HPLC测定柏子养心丸中五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量

目的:建立用 RP-HPLC 法测定柏子养心丸中五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素的含量。方法:样品用甲醇超声提取,过滤,取续滤液,采用 RP-HPLC 法直接测定,用十八烷基键合相,甲醇-水-冰醋酸(71:29:0.1)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),检测波长220 nm。结果:五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素分别在0.0046～0.460 μg(r=1.000);0.0054～0.540 μg(r=1.000);0.0055～0.553 μg(r=0.9998)范围内,质量与峰面积具有良好的线性关系。平均加样回收率(n=6)分别为94.2%～102.4%,99.1%～106.8%,98.3%～105.6%;RSD 分别为2.2%～3.8%,2.7%～4.1%,1.9%～4.0%。方法用于柏子养心丸中五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素含量的测定,RSD(n=6)分别为2.3%～4.0%,1.8%～3.5%,1.5%～4.2%。结论:方法具有灵敏度高、准确、快速和简便的特点,能用于柏子养心丸中五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素含量的测定。

五味子乙素对M146L细胞分泌β淀粉样蛋白的影响

目的:探讨五味子乙素对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)的影响。方法:体外培养稳定转染人类阿尔茨海默病β淀粉样前体蛋白(Amyloid beta-protein precursor,APP)基因及突变型早老素1(prsenilin-1,PS1)基因的CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞系(M146L),使之高效产生β淀粉样蛋白42(amyloid β-protein,Aβ_(42)),建立Aβ_(42)过度表达的细胞模型。加入待筛选的药物五味子乙素,用四甲基偶氮唑蓝比色法(microculture tetrazolium assay,MTT法)检测不同浓度的五味子乙素(1.67,5,15μg·mL^(-1))对M146L细胞毒作用,应用ELISA法(enzyme-linked immunosorbent assay)观察细胞分泌的Aβ_(42)的变化。结果:不同浓度的五味子乙素对M146L存活率没有影响,不具有细胞毒作用。5和15μg·mL^(-1)的五味子乙素对细胞分泌的Aβ_(42)有抑制作用,以高剂量组最为明显。结论:一定剂量的五味子乙素对M146L细胞分泌的Aβ_(42)有明显的抑制作用。

五味子乙素对小鼠免疫功能、腹水型肝癌细胞DNA合成和存活率的作用

五味子乙素200或400mg/kg 腹腔注射,能显著提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能和血清溶血素的含量,对腹水型肝癌细胞 DNA 合成的半抑制剂量为81μg、mL.其抑制机理为干扰了 DNA 的代谢,而不损伤 DNA 的模板.五味子乙素200mg/kg 连续或隔日腹腔注射.能显著提高移植腹水型肝癌小鼠的存活率.

超临界CO_2提取五味子木脂素的工艺研究

目的研究超临界CO2流体提取(SFE-CO2)北、南五味子木脂素的工艺。方法以五味子总木脂素提取率为考察指标,以提取压力、提取温度、CO2流量等3项因素设计3个水平进行正交试验设计,确定最佳工艺。用薄层扫描色谱法测定提取物中4种主要木脂素(五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲和五味子醇甲)的含量,并与传统的乙醇提取法比较。结果超临界CO2流体提取五味子木脂素的优选工艺为:提取压力25 MPa,提取温度35℃,CO2流量2 L/min。北、南五味子总木脂素的平均提取率分别为93.2%、95.5%,提取物纯度分别为13.0%、9.2%,北五味子提取物中五味子乙素含量2.89%。结论 SFE-CO2法提取效率高、选择性好、操作简便,明显优于传统的乙醇提取法,可用于提取五味子木脂素。

反相高效液相色谱同时测定五味子中五味子醇甲、五味子酯甲和五味子乙素的含量

本文建立了同时测定五味子中五味子醇甲、五味子酯甲和五味子乙素的反相高效液相色谱（RP—HPLC）方法。五味子先经超声提取后用高效液相色谱法测定。色谱柱为Kromasil C18柱（150×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水（75：25，V／V），紫外检测波长220nm，柱温30℃，流速1．0mL／min。结果显示，五味子醇甲在0．10～6．0μg范围内（r=0．9998），五味子酯甲在0．13～8．0μg范围内（r=0．9999），五味子乙素在0．03～2．0μg范围内（r=0．9999）线性关系良好。平均回收率五味子醇甲为98．6%，相对标准偏差（RSD）为1．4％（n=5）；五味子酯甲为97．1％，RSD为1．6％（n=5）；五味子乙素为97．7％，RSD为1．1％（n=5）。本法准确、快速、灵敏度高，可用于五味子中有效成分的定量分析。

五味子乙素抑制M146L细胞Aβ_(42)生成的机制研究

目的研究五味子乙素抑制M146L细胞A4β2生成的机制。方法体外培养高效表达Aβ42的M146L细胞株,分别加入不同浓度的五味子乙素(1.67,5.00和15.00μg.mL-1)、β分泌酶抑制剂(S4562,100.00μg.mL-1)和γ分泌酶抑制剂(S2188,13.68μg.mL-1)。用CCK-8(cell counting k it-8)比色法检测不同处理对M146L细胞活性的影响;用ELISA法测定M146L细胞所分泌的Aβ42的变化;用W estern b lotting检测APP的β分泌酶剪切产物C99蛋白的含量变化,结合用β和γ分泌酶活性试剂盒,检测五味子乙素对这两种酶活性的影响。结果不同处理因素对M146L细胞的存活率均无影响,不具有细胞毒作用。中、高剂量的五味子乙素均不同程度地抑制M146L细胞分泌A4β2及γ分泌酶的活性,但都不改变M146L细胞C99蛋白的含量及β分泌酶的活性。结论五味子乙素可抑制γ分泌酶活性,其降低A4β2生成是通过抑制γ分泌酶的活性来实现的。

高效液相色谱法测定五味子和含五味子的制剂中五味子乙素及多种活性成分时流动相体系的选择

建立了用高效液相色谱法测定五味子和含五味子的制剂中五味子乙素的流动相体系。用Shim-pack VP-ODS(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,在柱温30℃、检测波长285nm、流速1.0mL/min的条件下,用不同的流动相组成及其不同比例研究了五味子提取液中3种木脂素(五味子乙素、安五脂素和五味子甲素)的保留时间及其分离情况,从中选择测定五味子乙素的最佳流动相体系。结果表明,在甲醇-水、甲醇-冰醋酸-水的流动相体系中,安五脂素和五味子乙素很难完全分离;而在乙腈-甲醇-水和乙腈-冰醋酸-水流动相体系中,3种木脂素可很好地分离。以乙腈-甲醇-水(体积比为17:58:25)为流动相测定五味子和护肝片中3种木脂素的含量,相对标准偏差(n=4)为0.95%～5.8%,平均加标回收率为94.50%～105.6%。将该流动相体系用于供试品中3种木脂素含量的测定,分离效果好,结果令人满意。

HPLC测定安神补心丸中的五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮Ⅱ_A

目的测定安神补心丸中的五味子醇甲、酯甲、甲素、乙素和丹参酮ⅡA。方法样品用超声提取，采用RP—HPLC法直接测定，用十八烷基键合相，乙腈-水-冰醋酸（60：40：0．1）为流动相，流速1ml·min^-1，检测波长220nm。结果五昧子醇甲、酯甲、甲素、乙素和丹参酮ⅡA分别在0．0006～0．1230μg（r=0．9999）、0．0013～0．2550μg（r=0．9998）、0．0017～0．3391μg（r=0．9997）、0．0026～0．5260μg（r=0．9999）、0．0020～0．4000μg（r=0．9999）与峰面积具有良好线性关系。平均加样回收率分别为97．3％、98．8％、101．1％、98．1％和100．2％。RSD（n=5）分别为3．1％、2．2％、3．7％、3．2％和2．0％。方法用于安神补心丸中五味子醇甲、酯甲、甲素、乙素和丹参酮ⅡA的含量测定，RSD（n=5）分别为1．1％～3．7％、1．7％～3．8％、2．8％-4．8％、3．1％～4．4％和1．8％～3．1％。结论所建方法灵敏度高，准确，简便快速。

南北五味子醇提液的荧光光谱鉴别

建立了用荧光光谱法快速鉴别五味子和部分含五味子制剂中五味子药材种属的方法。研究了五味子中的五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和安五脂素5种活性成分以及南北五味子和护肝片的乙醇提取液的荧光光谱,并用高效液相色谱测定了供试品中5种活性成分的含量。结果表明,安五脂素和五味子乙素具有强荧光性且峰形差异显著,五味子甲素和五味子醇甲的荧光性较弱,而五味子酯甲不具有荧光性;南北五味子的主要荧光物质分别为安五脂素和五味子乙素,据此可用乙醇提取液的荧光光谱快速鉴别南北五味子。

广东海风藤中木脂素和五味子乙素的含量测定

目的:对广东海风藤药材超临界二氧化碳萃取物中木脂素的含量进行测定。方法:采用超临界二氧化碳萃取广东海风藤药材,萃取压力10MPa,萃取温度45℃,分离压力5MPa,分离温度50℃。采用比色法和HPLC法分别测定了萃取物中总木脂素和五味子乙素的含量。结果:广东海风藤药材超临界二氧化碳萃取物中总木脂素平均含量以五味子酯甲计为96.6mg·g-1,RSD为2.77%;五味子乙素平均含量为25.53mg·g-1,RSD为2.71%。结论:采用超临界二氧化碳萃取法能有效地提取出广东海风藤中木脂素成分。本实验所采用方法可作为广东海风藤药材及其制剂的质量控制方法。

超临界CO_2萃取广东海风藤木脂素成分工艺研究

目的:优化超临界CO2萃取法提取广东海风藤木脂素成分的工艺参数。方法:采用超临界CO2萃取法,分别以总木脂素含量和五味子乙素含量为指标,对萃取温度、萃取压力、粉碎粒度和CO2流量等影响因素进行考察。结果:萃取压力和粉碎粒度对总木脂素含量和五味子乙素含量的影响具有显著性意义,萃取温度和CO2流量的影响无显著性意义。结论:采用超临界CO2萃取法提取广东海风藤中木脂素成分的最佳工艺条件为:药材粉碎成细粉,萃取压力10 MPa,萃取温度45℃,CO2流量为30 L/h。

复方五味子素B对人结肠癌细胞多药耐药性逆转作用及其机制研究

目的:研究复方五味子素B(γSC)对耐奥沙利铂人结肠癌细胞(THC-8307/OXA)多药耐药性的逆转作用及作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测奥沙利铂(OXA)和γSC的细胞毒性;碱性磷酸酶免疫组织化学法和Western blot检测γSC对THC-8307/OXA细胞GST-п蛋白水平的影响。结果:γSC(6.0,12.5,25μg·ml^(-1))对人结肠癌细胞(THC-8307)和THC-8307/OXA无显著毒性作用(P>0.05),OXA对THC-8307的IC_(50)为0.06μg·ml^(-1),而对THC-8307/OXA的IC_(50)为2.32μg·ml^(-1),THC-8307/OXA较THC-8307耐药性提高39倍,γSC(6.0,12.5,25μg·ml^(-1))能使OXA对THC-8307/OXA细胞的IC_(50)从2.32μg·ml^(-1)依次下降至0.370,0.128,0.057μg·ml^(-1),逆转倍数分别为6.2,18.1,40.7倍。碱性磷酸酶免疫组织化学法和Western blot检测γSC(12.5μg·ml^(-1))处理48 h后,THC-8307/OXA细胞GST-п蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论:γSC具有逆转耐奥沙利铂人结肠癌细胞的MDR作用,其作用机制与下调GST-п表达有关。

黑龙江不同产地五味子中五味子乙素的含量比较

目的测定黑龙江地区不同产地五味子中五味子乙素的含量。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Lichro-spher5-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲醇-水(80:20);检测波长为254nm;柱温为30℃。结果黑龙江各地五味子中五味子乙素的含量均大于0.3%,其中以牡丹江所产五味子中所含五味子乙素最高。结论本实验方法简便、准确、重现性好。

复方五味子素B逆转多药耐药性人结肠癌细胞THC-8307

目的探讨复方五味子素B(γSC)逆转人结肠癌细胞THC-8307/OXA多药耐药的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定药物对细胞的毒性作用;通过Western blot法分析药物对THC-8307细胞P糖蛋白(P-gp)多药耐药相关蛋白表达的影响。结果γSC在浓度<12.5 mg/L时对THC-8307和THC-8307/OXA无毒性作用,12.5 mg/L的γSC可明显逆转THC-8307/OXA耐药细胞的耐药性。THC-8307细胞不表达P-gp,THC-8307/OXA细胞P-gp高表达。加入γSC后THC-8307/OXA细胞P-gp蛋白的表达明显下降。结论γSC具有逆转THC-8307/OXA的作用,主要通过下调肿瘤多药耐药细胞内P-gp的表达逆转耐药。

五味子乙素对大鼠肝星状细胞增殖和胶原基因表达合成的影响

目的观察五味子乙素在大鼠肝星状细胞(HSCs)增殖,胶原表达合成方面的作用。方法经在体灌流消化大鼠肝脏分离HSCs,培养于DMEM培养基中,用3H-TdR和3H-pro掺入试验测定五味子乙素对HSCs的增殖和胶原合成影响,并用原位杂交方法探讨了其对HSCⅠ、Ⅲ型前胶原基因的表达作用。结果对于培养活化的HSCs,五味子乙素对HSCs摄取3H-TdR没有明显影响,但在40μmol/L时,剂量依赖地抑制HSCs摄取3H-proline,并在80μmol/L降低Ⅰ型前胶原基因表达(P<0.05)。结论五味子乙素具有降低HSCs胶原基因表达合成作用。

高效液相色谱法同时测定五味护肝胶囊中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素含量

目的建立同时测定五味护肝胶囊中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素含量的高效液相色谱法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Waters sunfire TM C18柱(150 mm×4.6 mm5,μm);以乙腈-水(56∶32)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm。结果五味子醇甲进样量的线性范围为0.087 04～0.696 32μg,r=0.999 98,平均回收率为103.40%,RSD为1.42%(n=6);五味子甲素进样量线性范围为0.018 304～0.146 43μg,r=0.999 98,平均回收率为97.45%,RSD为0.88%(n=6);五味子乙素进样量的线性范围为0.040 80～0.326 4μg,r=0.999 96,平均加样回收率为95.88%,RSD为0.76%(n=6)。结论该方法简便、快速、准确,重现性好,可作为该制剂的含量测定方法。

RP-HPLC测定降酶灵胶囊中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量

目的 :建立RP HPLC法测定降酶灵胶囊 (五味子提取物 )中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量。方法 :采用KromasilTM C18(2 0 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,甲醇 水 (75∶2 5 )为流动相 ,流速 1.0mL·min-1;检测波长为 2 2 4nm。结果 :五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分别在 0 .0 2 2 2 8～ 0 .2 4 5 0 8μg(r =0 .9996 ) ,0 .0 2 188～ 0 .2 4 0 6 8μg(r =0 .9997) ,0 .0 1975～ 0 .2 172 μg(r =0 .9996 )范围内线性关系良好。平均加样回收率 :五味子醇甲为 10 1.87% ,RSD为 1.37% (n =5 ) ;五味子甲素为 99.75 % ,RSD为 0 .94 % (n =5 ) ;五味子乙素为 10 0 .90 % ,RSD为 0 .99% (n =5 )。结论 :本法灵敏度高、重现性好 ,准确。

北五味子配方颗粒提取工艺的正交设计试验优选

目的:优选北五味子配方颗粒的最佳提取工艺。方法:采用正交设计安排试验,以提取率、五味子甲素(DSSD)、五味子乙素(γ-SSD)的含量作为考察指标,考察用水量、提取时间、提取次数对五味子配方颗粒提取工艺条件的影响,优选出合理的提取工艺。结果:在既定的HPLC测定方法下,北五味子配方颗粒中DSSD及γ-SSD含量分别在0.265～1.590μg和0.638～3.188μg范围内,进样量与峰面积的线性关系良好(r=1.000 0和r=0.999 9),平均回收率分别为101.12%和100.38%,RSD值分别为1.75%和1.10%。影响北五味子配方颗粒提取率、DSSD、γ-SSD含量的主要因素依次为提取次数、提取时间、用水量,最佳工艺条件为:加水量为10倍,提取3次,每次2 h,测得DSSD平均含量为0.024%,γ-SSD平均含量为0.049%,平均提取率为36.12%。结论:该提取工艺具有提取率稳定性好、五味子甲素及五味子乙素得率高、操作简单且成本较低的特点,可为五味子配方颗粒的提取工艺提供参考。

HPLC测定生脉胶囊中五味子甲素和乙素的含量

目的 采用HPLC测定生脉胶囊中五味子甲素、乙素的含量 ,以控制成品的质量。方法 采用Shim -packODS色谱柱 ,柱温 2 5℃ ;甲醇 -水 (78∶2 8)为流动相 ;流速 1 0ml·min-1;检测波长 2 5 4nm。结果和结论 所用方法简便、准确、可靠 ,可用于生脉胶囊的质量控制和五味子甲素。

五香血藤的薄层色谱研究

目的：建立五香血藤的薄层色谱鉴别方法。方法：采用硅胶GF254板分离五香血藤中的化合物，以石油醚（30℃-60℃）-甲酸乙酯（5：1）和正己烷-乙酸乙酯（8：5）为展开系统，UV254下分别检视不同地区五香血藤中的五味子甲素、五味子乙素与五味子醇甲、五味子酯甲。结果：建立了一种快速、有效的五香血藤的薄层色谱鉴别方法，采用此法检测，斑点清晰，分离效果好。