皮肤T细胞淋巴瘤皮损与外周血中TCRγ基因重排的检测

目的:了解已确诊为皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)患者的皮损和外周血中T细胞受体γ链基因重排(TCRγGR)情况。方法:利用PCR测定21例CTCL患者皮损及外周血TCRγGR,扩增产物经琼脂糖及变性梯度凝胶电泳检测。结果:CTCL患者皮损中TCRγGR阳性率显著高于外周血(P<0.05);病程≥12个月的患者外周血中TCRγGR阳性率显著高于病程<12个月的患者(P<0.05);年龄≥60岁患者皮损和外周血中TCRγGR阳性率显著高于<60岁患者(P<0.05)。结论:在CTCL患者中存在TCRγGR,早期出现在皮损中的TCRγGR可作为CTCL辅助诊断,并有益于CTCL的早期诊断,外周血中检测出TCRγGR可作为皮损阳性结果的补充。

IL-2,IL-7,IL-15和IL-21在艾滋病免疫疗法中的应用前景(英文)

高效抗反转录病毒疗法可以有效地减少HIV的复制,但却不能完全恢复CD4+T细胞的数量。即使病毒血清学指标得到良好控制的病人,CD4+T细胞数也很难达到正常水平。目前研究表明:γ链细胞因子在始动、维持及调节免疫稳态和炎症反应中发挥重要作用。γ链细胞因子具有多重功能,如在健康及疾病中作为调节和效应分子发挥作用,因此,该家族因子、受体及其信号转导通路可成为治疗性干预的潜在靶点。γ链细胞因子IL-2,IL-7,IL-15和IL-21是T细胞稳态的重要调节者,因此成为升高T细胞水平和功能及增强AIDS免疫受累患者疫苗诱发病毒特异性T细胞应答等免疫治疗中的主要可选靶点之一。

急性非淋巴细胞性白血病免疫球蛋白和T细胞受体基因重排的研究及其意义

采用PCR法对25例不同时期急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）患者免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体γ链（TcRr）基因重排进行了研究。结果显示，3例（12．0％）发生IgH基因重排，3例（12．0％）出现TcRr基因重排，其中1例同时出现IgH和TcRr基因重排，对这种ANLL中序列失真现象的机制及其在白血病基因分型及检测微小残留疾病中的意义进行讨论。

等规聚丙烯在γ射线辐照下的链结构和结晶行为

利用凝胶渗透色谱(GPC)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和示差扫描量热(DSC)等手段对不同剂量γ射线辐照后等规聚丙烯(iPP)的分子链结构及结晶行为的变化进行了研究.结果表明,γ射线辐照使iPP的分子量下降,并在其分子链中产生羟基和羰基等极性基团,从而影响其结晶行为.在非等温结晶过程中,当辐照剂量≤50 kGy时,iPP的热结晶温度略有升高;增大辐照剂量,iPP的热结晶温度明显降低.iPP的熔融温度则随辐照剂量的增大而降低,且分裂成双峰.利用Avrami方程研究了辐照前后iPP的等温结晶动力学,发现辐照前后样品的Avrami指数n都在3左右,表明iPP的结晶遵循异相成核机理,且不受辐照剂量和等温结晶温度的影响,但总结晶速率随等温结晶温度和辐照剂量的升高而逐渐减小.探讨了iPP经过γ射线辐照后,分子链断裂、链结构变化和结晶速率之间的关系.

甲氨蝶呤对银屑病患者皮损T细胞内IFN-γ mRNA影响的研究

目的研究甲氨蝶呤(MTX)对银屑病皮损内γ干扰素(IFNγ)的影响,探讨其对银屑病的治疗机理。方法随机选择12例正常对照者和13例中重度银屑病患者,所有患者治疗前和治疗6周后行皮肤活检。利用荧光定量聚合酶链反应法测定12例正常对照和13例银屑病患者治疗前及治疗6周后皮损细胞内IFNγmRNA的定量表达。结果银屑病皮损细胞内IFNγmRNA水平明显高于正常对照者(P=0.001)。银屑病患者经过MTX治疗6周后,皮损明显改善,皮损细胞内IFNγmRNA的水平明显低于治疗前的水平(P=0.007),但与正常对照者皮肤比较差异无显著性(P=0.999)。结论MTX能调节银屑病皮损的局部免疫功能,抑制皮损T细胞内IFNγmRNA的过度表达,恢复Th1型细胞因子平衡,这可能是MTX治疗银屑病的作用机制之一。

γ-链对角占优矩阵与H-矩阵的判定

非奇异H-矩阵作为一类特殊的矩阵,在计算数学、矩阵理论、经济数学、控制理论等领域有着非常广泛的应用.本文根据M-矩阵和γ-链对角占优矩阵的特殊性质,通过构造正对角矩阵以及细分矩阵指标集的方法,利用特殊的不等式和不等式的放缩技巧,给出了几个判别非奇异H-矩阵的新条件,推广了近期的一些结果,最后给出相应的数值例子来说明判别条件的有效性.

Fc受体γ链基因启动子区-29位点基因多态性与系统性红斑狼疮关系的研究

目的 :探讨Fc受体γ链基因启动子区 - 2 9位点基因多态现象在中国南方人群中的分布及其与系统性红斑狼疮 (SLE)易感性和临床表现的关系。方法 :采用PCR -RFLP方法检测 180例SLE患者和 14 0例正常对照组Fc受体γ链基因启动子区 - 2 9位点基因型。结果 :SLE患者Fc受体γ链基因启动子区 - 2 9位点TT基因型频率(33 3% )及T等位基因频率 (5 4 4 % )明显高于正常对照组 (17 2 %及 4 2 9% ) (P <0 0 5 ) ,而GG基因型频率 (2 4 4 % )及G等位基因频率 (4 5 6 % )明显低于正常对照组 (31 4 %及 5 7 1% ) (P <0 0 5 )。T等位基因的比值比为 1 5 9。SLE患者各基因型频率及各等位基因频率与狼疮性肾炎 (LN)无相关关系 (P >0 0 5 )。结论 :SLE患者Fc受体γ链基因启动子区 - 2 9位点T等位基因与SLE发病相关但与LN的发生无关。

六味地黄汤活性部位3A的免疫调节作用机理研究

目的 :对六味地黄汤活性部位 3A的免疫调节作用机理进行初步研究。方法 :观察 3A对环磷酰胺 (Cy)处理小鼠 ,荷瘤小鼠和快速老化小鼠的T细胞亚群 ,B细胞产生IgG水平 ,γ干扰素 (IFN γ)mR NA的表达水平的影响及体外活性研究。结果 :口服给予 3A对 3种模型小鼠脾脏T细胞亚群的变化均具有不同程度的恢复作用 ,并促进快速老化小鼠脾细胞分泌IgG ,提高Cy处理小鼠脾细胞IFN γmRNA的表达水平。结论 :3A对免疫功能的改善作用与调节T。

结核性胸腔积液的诊治进展

结核分枝杆菌感染病人中大约5%发生结核性胸腔积液,HIV/AIDS的广泛流行使肺外结核发病率成倍增加,引起了世界各国包括发达国家在内的高度重视,及时准确诊断结核性胸腔积液,对临床医生常常是一个挑战。本文就结核性胸腔积液的免疫学发病机制、诊断及治疗进展作一综述。

抗γ-精浆蛋白特异性单链抗体的RTS表达及其生物学活性的检测

目的：制备人精浆蛋白特异性单链抗体,并检测其生物活性与靶向性。方法：应用快速翻译系统(RTS)表达γ-精浆蛋白特异性单链抗体,制备E4B7ScFv肽段和纳米颗粒偶联物,应用免疫沉淀反应、Western Blotting法、免疫荧光染色分析和细胞实验,研究该抗体进入前列腺癌细胞的活性。结果：成功地制备了抗γ-精浆蛋白特异性单链抗体纳米颗粒偶联物。该抗体可与前列腺癌细胞特异性结合,并可在15 min内将纳米磁珠带入前列腺癌细胞内,进入癌细胞的磁球数量随着细胞培养时间的延长而增多,对照实验显示该偶联物不能进入其它组织肿瘤细胞。结论：制备的抗γ-精浆蛋白特异性单链抗体生物活性与靶向性均较好,在前列腺癌的早期核磁共振显像诊断与靶向治疗上具有潜在的应用价值。

结核分枝杆菌感染的诊断

诊断结核病的金标准是从各种体液中分离得到结核分枝杆菌,然而有时要分离出结核分枝杆菌是很困难的。结核病在临床上可以没有特异性表现,胸部影像也可能缺乏相对特征性改变,故两者常不能作为确诊依据。因此,临床上需要敏感性及特异性均高的方法来提高结核病诊断的准确性。随着人们对结核分枝杆菌分子生物学的深入理解,新的诊断技术不断出现。本文分析全血干扰素γ测定、胸水中细胞因子检测、聚合酶链反应、血清学方法等技术对结核分枝杆菌感染的诊断价值。

Fc受体γ链基因3′端非翻译区3804位点T/G多态现象与系统性红斑狼疮发病无关

目的 :探讨Fc受体γ链基因 3′端非翻译区 (3′ -UTR) 380 4位点T/G多态现象在中国南方汉族人群中的分布及与系统性红斑狼疮 (SLE)的关系。方法 :采用PCR -RFLP方法分析Fc受体γ链基因 3′ -UTR 380 4位点T/G单碱基替换的多态现象。结果 :在 16 8例SLE患者和 12 0例正常人中只发现 1例SLE患者存在该位点的T/G杂合现象 ,该杂合现象经基因测序证实 ,其余均位TT型。结论 :Fc受体γ链基因 3′ -UTR 380 4位点T/G单碱基替换的多态性现象在中国南方汉族人群中少见 ,该位点的基因多态现象与SLE发病无关。

H-矩阵的一类实用递进判别法

利用γ-链对角占优的性质和不等式的放缩技巧,给出了H-矩阵的一类实用递进判别法,改进了近期的相关结果,并通过数值例子来说明所给结果的有效性.

抗人精浆蛋白单抗重链Fd段基因的克隆及其在HeLa细胞的表达

目的 获得鼠抗人精浆蛋白 m Ab重链 Fd段基因 ,并将其转染到 He L a细胞进行表达 .方法 从分泌抗人精浆蛋白 m Ab的杂交瘤细胞系 E4 B7中提取总 RNA,用 RT- PCR法获取重链 Fd段 c DNA.将其克隆入真核表达载体 pc D-NA3,用脂质体转染法转染 He L a细胞 ,并用免疫荧光染色方法检测重链 Fd段的表达 .结果 从分泌抗人精浆蛋白的鼠m Ab杂交瘤细胞系 E4 B7中克隆出了重链 Fd段基因 ,序列测定表明 ,VH 与鼠免疫球蛋白 MUSIGHAEI同源性最高 .将含重链 Fd段基因的真核表达载体 pc DNA3- E4 B7Fd中转染He L a细胞后 ,在 He L a细胞中检测到了重链 Fd段的表达 .结论 获得了序列正确的重链 Fd段基因 ,它在 He L a细胞中可以成功地表达 ,为进一步构建和表达 Fab奠定基础 .

抗Fc受体γ链单克隆抗体的研制及生物学特性鉴定

目的:制备Fc受体γ链的单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性进行鉴定,为研究受体γ链相关的疾病提供实验材料。方法:人工合成的蛋白多肽偶联后免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法筛选阳性克隆,Western blot、流式细胞术(FCM)检测鉴定抗体的特性及抗原识别位点。结果:通过细胞融合和亚克隆,共筛选出3株能稳定分泌抗体并且反应性好的杂交瘤细胞株5B6、7D3和8D4。其中7D3抗体反应性最强,2.5μg/mL与体内体外的γ链都能特异性反应。结论:获得了抗Fc受体γ链特异性的mAb,为进一步研究Fc受体γ链在相关疾病发生发展过程中所发挥的作用提供了良好的研究手段。

猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立

为了建立稳定表达猪FcγRⅢ(Porcine Fc gamma receptorⅢ,poFcγRⅢ)的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅢ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300 mg/L)和G418(400 mg/L)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环试验和流式细胞术对细胞系进行了鉴定。结果表明,成功构建了猪FcγRⅢ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系,表达于转染细胞表面的猪FcγRⅢ受体分子能与猪IgG特异结合。

慢性乙型肝炎患者CXC趋化因子Mig的表达

目的探讨慢性乙型肝炎(乙肝)患者CXC趋化因子Mig的表达水平及其与HBV-DNA、丙氨酸转氨酶(ALT)的相关性。方法以实时PCR法动态检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC)内MigmRNA的表达水平,以趋化因子与GAPDH比值为其最终含量。以ELISA法定量检测患者外周血中Mig蛋白含量。结果慢性乙肝患者PBMC内MigmRNA表达水平为0.6883±0.0693,与正常对照组相比差异有显著性(P<0.001)。Mig血清浓度为(609.6±73.8)pg/ml,与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)。患者PBMC内MigmRNA与其外周血中Mig含量显著相关(r=0.7157,P<0.001),外周血中Mig含量与血清ALT水平显著相关(r=0.7220,P<0.001),外周血中Mig含量与血清中HBV-DNA含量显著相关(r=0.7266,P<0.001)。结论慢性乙肝患者MigmRNA及血清Mig含量表达均增高,Mig介导了肝脏炎症细胞浸润,参与了乙肝慢性化病程。

重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿基因突变及免疫紊乱的特点

目的探讨重型珠蛋白生成障碍性贫血(β地中海贫血)患儿的基因突变类型及免疫紊乱的特点。方法多重等位基因特异聚合酶链反应(MASPCR)分析其基因类型。采用ELISA方法检测血浆IL6、IFNγ水平;采用免疫比浊法检测血浆IgG、IgA、IgM水平。结果重型β地中海贫血25例患儿中最常见的3种基因突变是CD17(A→T)、CD4142(-TTCT)、IVSⅡ654(C→T),占总数的94%。血浆IL6、IFNγ水平均明显高于正常对照(P均<0.05),IgG也明显高于正常对照组(P=0),而IgA、IgM则无明显变化(P>0.05)。结论MASPCR法进行基因诊断,具有操作简单、快速准确,一次可检测多种突变基因型,提高了基因诊断率。重型β地中海贫血患儿免疫系统中存在多种成分的免疫缺陷。

抗人精浆蛋白单链抗体基因在HeLa细胞中的表达和活性鉴定

目的 在HeLa细胞中表达抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单链抗体 (scFv)基因 ,并进行亲和活性测定。方法 在已经构建抗人γ SmscFv基因基础上 ,将基因克隆入真核分泌表达载体 pSecTag2 B中 ,并转染HeLa细胞进行表达。表达产物纯化后 ,用流式细胞仪进行亲和活性测定。结果 表达产物经SDS PAGE和Western印迹实验证实为约30ku的特异蛋白条带 ,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC 3细胞。结论 获得了可与PC 3细胞特异结合的抗人γ SmscFv 。

^(60)Coγ射线照射对人脆性组胺酸基因表达的影响

目的研究人脆性组胺酸三联体(fragilehistidinetriad,FHIT)基因在电离辐射损伤过程中的动态变化。方法以SV40病毒转染的永生化人支气管上皮细胞株BEAS2B细胞为照射对象,分为0.5、1、2、4、8、16Gy60Coγ射线照射剂量组和未照射对照组,分别于照射后24h、72h和10d,采用单细胞RT PCR技术以及PCR产物直接测序法检测FHIT基因的表达情况。结果对照组各时间点均未检出异常FHIT转录本,不同剂量照射组照射后各时间点均不同程度检出异常缺失FHIT转录本,照射后24h各组突变百分比分别为52.6%、66.7%、57.9%、76.5%、64.7%和81.3%,照射后72h各组突变百分比分别为17.6%、22.2%、50.0%、47.4%、47.1%和68.4%,照射后10d各组突变百分比分别为21.1%、25.0%、60.0%、57.9%、61.1%和68.4%;突变体经测序证实为外显子缺失性突变。结论电离辐射可引起FHIT基因的缺失突变。