γ-聚谷氨酸-柠檬酸-顺铂复合物中顺铂含量测定方法的建立

目的建立γ-聚谷氨酸-柠檬酸-顺铂复合物中顺铂含量测定的方法。方法采用高效液相色谱法测定γ-聚谷氨酸-柠檬酸-顺铂复合物中顺铂含量，色谱柱为C18柱（4．6mm×300mm，5μm），流动相为含150mmol·L-1氯化钠的磷酸盐缓冲溶液（pH7．4），流速为0．65mL·min-1，检测波长为210nm。结果顺铂质量浓度在4～200μg·mL-1范围内，其色谱峰面积与质量浓度的线性关系良好（r=0．9997）。顺铂含量测定的加样回收率平均值为99．78％，RSD小于2％。测得γ-聚谷氨酸-柠檬酸-顺铂复合物中顺铂含量约为26％-28％。结论该法灵敏度高、专属性强、可用于γ-聚谷氨酸-柠檬酸-顺铂复合物中顺铂的含量测定。

喷雾干燥对大豆分离蛋白与γ-聚谷氨酸复合物的影响

为了解喷雾干燥对大豆分离蛋白(SPI)与γ-聚谷氨酸(γ-PGA)形成的复合物性质的影响,采用紫外分光光度计、激光粒度仪、zeta电位仪及荧光分光光度计测定不同浓度比下的SPI与γ-PGA复合物的浊度、粒径、ζ-电位及表面疏水性。结果表明,在SPI与γ-PGA浓度比为5∶6时,雾化使复合物解离,浊度显著下降,粒径基本不变;加热使SPI与γ-PGA浓度比为10∶1中过量大豆分离蛋白分子聚集、浓度比为3∶1中复合物聚集、浓度比为5∶6形成的复合物解离;在SPI与γ-PGA浓度比为5∶6时,喷雾干燥中由于剪切力和热机械应力作用使复合物解离成更小的粒径,引起复合物ζ-电位绝对值显著增加,表面疏水性增大,对蛋白质起到有效的保护作用。

聚谷氨酸-顺铂复合物的制备及其生物活性

本文介绍了制备一种γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，并考察其体外的抗肿瘤活性。主要通过生物发酵法获得γ-聚谷氨酸，酸降解法得到小分子γ-聚谷氨酸；利用PCR方法检测γ-聚谷氨酸．顺铂复合物对DNA的作用；利用MTT法来检测该复合物的体外抗肿瘤作用；利用流式细胞仪检测其对细胞凋亡的作用；利用小鼠体内实验检测其体内毒性作用。实验结果表明：成功获得γ-聚谷氨酸-顺铂复合物，该复合物载药率达10％～12％；该复合物对人肝癌细胞BEL7404、人非小细胞肺癌细胞H446和人结肠癌细胞RKO均具有显著的杀伤作用，能引起细胞凋亡（出现凋亡峰）；并且小鼠体内毒性试验表明该聚谷氨酸-顺铂复合物的毒性要比游离顺铂低。因此，γ-聚谷氨酸-顺铂复合物是一种有效的抗肿瘤药物，具有潜在的临床应用价值；生物发酵的γ-聚谷氨酸可用于药物载体，赋予药物新的特点。

γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物的制备及其生物活性

目的研究一种低毒性的顺铂复合物:γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物(γ-PGAasp-CDDP),考察其体外性质和体内毒性,并探讨可能的作用机制。方法γ-聚谷氨酸与天冬氨酸发生酰胺化反应制备γ-聚谷氨酸-天冬氨酸复合物,核磁共振对其结构进行表征;化学法制备γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物;常规方法检测该复合物稳定性;透析法研究药物缓释效果;MTT法检测复合物体外抗肿瘤细胞活性;流式细胞仪检测其对细胞凋亡的作用;小鼠体内实验检测其体内毒性。结果成功制备γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物,顺铂的有效结合率达30%;该复合物在常温中性环境下稳定;30h时顺铂的累计释放率达到30%;细胞实验表明复合物对Bcap-37(人乳腺癌细胞)和BEL7404(人肝癌细胞)具有显著的杀伤作用,小鼠体内实验表明该复合物的毒性比游离顺铂低。结论γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物仍然保留了游离顺铂的生物活性,在杀伤肿瘤细胞、引起细胞凋亡的同时,大大降低了体内毒副作用,其作用机制可能与实体瘤组织的高通透性、滞留效应(EPR效应)以及药物缓释作用有关,因此该复合物具有潜在的临床应用价值。

γ-聚谷氨酸对大豆分离蛋白凝胶特性的影响

为提高大豆分离蛋白的凝胶特性,利用γ-聚谷氨酸与大豆分离蛋白复合形成凝胶,采用激光共聚焦、质构仪和流变仪测定凝胶的微观结构、质构特性和流变性。结果表明,质量浓度为12 g/100 mL的大豆分离蛋白溶液与γ-聚谷氨酸复合比为10时,形成了尺寸较小且均一的球状空隙的凝胶,凝胶的持水性较强,凝胶具有较大的硬度,凝胶其黏弹性模量达到最大。γ-PGA与大豆分离蛋白复合能形成较好的凝胶并提高大豆分离蛋白的凝胶强度。

γ-聚谷氨酸对豌豆蛋白酸性环境下稳定性的影响

该研究利用豌豆蛋白(pea protein isolate,PPI)与γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamic acid,γ-PGA)静电作用形成可溶性复合物,改善PPI在酸性环境下的稳定性。通过浊度、Zeta电位、相图、微观结构对可溶性复合物形成的影响因素(pH、复合比例r、蛋白浓度)进行研究,以确定其形成条件,并对该条件下的蛋白溶解度、表面疏水性、乳化活性、乳化稳定性进行测定。结果表明,复合物的形成增大了体系的静电斥力,提高了PPI在酸性环境中的稳定性。在pH 4.5、高蛋白浓度(10.0 g/L)的条件下,质量复合比为1和2的体系形成了可溶性复合物,蛋白的溶解度和表面疏水性均显著增大(P<0.05),当质量复合比为1时,体系的乳化活性与乳化稳定性最好。

γ-聚谷氨酸载药纳米微球的制备与研究

以γ-聚谷氨酸(γ-PGA)为材料,以顺铂(CDDP)作为装载药物,制备CDDP/PGA-PAE纳米微球。通过纳米粒度仪、红外光谱、可见光分光光度计对所制得的颗粒的粒径、粒度分布、Zeta电位、结构、包封率和载药量进行表征。以MTT实验进行体外初步药效学考察。结果显示,CDDP/PGA-PAE纳米微球制备成功,纳米微球的平均尺寸为148.4±4.7 nm,PDI=0.266±0.032。MTT实验结果显示,CDDP/PGA-PAE纳米微球浓度为100μg/mL时,人结肠癌LoVo细胞的存活率仅为33.80%±1.01%,说明CDDP/PGA-PAE纳米微球具有较高的CDDP利用率,为聚谷氨酸的应用提供了理论基础。

γ-聚谷氨酸-D-半乳糖酯化衍生物-顺铂复合物的制备及其生物活性

介绍了制备一种γ-聚谷氨酸-D-半乳糖酯化衍生物一顺铂复合物[ poly γ-glutamic acid） -D- galactose esterifiable derivative -cisplatin complex compound, γ -D^＋ -DDP]，并考察其抗肿瘤活性。主要通过生物发酵获得大分子γ-聚谷氨酸[poly（γ-glutamic acid），γ-PGA]，利用酸降解得到可以作为药物载体的小分子γ-聚谷氨酸；利用凝胶色谱柱检验小分子γ-聚谷氨酸的分子量；利用MTT法检测该复合物的体外抗肿瘤作用。结果表明：成功获得γ-聚谷氨酸-D-半乳糖酯化衍生物-顺铂复合物，该复合物载药率达9．4％～10．2％；该复合物对人肝癌细胞BEL-7402具有显著的杀伤作用，能引起细胞凋亡（HE染色观察得到）。因此，γ-聚谷氨酸-D-半乳糖酯化衍生物-顺铂复合物是一种有效的抗肿瘤药物，具有潜在的临床应用价值；生物发酵的γ-聚谷氨酸可用于药物载体，赋予药物新的特点。

γ-聚谷氨酸-D-半乳糖酯化衍生物-顺铂复合物的制备及其肝靶向性分析

制备一种γ-聚谷氨酸-D-半乳糖酯化衍生物-顺铂复合物[Poly(γ-glutamic acid)-D-galactose esterifiable derivative-Cisplatin Complex Compound,γ-D+-DDP],并考察其体内靶向性。通过生物发酵获得大分子γ-聚谷氨酸[Poly(γ-glutamic acid),γ-PGA],利用酸降解得到可以作为药物载体的小分子γ-聚谷氨酸;利用凝胶色谱柱检验小分子γ-聚谷氨酸的分子量;利用HPLC检测释放的游离顺铂含量,得到复合物在小鼠体内靶向性分布情况;利用HE组织切片染色,观察脏器受损伤情况及靶向分布。实验结果表明:成功获得γ-聚谷氨酸-D-半乳糖酯化衍生物-顺铂复合物,该复合物载药率达9.4%～10.2%;HPLC结果表明注射复合物后,肝脏中药物显著增加而肾脏中药物分布明显减少,大大减少了肾毒性,肝靶向作用明显。因此,γ-聚谷氨酸-D-半乳糖酯化衍生物-顺铂复合物是一种有效的具有肝靶向性的抗肿瘤药物,具有潜在的临床应用价值;通过生物发酵获得的γ-聚谷氨酸可用于药物载体,赋予药物新的特点。

RGD肽修饰的聚谷氨酸-顺铂复合物的体外评价

目的:本研究以经柠檬酸改性的聚谷氨酸为载体,制备聚谷氨酸-顺铂复合物,接枝环RGD肽,以提高该复合物对肿瘤细胞的靶向性,同时对所得到的高分子-药物复合物体外理化性质和细胞毒作用、细胞摄取进行评价。方法:以改性聚谷氨酸侧链羧基与顺铂稳定配位,再与RGD肽进行化学偶联,得到修饰后的药物复合物,对复合物的载药量等性质进行了考察,同时采用人乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞进行了体外细胞生长抑制和细胞摄取行为的评价。结果:与未修饰的聚合物-药物复合物(23.12%)比较,本研究所制备主动靶向聚谷氨酸-顺铂复合物的载药量略有下降(16.73%),体外释放参数无显著差异,表现出明显的缓释特征。体外细胞毒实验结果表明,两类复合物保留了顺铂对肿瘤细胞的毒性,相比无RGD修饰的复合物,人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞对RGD修饰的复合物摄取增强。结论:RGD修饰的顺铂-聚谷氨酸复合物成功制备,有利于提高针对体内肿瘤的缓释、靶向治疗效果。

γ-聚谷氨酸-顺铂复合物的优化及稳定性研究

采用较稳定的合成工艺,活化γ-聚谷氨酸(γ-PGA)表面基团,合成γ-聚谷氨酸-顺铂复合物(γ-PGACA-CDDP)后,对其含量测定的方法学和稳定性进行研究。并对PGA-CA-CDDP复合物进行了核磁表征。采用HPLC法对聚谷氨酸顺铂复合物中顺铂含量测定进行方法学验证,并选择多种容器研究高温、高湿、高热条件下复合物中的顺铂含量变化。结果:实验结果表明,新工艺合成的γ-PGA-CA-CDDP中顺铂的含量测定方法,可达到方法学要求。稳定性试验证明在高温高湿光照下,敞口放置难以稳定。在40℃下避光保存,较为稳定。所选用HPLC法可准确测定复合物中顺铂含量。稳定性试验结果表明,γ-PGA-CA-CDDP在高热及高湿条件下不稳定,应于低温干燥避光条件下贮存。

新型顺铂给药系统的制备及其生物活性评价

以生物发酵法获得的γ-聚谷氨酸经酸降解后得到小分子γ-聚谷氨酸(γ-PGA),柠檬酸(CA)通过酯化反应修饰其侧链羧基制备γ-聚谷氨酸-柠檬酸(γ-PGA-CA),再将顺铂(CDDP)与γ-PGA-CA上的羧基相结合制备得载药复合物γ-PGA-CA-CDDP,凝胶色谱法测定分子量,OPDA法测定载药量及有效结合率,透析法结合HPLC研究其对顺铂的缓释效果,MTT法检测复合物的体外抗肿瘤活性,采用新鲜兔血检测载体材料及复合物的溶血性。实验结果表明:成功获得γ-PGA-CA及γ-PGA-CA-CDDP,该复合物相对分子质量约为66k,有效结合率达65%,载药率达16%～20%,48 h时顺铂的累计释放率达到50%,MTT检测显示该复合物对肿瘤细胞具有良好的抑制效果,相对于游离顺铂具有较低的毒性,且无溶血性。因此,γ-PGA-CA可作为药物载体,γ-PGA-CA-CDDP具有潜在的临床应用价值。