γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)基因工程菌的构建及其发酵条件的初步研究

利用PCR技术以Bacillus subtilisSYU20016基因组DNA为模板,扩增出1.8kb编码γ-谷氨酰基转肽酶的基因ggt,将其连接到温控表达载体pBV220,得到重组载体pBV220-ggt,重组载体在大肠杆菌JM109中得到表达。SDS-PAGE分析显示融合表达产物的分子量大小为65kDa,同核酸序列测定的推导值相符。对含有ggt的基因工程菌进行表达研究表明:发酵培养温度为30℃,pH为7.2,装液量为20ml(250ml锥形瓶)的条件下42℃诱导4h后,重组菌的γ-谷氨酰基转肽酶酶活力达到6U/ml。目前报道的非基因工程菌(枯草芽孢杆菌NX-2)酶活最高仅为3.2U/ml。

人肝癌组织中DSA强结合的γ-谷氨酰基转移酶单克隆抗体的制备

目的制备与欧蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰基转移酶(γGT)的单克隆抗体(mAb),并对抗体进行鉴定。方法以纯化的人肝癌组织DSA强结合的γGT为抗原,免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞融合,经ELISA筛选和有限稀释法获得稳定分泌mAb的细胞株。结果获得5株分泌抗DSA强结合γGT的mAb细胞株,其中3株分泌的mAb具有较高的特异性;ELISA法测定小鼠腹水mAb的效价≥625000;亚类鉴定mAb为小鼠IgG1。结论成功制备了抗DSA强结合γGT的单克隆抗体,为进一步建立免疫学检测方法奠定了基础。

糖尿病患者血清γ-谷氨酰基转肽酶水平变化及其检测价值

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)水平变化及其临床检测价值。方法选择临床确诊的住院和门诊T2DM患者126例,同期健康对照组50例,两组分别进行血清GGT和血糖(Glu)水平检测,进行对比分析。结果 (1)T2DM患者血清GGT和Glu水平均显著高于健康对照组(P<0.01)。(2)126例T2DM患者中有41例阳性,阳性率为32.5%。结论T2DM患者体内存在血清GGT的异常表达,T2DM患者伴血清GGT升高者较多见,血清GGT水平检测可作为T2DM病情判定以及治疗效果观察的指标,对预测T2DM发生、发展具有辅助诊断价值。

血清甘油三酯及γ-谷氨酰基转肽酶在诊断酒精性脂肪肝中的临床意义

脂肪肝(AFL)是一种病变主体在肝小叶，以肝细胞弥漫性脂肪变性为主要临床病理的综合征。目前，随着人民生活水平的日益提高，过量饮酒成为一个重要的公共卫生问题。近年来我国人均耗酒量逐年上升，因酒精导致的脂肪肝患者也明显增多。

γ-谷氨酰基转肽酶产生菌发酵培养基的优化及酶促反应研究

通过对枯草芽孢杆菌产γ-谷氨酰基转肽酶的发酵培养基进行优化分析,在35℃温度条件下培养时得到其最适发酵培养基组成是以葡萄糖为碳源、以酵母膏为氮源、发酵液初始pH值为7.5、装液量为60mL/250mL,并且探讨了γ-谷氨酰基转肽酶的部分酶促反应条件。

γ-谷氨酰基转肽酶和血脂指标在脂肪肝患者诊断中的应用价值

目的探讨γ-谷氨酰基转肽酶(γ-GT)和血脂四项指标检测在脂肪肝患者诊断中的应用价值。方法选择2018年4月下旬在该院门诊部参加体检,经B超检查诊断为脂肪肝的患者48例为脂肪肝组,以同期参检人员中腹部B超检查肝胆器官均无异常,且排除肝炎患者的48例作为健康对照组。采用东芝TBA-40RF全自动生化分析仪检测所有参检者的γ-GT和血脂四项指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)],并计算出其TC/HDL的比值,对两组结果进行对比分析。结果和健康对照组的数据相比较,脂肪肝组的γ-GT、TC、TG、LDL、TC/HDL比值等指标均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而HDL的检测指标明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论γ-GT和血脂四项以及TC/HDL比值等指标在脂肪肝患者诊断中有较高的的应用价值,能够为临床的早期诊断及后期的有效治疗提供辅助依据,值得临床参考应用。

血清前白蛋白、γ-谷氨酰基转肽酶在肝衰竭诊断中应用价值的探讨

目的初步评价肝病患者血清前白蛋白(PA)值和γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)两项指标在肝衰竭诊断中的价值。方法使用日立7600全自动生化分析仪测定40例肝衰竭患者和40例对照者血清的前白蛋白(PA)值和γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)值,并对检测结果进行统计学分析。结果与正常对照组相比,肝衰竭组前白蛋白(PA)值显著降低(P<0.05),而γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)显著升高(P<0.05);同时肝衰竭组受试者工作特性曲线(ROC)下面积(AUC)PA和GGT均较大,且两者的AUC都>0.9。结论血清前白蛋白(PA)和γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)是反映肝脏是否受损及评价受损程度的极敏感的指标,对肝衰竭的诊断具有较高的临床应用价值。

人肾组织γ-谷氨酰基羧化酶基因启动子区克隆与活性分析

目的克隆人肾组织γ-谷氨酰基羧化酶（GGCX）基因5’侧翼启动子区，并对其转录活性进行分析。方法对GGCX基因5’侧翼区进行生物信息学分析，预测其转录调控区域；从人肾组织中提取基因组DNA，以其为模板扩增GGCX基因启动子区，通过酶切鉴定及测序分析无误后，将其构建至萤光报告基因载体pGL3-basic中，瞬时转染至Hela细胞，检测萤光素酶水平，从而分析扩增启动子区的转录活性。结果成功克隆长度为804bp（-891～-88）的GGCX基因启动子片段，并构建相应的萤光素酶重组子pGL3-GGCX Promoter，转染Hela细胞48h后检测萤光素酶活性显示，pGL3-GGCX Promoter与空质粒对照pGL3-basic相对萤光素酶值分别为16．924-4、01与0．02±0．01，pGL3-GGCX Promoter萤光素酶活性显著增强（P〈0．05）。Matlnspector等分析显示该片段具有多个转录因子结合位点。结论成功构建含有GGCX基因启动子序列的萤光素酶报告系统，为进一步研究GGCX基因功能及其转录调控奠定了基础。

草酸钙尿石症患者肾组织γ-谷氨酰基羧化酶基因启动子序列分析及其活性研究

目的分析草酸钙尿石症患者肾组织γ-谷氨酰基羧化酶（GGCX）基因启动子序列多态性，并探讨该序列变化对启动子活性的影响。方法分别以42例草酸钙尿石症患者肾组织（尿石组）与31例非结石肾组织（肾肿瘤癌旁正常组织，对照组）基因组DNA为模板，PCR扩增GGCX基因5’-侧翼启动子区1329bp片段（-1270-＋58bp），电泳鉴定后，分别对两组PCR产物测序。筛选差异启动子序列克隆至萤光素酶报告基因载体pGL3-basic，转染293细胞，双萤光素酶检测启动子活性。结果与Ensembl正常序列比较，尿石组启动子片段测序共发现4处变异位点，-804bp处TT缺失（refsnp ID：rs11433794），-704bp处A→G、-511bp处A→G、-115bp处T→C。其中尿石组rsll43794SNP发生明显高于对照组（P〈0．05）。构建含rs11433794SNP位点的萤光素酶重组子pGL3-GGCX Promoter（804TT），与正常序列的重组子pGL3-GGCX Promoter比较，pGL3-GGCX Prorooter（804TT）转录活性明显下降（P〈0．01）。结论GGCX启动子区rs11433794SNP位点可能与草酸钙尿石症发生存在一定关系，该SNP位点可导致启动子转录活性下调，导致GGCX基因表达下降。

含氨基酸侧链的有机硅高分子催化剂(ⅩⅧ)——聚γ-(甘-谷氨酰胺基)丙基硅氧烷钯催化剂的合成及加氢活性

合成了不同N/Pd摩尔比的聚Y-(甘-谷氨酰胺基)丙基硅氧烷钯催化剂,表征了它们的结构。加氢实验表明,这种催化剂有很高的催化活性,对环戊二烯氢化分两步完成,对1,5-己二烯氢化则同时进行,讨论了溶剂。

植物血细胞凝集素对小鼠脾脏淋巴细胞γ－谷氨酰基转肽酶活性的影响

本文就植物血细胞凝集素（ＰＨＡ）作用的不同时间对小鼠脾脏淋巴细胞γ－谷氨酰基转肽酶（γ－ＧＴ）活性的影响进行了观察。结果表明，脾脏淋巴细胞转化率随给予ＰＨＡ时间的延长而上升，对照组＜２４ｈ组＜４８ｈ组＜７２ｈ组；淋巴细胞γ－ＧＴ活性于２４ｈ明显强于对照组（Ｐ＜０．００１），随着ＰＨＡ作用时间的延长其γ－ＧＴ活性逐渐下降，即４８ｈ组与对照组已无显著差异，而７２ｈ组却低于对照组（Ｐ＜０．００１）。可见ＰＨＡ在小鼠体内对γ－ＧＴ活性有很大影响。

多年生黑麦草LpGCS基因克隆及其在烟草中的初步功能验证

本研究以多年生黑麦草‘高帽2号’叶片为试材,根据同源基因的CDS序列设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,克隆了多年生黑麦草γ-谷氨酰基半胱氨酸合成酶基因LpGCS。该基因全长为1674bp(GenBank登录号:KJ551844),具有完整的开放阅读框(ORF),共1125bp;对其氨基酸序列特性、结构以及与其他8种同源基因氨基酸序列间的同源性进行了研究,预测该蛋白分子量为42.86kDa,属于不稳定类蛋白质,其蛋白质二级结构以α-螺旋为主;蛋白质氨基酸序列与其他8种同源基因氨基酸序列间同源性都比较高;此外,成功构建了该基因的正、反义植物表达载体pCAMBIA-Ubi-LpGCS+和pCAMBIA-Ubi-LpGCS-,并通过农杆菌介导法获得转正、反义基因烟草。对转基因植株和野生型烟草进行镉离子胁迫试验,生理生化指标测试结果表明镉离子胁迫处理10d后,转LpGCS+植株中MDA含量低于野生型,光合色素含量与POD、SOD、CAT活性均高于野生型;而转LpGCS-植株中MDA含量高于野生型,光合色素含量与POD、SOD、CAT活性均低于野生型。综上所述,LpGCS基因在烟草中的过量表达可以提高植株的耐镉胁迫能力,为进一步利用该基因转化多年生黑麦草培育抗重金属植株奠定基础。

重组大肠杆菌高效催化合成L-茶氨酸

利用重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/p ET28a-GGT催化L-谷氨酰胺和乙胺盐酸盐生成L-茶氨酸。首先对重组菌的催化反应条件进行优化,然后采用补加L-谷氨酰胺策略提高L-茶氨酸产量,最后利用HZ016阳离子树脂纯化L-茶氨酸。结果表明:以300 mmol/L L-谷氨酰胺和3 mol/L乙胺盐酸盐为底物,加入30 mg/m L湿菌体,在p H10.5、30℃下连续反应6 h时L-茶氨酸产量最高达34.65 g/L,摩尔转化率为64.88%。通过分批添加L-谷氨酰胺,L-茶氨酸产量最高可达60.20 g/L。经过分离纯化L-茶氨酸的质量分数达到94.60%。

胆淤指示酶升高程度在鉴别肝胆疾病黄疸中的价值

目的探讨胆淤指示酶升高程度在肝胆疾病黄疸鉴别诊断中的应用价值。方法根据黄疸的类型分为肝细胞性黄疸组和胆汁淤积性黄疸组,后者再分为肝内胆汁淤积组和肝外胆汁淤积组。分析血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平在肝细胞性和胆汁淤积性黄疸之间、以及肝内和肝外胆汁淤积之间分布的差异,并构建受试者操作特征(ROC)曲线。结果与肝细胞性黄疸组相比,胆汁淤积性黄疸组血清ALP与GGT水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.001)。根据ROC曲线计算血清ALP和GGT诊断胆汁淤积性黄疸准确度最高(特异度和敏感度之和最大)的临界值均为3×正常值上限(upperlimitofnormalvalue,ULN),特异度和敏感度分别为94.29%和85.71%、92.38%和99.2%。在胆汁淤积性黄疸患者中,肝外胆汁淤积组血清GGT水平显著高于肝内胆汁淤积组,差异有统计学意义(P<0.001),血清ALP水平在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。血清GGT≥12×ULN时,诊断肝外胆汁淤积特异度和敏感度分别为90.63%和72.58%。结论血清ALP、GGT升高大于正常值上限3倍时有助于鉴别肝细胞性和胆汁淤积性黄疸,GGT明显升高更有助于肝外胆汁淤积的诊断。

人精液中ACE,HYD,ACP和GGT检测的意义

目的探讨人精液中项体酶、透明质酸酶、酸性磷酸酶、γ-谷氨酰基移换酶与男性不育的关系.方法参照WHO标准方法,进行精液常规分析,按精子密度、活动率不同分为(正常、＜20、20～40、＞40)4个组.采用改良的Kennedy法检测精子顶体酶(ACE)活性.用Singer法测透明质酸酶(HYD)活性.采用磷酸苯二钠法检测酸性磷酸酶(ACP).用以Glucana为底物动力学方法测定精液γ-谷氨酰基移换酶(GGT)活性.结果98例不育各组的ACE、HYD、ACP和GGT活性明显低于正常生育组(P＜0.01),并且随精子密度和活动率减少而降低,随精子畸形率增高而下降.结论精液酶类的检测是评价精子成熟、活动率及穿卵受精能力的重要指标之一,是精液常规参数不可替代的,对男性不育的诊断治疗具有重要价值.

免疫球蛋白联合肝功能指标检测在肝衰竭诊断和预后判断中的价值

目的探讨血清免疫球蛋白(Ig)A、IgM、IgG与肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)联合检测在肝衰竭诊断及预后判断中的价值。方法以98例肝功能衰竭患者作为研究组,以70例健康体检者作为对照组,应用散射比浊法检测IgA、IgM、IgG水平,应用比色法检测血清ALT、AST、GGT水平。结果与对照组相比,研究组患者血清免疫球蛋白IgA、IgM、IgG水平均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,研究组血清ALT、AST、GGT水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。二分类Logistic回归分析结果显示,IgA、IgM、IgG、ALT、AST和GGT是肝衰竭发生的危险因素(P<0.05)。IgA、IgM、IgG、ALT、AST、GGT联合检测时,受试者工作特征曲线下面积(AUC)最大,为0.906。二分类Logistic回归分析结果显示,IgA、IgG、ALT、AST和GGT升高是肝衰竭患者治疗后死亡的危险因素(P<0.05)。IgA、IgM、IgG、ALT、AST、GGT联合检测时,AUC最大,为0.901。结论血清IgG、IgA、IgM、ALT、AST、GGT水平升高是肝衰竭发生及患者预后差的危险因素,免疫球蛋白和肝功能指标的联合检测对肝衰竭的诊断及预后判断具有较高价值。

猪肾“轻型”GGT的提纯及动力学研究

提纯出比活为３２０ｋＵ／ｇ蛋白的猪肾“轻型”γ－谷氨酰基移换酶（ＧＧＴ），经羟磷灰石柱层析后的最终产品每１００ＵＧＧＴ中仅含０．２６Ｕ的乳酸脱氢酶，不含其它污染酶类。聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳显示一条ＧＧＴ活性区带。其催化特性和人血清ＧＧＴ非常相似，最适ｐＨ为７．８。供体底物Ｌ－γ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺的米氏常数（ＫＤｍ）为０．９６ｍｍｏｌ／Ｌ，受体底物甘氨酰甘氨酸的米氏常数（ＫＡｍ）为１２．７ｍｍｏｌ／Ｌ。

联合检测血清ALP,GGT和AFP对肝癌的诊断价值

肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是中国及亚非地区消化系统中最常见的恶性肿瘤,发病率高,预后差,已经成为全球第五大常见肿瘤。2004年中国原发性肝癌的死亡率约为21.59/10万[1]。现在大都认为肝癌的早期诊断主要依靠B超、

免疫球蛋白与肝功能指标联合检测对肝衰竭的诊断价值

目的探讨免疫球蛋白与肝功能指标联合检测诊断肝衰竭的临床价值。方法选取汕头潮南民生医院2018年2月至2019年5月收治的80例肝衰竭患者为研究组,同期参加健康体检的82例健康人群为对照组。分别检测并比较两组免疫球蛋白指标及肝功能指标(ALT、AST、GGT)水平。对比上述指标单独检测及联合检测对肝衰竭的诊断价值。结果与对照组比,研究组患者血清Ig A、Ig M及Ig G水平均升高(P<0.05);与对照组比,研究组患者血清ALT、AST、GGT水平均升高(P<0.05);ROC分析结果显示,Ig A、Ig M、Ig G、ALT、AST、GGT单项指标诊断肝衰竭的AUC分别为0.712、0.736、0.756、0.814、0.792、0.804,均低于6项指标的AUC0.896(P<0.05)。结论免疫球蛋白及肝功能指标可作为诊断肝衰竭的重要指标,且6项联合检测诊断准确率更高。