γ-突触核蛋白通过调控自噬对结肠癌细胞起保护作用

目的:研究γ-突触核蛋白(γ-synuclein)对内质网应激诱导的结肠癌细胞自噬和凋亡的影响及其细胞保护作用。方法:针对稳定表达γ-synuclein siRNA的人结肠癌HCT116细胞和空载体HCT116细胞,通过基因表达谱芯片分析γ-synuclein下游差异基因,找到可能的自噬及凋亡相关分子。用毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)模拟内质网应激,采用Western blot检测γ-synuclein蛋白、自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、beclin-1、自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)和ATG7]及凋亡相关蛋白{多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]、pro-caspase-3和pro-caspase-9}的表达,CCK-8法检测细胞活力,荧光显微镜观察吖啶橙染色的酸性囊泡细胞器和绿色荧光蛋白标记的LC3,检测人结肠癌HCT116和SW480细胞自噬、凋亡及活力的变化。分别采用γ-synuclein siRNA、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)抑制剂PD98059、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)抑制剂SP600125和JNK激活剂anisomycin预处理,Western blot检测γ-synuclein及ERK和JNK信号通路相关蛋白表达,检测伴随的HCT116细胞自噬和凋亡的变化,研究γ-synuclein通过调控相关信号通路对细胞自噬的影响及其细胞保护作用。结果:TG模拟内质网应激诱导的结肠癌细胞自噬主要发生在早期(0~24 h),细胞凋亡主要发生在晚期(36~48 h)。内质网应激上调γ-synuclein的表达,并伴有自噬的增强。γ-synuclein早期(0~24 h)通过激活ERK和JNK通路促进自噬,晚期(36~48 h)通过抑制JNK通路抑制凋亡,从而起到保护细胞的作用。γ-synuclein可能在内质网应激诱导的细胞自噬和凋亡之间的过渡发挥一定的作用。结论:在内质网应激环境下,γ-synuclein通过调控ERK和JNK信号通路来促进自噬、抑制凋亡,发挥针对结肠癌细胞的保护作用,这为抗肿瘤治疗提供了一个潜在的思路。

血清胃泌素17、胃蛋白酶原、γ-突触核蛋白检测在老年消化道早癌、癌前病变诊断中的应用

目的分析血清胃泌素17(G-17)、胃蛋白酶原I(PG I)、胃蛋白酶原II(PG II)、γ-突触核蛋白(SNCG)检测在老年消化道早癌、癌前病变诊断中的应用价值。方法选取我院198例老年早期胃癌及癌前病变患者,均经内窥镜检查与病理证实,分为早癌组与癌前病变组,并取同期50例老年胃镜良性病变者为胃镜良性病变组,检测其血清G-17、PG I、PG II及SNCG水平,进行相关性分析,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析G-17、PG I/PG II联合SNCG对早期胃癌及癌前病变诊断效能。结果早癌组血清G-17、SNCG水平显著高于其余两组,且癌前病变组高于胃镜良性病变组(P<0.05);早癌组血清PG I水平、PG I/PG II显著低于其余两组,且癌前病变组显著低于胃镜良性病变组(P<0.05);PG I与G-17、SNCG呈负相关(P<0.05),G-17与SNCG呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析显示,四项联合诊断敏感度为93.4%、特异度为96.0%,曲线下面积(AUC)为0.987,大于G-17、PG I、PG I/PG II及SNCG单独诊断(0.960、0.824、0.810、0.961)。结论血清G-17、PG I、PG I/PG II联合SNCG检测对老年早期胃癌及癌前病变具有较高诊断效能。

γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化

目的对γ-突触核蛋白(synuclein)基因进行克隆,并对其表达及纯化条件进行优化。方法根据GenBank中γ-突触核蛋白的基因序列,设计PCR引物,从人脑cDNA文库中扩增γ-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;对培养温度、IPTG的用量、诱导时间等条件进行了优化;用SDS-PAGE和质谱分析表达的目标蛋白;用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化目标蛋白。结果γ-突触核蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为γ-突触核蛋白。经过纯化,得到纯度高达98%的γ-突触核蛋白。结论成功地在大肠杆菌中高效表达了γ-突触核蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究γ-突触核蛋白的晶体结构、生物学活性及功能,探讨其在肿瘤中的发病机制奠定了基础。

抑制γ-突触核蛋白表达对乳腺癌T47D细胞放射敏感性的影响

目的探讨γ突触核蛋白（γ-synuclein，SNCG）对乳腺癌细胞辐射敏感性的影响。方法合成SNCG的siRNA干扰序列并转染T47D细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从基因水平和蛋白水平检测SNCG基因的表达。实验设SNCGsiRNA干扰组（干扰组）、阴性对照组、空白对照组。各组细胞分别接受不同剂量γ射线照射，集落形成实验检测细胞放射敏感性，CCK-8实验检测细胞增殖能力变化，Western blot法检测AKT及mTOR磷酸化变化。结果SNCG siRNA干扰组较空白对照组的SNCG基因和蛋白表达都明显下降。在4、6、8Gy照射下干扰组的乳腺癌细胞数量明显低于未转染SNCG的对照组（t=5．449、8．882、21．503，P〈0．05），其中6Gy照射时，干扰组的细胞增殖能力在照后24、48、72h均较其他对照组低（t=5．603、4．839、6．115，P〈0．05），且干扰组AKT及mTOR磷酸化水平降低，而总的AKT及mTOR未见明显变化。结论抑制SNCG的表达可增强乳腺癌细胞对射线的放射敏感性．其机制可能与AKT信号通路被抑制有关。

尿液γ-突触核蛋白诊断膀胱癌的应用价值

目的探讨尿液γ-突触核蛋白(SNCG)对膀胱癌诊断的价值。方法收集2017年1月至2020年4月山西医科大学第五临床医学院和山西省肿瘤医院129例膀胱癌患者(恶性病变组)、157例泌尿系统良性病变患者(良性病变组)和177名健康体检者(健康对照组)的尿液标本,采用酶联免疫吸附试验检测尿液中SNCG浓度,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,确定SNCG诊断膀胱癌的灵敏度、特异度和准确度。结果恶性病变组尿液SNCG浓度[4.28 ng/m(l 0.53~8.79)ng/ml]高于健康对照组[1.44 ng/ml(0.56~3.51)ng/ml,H=122.9,P<0.01]和良性病变组[1.97 ng/ml(0.51~5.87)ng/ml,H=88.2,P<0.01],良性病变组高于健康对照组(H=17.1,P<0.01)。尿液SNCG鉴别恶性病变组与健康对照组的ROC曲线下面积(AUC)为0.871(95%CI 0.819~0.923,P<0.01),最佳临界值为2.79 ng/ml,诊断灵敏度和特异度分别为0.798和0.977;尿液SNCG鉴别恶性病变组与良性病变组的AUC为0.823(95%CI 0.769~0.877,P<0.01),最佳临界值为3.54 ng/ml,诊断灵敏度和特异度分别为0.713和0.917;恶性病变组与健康对照组+良性病变组相鉴别的AUC为0.848(95%CI 0.797~0.899,P<0.01),最佳临界值为2.87 ng/ml,诊断灵敏度和特异度分别为0.791和0.901。结论膀胱癌患者尿液中SNCG浓度高于泌尿系统良性病变患者和健康人群,尿液SNCG对膀胱癌的诊断具有较好的应用价值。

结直肠腺癌组织中β-微管蛋白Ⅲ和γ-突触核蛋白的表达及意义

目的 探讨β-微管蛋白Ⅲ（TUBB3）和γ-神经突触核蛋白（γ-SNCG）在结直肠腺癌组织的表达及意义.方法 应用免疫组织化学法检测180例结直肠腺癌中TUBB3和γ-SNCG的表达.结果 在结直肠腺癌中TUBB3和γ-SNCG的蛋白阳性率分别为82.2％和73.9％,二者差异无统计学意义（P＞0.05）;γ-SNCG蛋白阳性表达率与浸润深度、临床分期有关（P＜0.05）,与性别、年龄、分化程度无关（P＞0.05）;TUBB3蛋白阳性表达率与性别、年龄、分化程度、浸润深度、临床分期均无关（P＞0.05）;结直肠腺癌组织中TUBB3和γ-SNCG之间存在正相关关系（r=0.154,P＜0.05）.结论 结直肠腺癌组织中TUBB3和γ-SNCG两蛋白表达相近,γ-SNCG高表达与结直肠腺癌的浸润深度、临床分期有关,作为结直肠腺癌判断预后以及筛选成为靶向治疗的靶点还有待于进一步研究.

组织因子途径抑制物-2和γ-神经突触核蛋白在食管癌中的表达及其与肿瘤细胞浸润、转移和凋亡之间的关系

目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)和γ-神经突触核蛋白(synuclein gamma,SNCG)在食管癌组织中的表达及其与肿瘤浸润、转移和细胞凋亡之间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测82例食管癌组织及20例相应癌旁不典型增生组织和54例相应癌旁正常食管组织中TFPI-2、SNCG和基质金属蛋白酶-9(matrix metallo-proteinase-9,MMP-9)的表达,应用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:TFPI-2和SNCG在食管癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管组织中的阳性表达率分别为30.4%、60.0%、87.0%和63.4%、30.0%、3.7%,3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。TFPI-2和SNCG的表达与肿瘤淋巴结转移、浸润深度、TNM分期和分化程度密切相关(P<0.01),但与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位和肿瘤大体分型无关(P>0.05)。食管癌组织中TFPI-2与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.636,P=0.000),而SNCG与MMP-9的表达呈正相关(r=0.393,P=0.000)。TFPI-2和SNCG的表达与AI有关(P<0.05)。结论:TFPI-2可能通过抑制MMP-9的表达诱导细胞凋亡,抑制食管癌细胞的生长和转移,而SNCG可能在此过程中起着相反的作用,TFPI-2和SNCG有望成为有效的肿瘤标志物和肿瘤基因治疗的新靶点。

结直肠癌肝转移γ-神经突触核蛋白高表达的临床意义

目的:探讨结直肠癌(CRC)肝转移患者γ-神经突触核蛋白(SNCG)高表达的临床意义。方法:根据术后癌细胞转移情况将219例患者分为肝转移组114例和无肝转移组105例。采用免疫组织化学法,分析SNCG表达水平与CRC患者术后肝转移的关系及其与术后无病生存时间和总生存时间的关系。结果:SNCG阳性率在肝转移组为71.96%,无肝转移组为28.04%。Logistic多因素分析显示,SNCG表达是判断CRC术后是否有肝转移的独立因素(P<0.01)。SNCG阳性表达与阴性表达的肝转移患者术后无病生存时间分别为(48.70±5.40)个月和(78.75±4.23)个月,总生存时间分别为(51.10±5.20)个月和(80.29±4.12)个月,SNCG阴性患者的生存时间均明显长于SNCG阳性患者(P<0.01)。结论:SNCG表达水平越高,CRC患者术后肝转移的风险越高,无病生存期越短。CRC组织中SNCG高表达可以作为预测肝转移的指标,值得临床推广。

γ-神经突触核蛋白在电针改善大脑中动脉闭塞模型大鼠认知功能中的作用

目的:观察电针神庭、百会穴对大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠神经功能及海马中γ-神经突触核蛋白(SNCG) mRNA表达的影响,探讨SNCG与记忆认知能力之间的关系。方法:将18只SD大鼠平均随机分为电针组、模型组、假手术组。采用Longa改良线栓法制作MCAO大鼠模型,造模后24h后电针组每日电针神庭、百会穴20min,连续7d,模型组、假手术组予同等条件抓取。通过平衡木实验判断大鼠神经功能缺损状况;实时定量荧光PCR(q-PCR)检测脑组织SNCG mRNA表达。结果:电针组神经功能缺损评分大于假手术组,小于模型组;电针组海马中SNCG mRNA的表达大于假手术组,模型组海马中SNCG mRNA的表达小于假手术组,差异均有统计学意义。结论:电针能改善MCAO大鼠的神经功能状况,SNCG可能与认知功能神经系统之间存在相互作用。

慢病毒介导白介素-1β siRNA对脊髓钝挫伤大鼠运动功能的影响

目的:观察白介素-1β(IL-1β)小干扰RNA(si RNA)对脊髓钝挫伤(spinal cord contusion,SCC)大鼠运动功能的影响,并探讨其相关机制。方法:98只雌性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、单纯SCC组(SCC组)、空载体组(Vector组)和慢病毒干扰组(IL-1βSH组)。IL-1βSH组和空载体组术前48h在拟损伤脊髓节段局部注射IL-1βsi RNA或空载体。Sham组大鼠只剥离椎板不实施SCC,其余3组大鼠均造成T10SCC。每组各取大鼠5只,于术前当天以及术后1d、3d、5d、7d、14d采用Basso Beattie&Bresnahan(BBB)评分评估大鼠后肢运功功能。Sham组术后28d处死大鼠,取T10段脊髓,用实时荧光定量聚合酶链式反应技术(qRT-PCR)检测IL-1β和γ-突触核蛋白(SNCG)mRNA相对表达水平。SCC组于术后6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d取损伤段脊髓,检测IL-β和SNCG mRNA相对表达水平。Vector组和IL-1βSH组在术后7d取损伤段脊髓检测SNCG mRNA相对表达水平;在术后3d、7d、28d行心脏灌注、固定损伤脊髓,用免疫组织化学染色技术观察SNCG的免疫阳性细胞计数,并测定平均积分光密度(IOD)值。应用GeneMANIA分析IL-1β和SNCG的理论关系。结果:Sham组各时间点BBB评分均为21分,SCC后,SCC组评分各时间点均显著低于Sham组(P<0.05),IL-1βSH组评分在3d、5d、7d、14d时均显著高于Vector组(P<0.05)。SCC组术后6h、12h、7d时IL-1βmRNA表达量较Sham组显著性上调(P<0.05),SNCG mRNA表达量较Sham组显著性下调(P<0.05)。术后7d,IL-1βSH组SNCG mRNA表达水平显著高于Vector组(P<0.05)。IL-1βSH组损伤脊髓前角SNCG免疫阳性细胞数和IOD值在术后3d、7d、28d均优于Vector组,差异具有统计学意义(P<0.05)。GeneMANIA分析发现IL-1β和SNCG通过Cfd存在亚细胞定位关系。结论:IL-1βsi RNA可改善SCC大鼠后肢运动功能,上调SNCG蛋白和mRNA的表达,这可能与调节神经元可塑性、抑制线粒体凋亡途径有关。

γ突触核蛋白在前列腺癌恶性进展中的作用

目的观察γ-突触核蛋白（SNCG）在前列腺癌的表达及恶性进展中的作用。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot检测SNCG在前列腺细胞株的表达。组织免疫组织化学检测正常前列腺组织、前列腺炎、良性前列腺增生、高级别前列腺上皮内瘤及激素依赖性前列腺癌组织的SNCG表达。结果SNCG在激素依赖性前列腺癌细胞株CWR22、LNCaP的表达明显高于前列腺上皮细胞株RWPE—γ。SNCG在10例正常前列腺组织（1／10）、10例前列腺炎组织（0／10）及10例良性前列腺增生组织（2／10）几乎不表达；在高级别前列腺上皮内瘤（HGPIN）中低表达（3／10）；在122例激素依赖性前列腺癌组织有74例阳性表达。SNCG在激素依赖性前列腺癌中的阳性率为60．66％（74／122），其高表达与前列腺癌中高危因素[前列腺特异抗原（PSA）≥10μg/L、Gleason评分≥7、临床分期≥Tb组]及淋巴结转移相关。结论SNCG在激素依赖性前列腺癌中的异常表达，可能参与前列腺癌恶性进展。

SNCG在胆管癌组织中的表达及其临床意义

目的观察γ-突触核蛋白(γ-synuclein,SNCG)在胆管癌及胆管正常组织中的表达,探讨SNCG在胆管癌发生、发展及浸润转移中的作用及其临床意义。方法采用免疫组化染色方法检测60例胆管癌及34例胆管正常组织中SNCG蛋白的表达情况,并分析其与胆管癌临床病理特征的关系。结果胆管癌组织中SNCG表达阳性率为73.33%(44/60),高于其在胆管正常组织中的表达阳性率(5.88%,2/34),其差异有统计学意义(P<0.01)。SNCG蛋白的表达与肿瘤的浸润深度和淋巴结转移相关(P<0.01),但与患者的年龄、性别及肿瘤分化程度无关(P>0.05)。结论 SNCG蛋白的表达与胆管癌的发生、发展和浸润转移相关,可能在胆管癌的浸润转移中发挥重要作用。SNCG有望成为新的胆管癌的肿瘤标志物,为预后判断和制定相应的治疗方案提供依据。

胆管癌组织中SNCG的表达及其临床意义(英文)

目的:观察γ-synuclein(SNCG)在胆管癌和正常胆管组织中的表达,并探讨其在胆管癌发生、发展中的临床意义。方法:采用免疫组化方法检测SNCG蛋白在72例胆管癌组织及41例胆管正常组织中的表达水平,并分析其与胆管癌临床病理特征的关系。结果:SNCG蛋白在胆管癌组织中的阳性表达率为73.61%(53/72),高于其在胆管正常组织中的阳性表达率(4.88%,2/41),其差异有统计学意义(P<0.01)。SNCG蛋白的表达与肿瘤的淋巴结转移相关(P<0.01),但与患者的年龄、性别及肿瘤分化程度无关(P>0.05)。结论:SNCG蛋白的表达与胆管癌的发生、发展正相关,并对胆管癌的浸润转移发挥重要的促进作用。对SNCG蛋白的研究将可能为胆管癌的早期诊断提供新的肿瘤标志物,并为胆管癌的预后判断和诊治提供重要理论依据。