非穴组,各10只,另取野生型小鼠10只作为空白组。长强组小鼠采用平补平泻,行提插手法针刺长强穴1 min,频率160-200次/min,1次/d,连续治疗10 d;非穴组刺激小鼠右肋弓最低点上1 cm处;模型组及空白组每日只进行模拟抓取。结果与结论:与空白组相比,模型组小鼠水迷宫逃避潜伏期明显延长(P<0.05);而与模型组相比,长强组小鼠水迷宫逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达率增加(P<0.05);而非穴组小鼠水迷宫逃避潜伏期及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达率与模型组接近(P>0.05)。且针刺X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠长强穴后其海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基阳性细胞率与逃避潜伏期呈负相关(r=-0.554,P=0.001)。提示针刺长强穴可改善X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠的学习记忆能力,上调γ-氨基丁酸A型受体α1亚基在海马CA1区的表达。

A型γ-氨基丁酸受体α1亚基Cys^(166)-Leu^(296)片段的配体结合和结构性质

研究A型γ 氨基丁酸受体 (γ aminobutyricacidtypeA ,GABAAreceptor)α1亚基Cys166 Leu2 96片段的苯并二氮杂 (benzodiazepine ,BZ)结合位点及其结构特性 ,了解该片段结构与功能的关系 .利用PfuDNA多聚酶依赖的点突变技术将该片段的每一残基用丙氨酸替代 ,通过E .coli体系过表达 ,纯化得到各种突变蛋白 .运用圆二色性 (circulardichroism ,CD)技术测定突变蛋白的二级结构 ,借助荧光各向异性 (fluorescenceanisotropy ,FA)、荧光共振能量转移 (fluorescenceresonanceenergytrans fer,FRET)技术测定其与BZ荧光配基Bodipy FLRo 1986 (BFR)的结合强弱 .通过与野生型的比较 ,确定其残基是否与结构和或结合相关 .结果显示 ,突变体R191A、G2 12A、S2 13A、R2 14A及V2 79A的结合能力减弱 2～ 3倍 ,除V2 79A显著增加α螺旋外均无二级结构的改变 .E193A、S2 78A、V2 79A和P2 80A的α螺旋显著增多 ,N2 75A和R2 76A的α螺旋则显著减少 .推测Cys166 Leu2 96的Arg191,Gly2 12 ,Ser2 13 和Arg2 14 可能位于BZ的结合袋 ,其第 4个环区 (Glu2 10 Asn2 16)与结合密切相关 .Glu193 、Ser2 78和Pro2 80 参与维持β折叠结构 ,而Asn2 75和Arg2 76参与维持α螺旋结构 .Cys166 Leu2 96的第 9个环区 (Asn2 75 Pro2 80 )对其结?

α5亚基γ-氨基丁酸A受体在坐骨神经损伤大鼠认知功能中的作用

目的探讨α5亚基γ-氨基丁酸A受体(α5-GABA_(A)Rs)在坐骨神经损伤(SNI)导致的慢性神经病理性痛大鼠认知功能中的作用。方法选择成年雄性SD大鼠32只,8~10周龄,体重200~230 g。采用随机数字表法将大鼠分为四组:假手术组(N组)、SNI组(S组)、SNI+二甲基亚砜(DMSO)组(P组)、SNI+α5-GABA_(A)Rs反向激动剂组(L组),每组8只。N组仅暴露右侧坐骨神经及其三个终末支,不结扎。S组结扎右侧胫神经和腓总神经并剪断。P组和L组结扎右侧胫神经和腓总神经并剪断,于术后第22天新物体识别实验和术后第23天Y迷宫实验前30 min分别腹腔注射10%DMSO 1 ml和L6557081 mg/kg。于术前1 d和术后第3、7、14、21、22和23天测定四组机械缩足阈值(MWT),术后第22天行新物体识别实验,记录大鼠对新物体和旧物体的探索时间并计算辨别指数,第23天行Y迷宫实验计算自发交替百分比。采用Western blot法检测海马组织α5-GABA_(A)Rs和谷氨酸脱羧酶-67(GAD67)蛋白含量,采用免疫荧光法检测海马组织α5-GABA_(A)Rs与小清蛋白(PV)双阳性细胞数,α5-GABA_(A)Rs与生长抑素(SST)双阳性细胞数。结果与N组比较,S组、P组和L组术后第3、7、14、21、22和23天MWT明显降低(P<0.05),海马组织α5-GABA_(A)Rs蛋白含量明显升高(P<0.05),S组海马组织α5-GABA_(A)Rs与PV双阳性细胞数明显增多(P<0.05),α5-GABA_(A)Rs与SST双阳性细胞数明显增多(P<0.05)。与S组比较,L组对新物体的探索时间明显延长(P<0.05),辩别指数、自发交替百分比和海马组织GAD67蛋白含量明显升高(P<0.05)。结论α5-GABA_(A)Rs反向激动剂L655708可以增加坐骨神经损伤大鼠海马组织GAD67蛋白含量,逆转GABA能系统功能破坏,改善认知功能障碍,进一步显示α5-GABA_(A)Rs参与了慢性神经病理性痛导致的认知功能障碍。

γ-氨基丁酸受体ρ2亚基重组蛋白构建及表达

目的构建γ-氨基丁酸受体ρ2(GABA_CR ρ2)基因的原核表达载体,诱导重组蛋白GABA_CR ρ2表达,转染SH-SY5Y细胞,实现GABA_CR ρ2亚基重组蛋白一过性表达。方法构建重组质粒p ET-ρ2-GFP-Tat;应用免疫印迹法检测GABA_CR ρ2表达;应用Ni^(2+)亲和层析柱纯化重组蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测GABA_CR ρ2蛋白纯度;荧光显微镜下观察GABA_CR ρ2的转导作用及细胞定位。将SH-SY5Y细胞分为正常组和低氧低糖组,正常组分为正常对照组(高糖培养基培养且无蛋白转染)和正常转染组(高糖培养基培养且进行蛋白转染);低氧低糖组分为处理组(低氧低糖条件下培养)和处理转染组(低氧低糖条件下培养且进行蛋白转染);使用细胞计数试剂盒检测各组细胞活力。结果重组质粒p ET30-ρ2-Tat构建正确。纯化后的重组蛋白ρ2-Tat成功透过细胞膜转染SH-SY5Y细胞。正常对照组、正常转染组、处理组和处理转染组的细胞活力分别为(100.0±6.9)%、(89.3±3.6)%、(51.4±3.6)%和(66.1±8.5)%。正常对照组与正常转染组细胞活力比较差异无统计学意义(P>0.05);处理组细胞活力显著低于正常对照组(P<0.01),处理转染组细胞活力显著高于处理组(P<0.01)。结论重组蛋白ρ2在Tat转导肽介导作用下透过细胞膜,成功建立了一过性表达重组蛋白ρ2的SH-SY5Y细胞株,为研究ρ2亚基的功能提供了新的研究方法。

γ-氨基丁酸及其受体调控CD8^+T细胞活化

目的探讨γ-氨基丁酸(GABA)及受体对CD8^+T细胞增殖能力的影响。方法采用CD8^+T细胞磁珠分选试剂盒分选Balb/c小鼠脾脏的CD8^+T细胞;在CD3/CD28活化磁珠的作用下,以不同浓度的GABA刺激CD8^+T细胞,通过5-溴脱氧尿苷(Brd U)标记和流式细胞术检测CD8^+T细胞的增殖情况;通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)比较CD8^+T细胞活化前后GABA-A、GABA-B受体的表达。结果流式检测结果显示,GABA可抑制已活化的CD8^+T细胞的增殖,表现为CD152^+CD8^+T细胞明显减少;实时荧光定量PCR结果显示,仅在CD8^+T细胞活化时表达的GABA-A受体亚型为α2、α6和GABA-B受体亚型为1a;CD8^+T细胞活化后有明显增加的GABA-A受体亚型有α3、α5、β2、β3、γ1、γ2和θ,而GABA-B2R和GABA-B1b则在活化前和活化后均无表达。结论GABA可抑制已活化的CD8^+T细胞的增殖,其活化受GABA相关受体所调节,但其具体机制还有待于进一步探讨。

磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α通过调控跨膜受体蛋白1对子宫内膜癌病人中性粒细胞的影响

目的探究磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因通过调控跨膜受体蛋白1(Notch1)的表达对子宫内膜癌病人血中性粒细胞的影响。方法选择2020年3月至2021年9月在海南医学院第一附属医院接受治疗的50例子宫内膜癌病人(病例组)和50例健康女性(对照组)为分析对象。检测病例组和实验组血清中中性粒细胞(NE)、淋巴细胞(LY)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT),计算NLR指数(中性粒细胞计数/淋巴细胞计数)。逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测PIK3CA和Notch1的相对表达量。选取人原髓细胞白血病细胞/全反式维甲酸细胞(HL-60/ATRA细胞),在不同时间下进行培养,验证PIK3CA通过Notch1对NE的影响。结果病例组病人NE、LY、PLT指标以及NLR指数为(6.03±0.40)×10^(9)/L、(2.15±0.31)×10^(9)/L、(257.40±37.51)×10^(9)/L、(3.69±0.41)分别高于对照组的(5.13±0.50)×10^(9)/L、(1.68±0.16)×10^(9)/L、(202.10±23.39)×10^(9)/L、(2.44±0.39),病例组病人Hb水平为(138.72±13.79)g/L低于对照组Hb水平(149.52±10.65)g/L,说明子宫内膜癌病人炎症微环境异常。病例组PIK3CA和Notch1相对表达量为(3.351±0.496)、(3.467±0.440)高于对照组的(1.581±0.275)、(1.519±0.279)。HL-60/ATRA细胞培养实验验证了PIK3CA高表达促进Notch1高表达进而抑制NE的增殖。结论在NE中,Notch1表达量随着PIK3CA表达量升高而升高,NE细胞活力逐渐下降,初步证实了PIK3CA基因通过调控Notch1的表达对子宫内膜癌中NE产生影响。

Gabra3通过AKT/mTOR途径促进膀胱癌T24细胞侵袭和迁移

目的:探究γ-氨基丁酸受体亚基α-3(Gamma-aminobutyric acid receptor subunit alpha-3,Gabra3)基因对膀胱癌T24细胞凋亡、迁移和侵袭的作用及其机制。方法:TCGA数据库分析Gabra3基因在膀胱癌中的表达以及转移和生存的相关性。建立Gabra3过表达和Gabra3突变的T24细胞株,根据转染质粒不同,分为空白T24细胞(Control)、空pDONR223载体转染T24细胞(NC)、野生型Gabra3过表达T24细胞株(wt-Gabra3)、突变型Gabra3 T24细胞株(mut-Gabra3)。在回补实验中,分为转染突变型Gabra3 T24组(mut-Gabra3)、转染空pDONR223载体mut-Gabra3组(mut-Gabra3-NC)、转染野生型Gabra3过表达组(mut-Gabra3+wt-Gabra3)。用TUNEL染色检测T24细胞凋亡,细胞划痕和Transwell分别检测T24细胞迁移和侵袭,Western blot检测AKT/mTOR通路相关分子生物表达水平。结果:Gabra3基因在膀胱癌中显著高表达(P<0.05),生存曲线证实远处转移存在的患者生存期明显较短(P<0.05)。成功构建Gabra3过表达和突变的T24细胞株。与Control组相比,wt-Gabra3组细胞凋亡能力显著降低,迁移、侵袭能力显著增强(P<0.05),而mut-Gabra3组细胞凋亡显著增加,侵袭能力显著减弱(P<0.05);wt-Gabra3组细胞p-AKT、p-mTOR、p-4E-BP1、p-S6K蛋白表达均显示上凋(P<0.05),而mut-Gabra3组细胞上述蛋白无差异。在回补实验中,过表达wt-Gabra3的mut-Gabra3突变T24细胞凋亡能力受到抑制(P<0.05),迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05),并且该组细胞AKT/mTOR通路相关分子显著激活(P<0.05)。结论:外源性的未编辑的Gabra3可以促进膀胱癌T24细胞的迁移、侵袭能力,并且可能与激活AKT/mTOR途径通路密切相关。

大鼠局灶性脑缺血后GABA_A受体亚基α2和α3在梗死对侧皮层表达的动态变化

目的研究大鼠大脑中动脉缺血再灌注后,梗死对侧皮层氨基丁酸A(GABAA)受体α2和α3亚基的表达变化。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,分为MCAO组(n=18)和假手术组(n=18),分别于术后7d、30d和6个月断头取脑,采用免疫组织化学技术检测各组中梗死对侧皮层GABAA受体亚基α2和α3的表达情况。结果 MCAO组大鼠与假手术组大鼠相比,在7d时梗死对侧亚基α2和α3在皮层各个脑区改变无明显差异(P>0.05);30d和6个月时,亚基α3在各个脑区均显著升高(P<0.05);30d时亚基α2在梗死对侧的Par1和Par2脑区表达增加(P<0.05);6个月时,梗死对侧亚基α2在Par1脑区表达增加而在Par2脑区表达降低(P<0.05)。结论大鼠大脑中动脉缺血再灌注后梗死塞对侧皮层GABAA受体亚基α2和α3发生了广泛而长效的变化,这种变化提示脑缺血后GABAA受体功能受损,GABAA受体的改变可能参与了缺血后突触的重塑和神经网络重建。

海洛因诱导大鼠伏隔核NMDA受体亚基对GABA表达的影响

目的:研究大鼠伏隔核(NAc)在海洛因诱导条件性位置偏爱(CPP)状态及戒断状态下,NMDA受体亚基NR2B和NR2C对GABA表达的调控,探索GABA能神经元上NR2B和NR2C亚基在海洛因诱导中的作用。方法:将SD大鼠随机分为两组,即对照组和海洛因诱导组。海洛因诱导组又分为海洛因诱导CPP状态和海洛因戒断状态。采用海洛因小剂量递增法皮下连续注射7 d,建立海洛因诱导CPP模型,再自然戒断7 d,免疫组织化学染色检测各组大鼠伏隔核GABA和NR2B、NR2C亚基的位置关系。结果:采用小剂量递增法连续注射7 d海洛因,大鼠形成了稳定的海洛因诱导CPP模型。免疫荧光染色结果可见,各组大鼠伏隔核均有GABA、NR2B和NR2C表达,且GABA与NR2B及NR2C受体均有共表达。免疫组织化学结果显示,海洛因成瘾状态大鼠伏隔核GABA表达量明显高于对照组和戒断状态,具显著性差异(P<0.01)。戒断状态大鼠GABA表达量最低。结论:GABA的表达变化受NMDA受体亚基活性的影响;NR2B亚基对GABA的调控作用可能参与了海洛因依赖的复燃。

γ-氨基丁酸A型受体β3亚基在2,3,7,8-四氯二苯并二英诱导胎鼠腭裂模型中表达的研究

目的利用2,3,7,8-四氯二苯并二英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)诱导C57BL/6J胎鼠腭裂,检测γ-氨基丁酸A型受体β3亚基(gamma-aminobutyric acidt ype Areceptor beta 3 subunit,GABRB3)在TCDD诱导胎鼠腭裂模型中的表达变化情况,探讨腭裂的发生机制。方法将60只孕鼠按随机数字表法分为实验组和对照组,每组30只。妊娠第10.5天(gestation day 10.5,GD10.5)实验组以28μg/kg的TCDD单次灌胃,对照组以5.6ml/kg玉米油单次灌胃。分别在GD13.5、GD14.5、GD15.5、GD16.5、GD17.5处死孕鼠12只,每组处死6只。行胎鼠腭部形态学和组织学观察;应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测胎鼠腭部组织中GABRB3mRNA及蛋白表达;免疫组织化学及免疫荧光染色检测GABRB3蛋白的表达部位。结果实验组共36只胎鼠,GD17.5腭裂的发生率为100%(36/36);对照组共47只胎鼠,无腭裂发生(0/47)。实验组胎鼠腭突上抬在GD15.5完成,较对照组腭突上抬延迟1d;GD14.5、GD15.5、GD16.5、GD17.5实验组中GABRB3基因mRNA(分别为0.561±0.073、0.728±0.104、0.782±0.137、0.686±0.145)和蛋白表达(分别为0.288±0.013、0.404±0.017、0.399±0.012、0.307±0.010)均显著低于对照组GABRB3基因mRNA(分别为0.818±0.088、0.865±0.086、1.021±0.054、1.163±0.179)和蛋白表达(分别为0.481±0.017、0.456±0.009、0.474±0.016、0.529±0.015)(P<0.05);免疫组化及免疫荧光结果显示,GABRB3主要表达于腭突间质细胞和腭突中嵴上皮缝。结论TCDD诱导胎鼠腭突上抬延迟并最终导致腭裂发生可能与GABRB3降低有关;GABRB3可能在腭部发育的上抬和融合期发挥重要作用。

PIK3CA突变与乳腺癌临床病理特征及预后的相关性

目的探讨乳腺癌标本中磷脂酰肌醇激酶-3-催化亚基α(PIK3CA)突变与侵袭性乳腺癌临床病理特征及预后的相关性。方法收集2018年1月至2020年1月确诊为乳腺癌的181例患者临床病理资料,用免疫组织化学(IHC)法检测乳腺癌雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、Ki-67等指标,RT-qPCR检测乳腺癌中PIK3CA外显子9(exon9)和外显子20(exon20)的突变。结果181例侵袭性乳腺癌中PIK3CA突变70例,其中31例(44.28%)exon9突变、39例(55.71%)exon20突变。PIK3CA突变与乳腺癌分子分型有明显差异(P<0.05)。PIK3CA突变与乳腺癌的Ki67表达有明显差异(P<0.05)。34例(48.57%)HR+/HER2-组PIK3CA突变,36例(51.43%)非HR+/HER2-组突变,二者PIK3CA突变分布有明显差异(P<0.05)。PIK3CA突变患者病死率高于PIK3CA野生型(P<0.05)。结论PIK3CA突变与乳腺癌分子分型、Ki67增值指数及预后相关,可为患者精准治疗提供参考。

经前期综合征肝气逆证模型大鼠海马γ-氨基丁酸A受体β_2亚基mRNA表达

目的探讨大鼠海马γ-氨基丁酸A受体(GABAA受体)β2亚基mRNA表达的变化与经前期综合征肝气逆证的关系。方法采用半定量RT-PCR基因扩增技术对正常组、经前期综合征肝气逆证模型组和白香丹胶囊给药组大鼠海马中GABAA受体β2亚基的表达变化进行检测。结果与正常组大鼠相比,模型组大鼠海马GABAA受体β2亚基mRNA表达显著升高(P<0.05),调肝方药白香丹胶囊干预能改变该受体表达水平异常升高的状态。结论经前期综合征肝气逆证的发病机制与海马GABAA受体β2亚基有关。

α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体与γ-氨基丁酸受体磷酸化水平在小剂量氯胺酮联合异丙酚调整电休克治疗抑郁症疗效中的作用研究

背景电休克治疗（electroconvulsive therapy，ECT）是治疗重度抑郁症最有效的手段。研究证实，小剂量氯胺酮联合异丙酚与ECT具有抗抑郁协同治疗作用，其机制可能与α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体（α-amino-3-hydroxy-5-methvl-4-isoxazole-propionic acid receptor，AMPAR）、γ-氨基丁酸受体（gamma aminobutyric acid receptor，GABAR）活性相关。小剂量氯胺酮联合异丙酚对其受体磷酸化水平的调控在调整电休克治疗抑郁症疗效中起重要作用。目的对AMPAR、GABAR磷酸化水平在小剂量氯胺酮联合异丙酚调整电休克治疗抑郁症疗效中有关作用机制的研究进行回顾和总结。内容①电休克治疗抑郁症的研究现状；②氯胺酮与异丙酚在电休克治疗抑郁症中的应用；③AMPAR、GABAR在电休克治疗抑郁症机制中的作用。趋向深入研究小剂量氯胺酮联合异丙酚调整ECT治疗抑郁症的AMPAR、GABAR磷酸化水平调控机制可为临床上抑郁症的治疗提供新的思路和切入点。

妊娠糖尿病患者胎盘组织中γ-氨基丁酸A受体π亚基(GABRP)的表达及其对IR条件下滋养层细胞胰岛素敏感性的影响

目的 研究妊娠糖尿病(GDM)中γ-氨基丁酸A受体π亚基(GABRP)的表达及其对胰岛素抵抗(IR)条件下的滋养层细胞对胰岛素敏感性的影响与相关分子机制。方法 选取自2018年1月至2020年1月至成都中医药大学附属医院妇产科就诊的35例GDM(GDM组)与正常妊娠对照组(Normal组)的胎盘组织为研究对象。使用H-E染色及免疫组织化学染色观察两组胎盘组织的病理学改变及GABRP的表达;体外培养人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/Svneo(HTR-8),使用不同的胰岛素浓度探究胰岛素抵抗(IR)的最佳条件,Western blot法检测GABRP在IR模型中滋养层细胞内的表达;脂质体转染法过表达HTR-8细胞中GABRP,并将细胞分为4组:HTR-8组、IR组、IR+GABPR组及IR+vector组;葡萄糖消耗试验检测各组细胞对葡萄糖的摄取能力;Westernblot检测各组细胞中胰岛素敏感性相关蛋白:INSRα、INSRβ、IRS-1、IRS-2、p-PI3K/PI3K、GLUT4、p-AMPK/AMPK水平。结果 与对照组相比,GDM组胎盘组织中GABRP的蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.05);10-7mol/L胰岛素作用细胞36 h能成功构建滋养层细胞IR模型,同时该条件下GABPR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与HTR-8组相比,IR组、IR+vector组及IR+GABPR组中葡萄糖消耗量、细胞中INSRα、INSRβ、IRS-1、IRS-2、GLUT4的蛋白表达p-PI3K/PI3K与p-AMPK/AMPK值均显著降低(P<0.05);但与IR组或IR+vector组相比,IR+GABPR组中葡萄糖消耗量及上述蛋白表达或磷酸化水平均明显增加(P<0.05),前两组无明显差异(P>0.05)。结论 外源性上调伴有IR的GDM患者的胎盘滋养层细胞中异常降低的GABRP可能通过AMPK途径改善细胞对胰岛素的敏感性,从而在GDM中发挥一定的保护作用。

γ-氨基丁酸B型受体对结肠癌HCT116细胞周期的影响

目的利用人结肠癌细胞株HCT116细胞为研究模型,探究γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)/糖原合成激酶3β(GSK-3β)/核转录因子(NF-κB)信号通路对结肠肿瘤细胞HCT116周期的影响,明确GABABR调控结肠癌细胞增殖的机制。方法使用人结肠癌细胞株HCT116细胞为模型,构建针对GABABR的sh RNA,流式细胞仪检测不同刺激条件下HCT116细胞周期分布,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)法检测细胞的增殖能力变化。结果 GABABR可调控HCT116细胞的增殖。GABABR激动剂巴氯芬将HCT116细胞滞留在G1期,GSK-3β激动剂wort能逆转巴氯芬对结肠癌的该作用;GSK-3β抑制剂SB216763处理后,HCT116细胞增殖得到抑制,而NF-κB激动剂PMA可以阻断此作用;NF-κB激动剂PDTC能够回救敲低GABABR所引起的HCT116细胞增殖抑制,Akt抑制剂MK-2206 2HCl能逆转巴氯芬、SB216763对HCT116细胞增殖的抑制作用。结论 GABABR/GSK-3β/NF-κB信号通路可以调控结肠癌细胞增殖,通过抑制GSK-3β的活性,抑制NF-κB信号通路的激活,将HCT116细胞滞留在G1期。GABABR/GSK-3β/NF-κB信号通路可以作为临床预防和治疗结肠癌的潜在药物靶点之一。

作用于配体门控氯离子通道3-羟基异噁(噻)唑衍生物的研究进展

3-羟基异噁(噻)唑衍生物是一类重要的五元杂环化合物,具有丰富的药理和生理活性,在医药、农药、化工等领域有广泛的应用。部分3-羟基异噁(噻)唑化合物对γ-氨基丁酸和谷氨酸门控氯离子通道受体有显著的激动或拮抗作用。综述了三类典型的3-羟基异噁(噻)唑衍生物:蝇蕈醇类,5-(4-哌啶基)-3-羟基异噁唑类和鹅膏氨酸类,介绍了这三类化合物作为γ-氨基丁酸和谷氨酸受体激动剂或拮抗剂的应用,并对这些化合物的进一步分子设计进行了展望。对异噁(噻)唑环进行结构修饰是设计配体门控氯离子通道激动剂或拮抗剂的关键,在环上引入不同取代基或构造双环可能导致3-羟基异噁(噻)唑衍生物的药理活性发生显著变化,有助于发现药物或农药的苗头化合物。

α-氨基-3羟基-5-甲基4-异恶唑丙酸受体亚基GluR2在缺血性脑损伤中的作用

背景谷氨酸离子型受体α-氧基-3羟基-5-甲基4异恶唑丙酸（α-amino-3-hydroxy-5-mnethylisoxazole-4-propionate．AMPA）在缺血性脑损伤的发生发展过程中起重要作用。AMPA受体的GluR2亚基对其Ca2＋通透性的调控逐渐受到人们的重视，这为缺血性脑损伤的治疗提供了新的契机。目的探讨AMPA受体GluR2亚基在缺血性脑损伤过程中的调控作用，寻找新的缺血性脑损伤的治疗靶点。内容综述缺血性脑损伤后AMPA受体Ca2＋通透性与GluR2亚基的关系及影响因素。趋向单纯针对GluR2亚基，阻断缺血，缺氧后因此产生的钙超载，这将成为治疗脑中风可能的有效靶点。