早期嗅觉剥夺对SD大鼠海马齿状回及其所含突触外GABA_A受体δ亚基的影响

目的探讨早期嗅觉剥夺对SD大鼠海马齿状回及其所含GABAA受体δ亚基表达的影响。方法将3日龄与8日龄SD乳鼠各36只均随机分为空白对照组、实验组、假手术组,共6组。其中通过三氯甲烷滴注法对实验组乳鼠的嗅粘膜进行破坏;假手术组用生理盐水替代;空白对照组不给予任何处理。各组在4周龄时断头取脑组织进行尼氏染色观察;免疫组织化学相对定量分析海马齿状回中突触外GABAA受体δ亚基相关蛋白的表达;实时荧光定量核酸扩增(q-Pcr)定量分析海马中突触外GABAA受体δ亚基mRNA的表达。结果尼氏染色显示3d实验组乳鼠海马齿状回神经元细胞排列紊乱,细胞间距加大,胞质内尼氏体减少,齿状回颗粒细胞边界不齐、间距增宽、排列松散紊乱。3d实验组乳鼠与8d组比较,海马齿状回神经元数目差异均无统计学意义(P>0.05)。而3d实验组乳鼠中海马齿状回突触外GABAA受体δ亚基相关蛋白和mRNA的表达均下降,分别与3d假手术组和空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。在8d实验组、8d假手术组和空白对照组之间结果进行两两比较中,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 3d实验组SD鼠海马中突触外GABAA受体δ亚基相关蛋白及mRNA表达显著减少,表明早期嗅觉剥夺对海马齿状回及其所含突触外GABAA受体δ亚基表达的降低有影响。

电压依赖性钙通道的α_2δ亚基和疾病及药物靶点的关系

目的介绍电压依赖性Ca2+通道(Cav)的亚单位之一α2δ的结构和功能以及与疾病的关系。方法对近期文献进行综述。结果电压依赖性Ca2+通道由5个亚单位组成。α2δ亚基由α2与δ亚基联接,共同对组成通道孔道的α1亚基进行辅助,以调解外钙内流。介绍了α2δ亚基的结构和在体内的分布,以及与疾病的关系(尤其是癫痫、偏头痛和神经源性疼痛)。gabapentin类药物是α2δ1和α2δ2亚基的小分子配体,通过α2δ亚基起治疗作用。结论α2δ亚基与疾病有关联,也是电压依赖性钙通道的分子靶点,值得进一步研究。

酿酒酵母ATP合酶δ亚基融合蛋白的构建、表达及生物学功能分析

利用分子克隆手段构建了酿酒酵母ATP合酶δ亚基和流感病毒血凝素(haemagglutinin,HA)标签融合蛋白的表达质粒。该融合蛋白在酿酒酵母细胞中能够正常表达,而且能够互补编码δ亚基的ATP16基因缺失株在利用非发酵性碳源方面的表型缺陷,表明该融合蛋白具有野生型δ亚基的功能。同时,构建了在大肠杆菌细胞中表达该δ亚基的ScAtp16p-His6融合蛋白,并用纯化的融合蛋白在家兔中制备了其多抗血清。结果表明此多抗可以很好地与ScAtp16p-His6和HA-ScAtp16p两种融合蛋白特异性结合。这些研究材料的获得为深入研究ATP合酶的解偶联机制和磷酸化调控机理奠定了基础。

Ⅱ型钙调蛋白激酶δ亚基基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中的表达及肿瘤坏死因子-α调控作用

目的观察3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化过程中Ⅱ型钙调蛋白激酶δ亚基基因表达水平及肿瘤坏死因子-α对成熟脂肪细胞中Ⅱ型钙调蛋白激酶δ亚基((2AMKⅡD)基因表达的调控作用。方法检测3T3-L1前体脂肪细胞体外诱导分化不同时段CAMKⅡD基因的mRNA表达水平;采用不同浓度TNF-α干预成熟脂肪细胞,检测干预后不同时间点CAMKⅡD基因的表达水平。结果3T3-L1前体脂肪细胞中CAMKⅡD基因mRNA表达,于d1显著下调,与d0比较具有显著差异(P< 0.01);d2其表达水平显著上调,并明显高于d0表达水平(P<0.01);d2-10表达一直维持在较高水平(P>0.05)。0.1、1.0 μg/L的TNF-α干预后,成熟脂肪细胞该基因各时段的表达水平无显著变化(P>0.05);10.0 μg/L的TNF-α干预后,在12 h 始,其表达水平有显著性下调(P<0.01);其他各时段之间无显著变化(P>0.05)。结论CAMKⅡD基因参与脂肪细胞分化的调控,与肥胖发生相关,其在3T3-L1细胞分化过程中的表达变化可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚。TNF-α对成熟脂肪细胞中CAMKⅡD基因表达可能不具有调控作用。

电压门控钙通道α2-δ亚基配体治疗纤维肌痛综合征的研究进展

纤维肌痛综合征(FMS)是一种以全身慢性广泛性疼痛为特征的临床常见疾病,严重影响着患者的身心健康。药物治疗是目前纤维肌痛综合征综合治疗模式的重要组成部分,近年研究证实,电压门控钙通道α2-δ亚基配体(VGCCα2-δL)对于该病的治疗具有广阔的应用前景。本文将对VGCCα2-δL治疗纤维肌痛综合征的研究现状进行综述,旨在为纤维肌痛综合征的临床治疗提供参考。

基于[3.3.3]螺桨烷的电压门控钙离子通道α2δ亚基配体的合成和生物活性研究

电压门控钙离子通道(VGCC)α2δ亚基配体类药物是目前治疗慢性神经疼痛最安全有效的药物之一.为了研究含有大位阻的、构象限制的烷基骨架对该类药物生物活性的影响,设计并合成了3个含有[3.3.3]螺桨烷结构和1个含二环[3.3.0]辛烷结构的γ-氨基丁酸(GABA)衍生物.所合成的化合物使用了~1H NMR,^(13)C NMR和高分辨质谱(HRMS)进行了结构表征,并测试了它们对人源化电压门控钙离子通道α2δ亚基的亲和力(IC_(50)).研究结果发现:[3.3.3]螺桨烷在VGCCα2δ配体类药物结构中具有一定的兼容性,但是其体积已经超过了脂肪族取代结构的最佳体积;VGCCα2δ配体类药物分子中的GABA链上的氨基不能有任何取代或者衍生,否则活性降低甚至完全丧失.本研究的结论对于未来设计新颖的VGCCα2δ配体类药物具有重要的指导作用.

δ-ENaC亚基研究进展

上皮细胞钠通道δ亚基作为最新发现的上皮细胞钠通道亚型,在人类大脑、心脏、胰脏、睾丸和卵巢等器官中均有表达。两种亚型(δ1亚基和δ2亚基)具有特殊的生物物理学特性及生理病理学意义。研究上皮细胞钠通道δ亚基的分布、结构、功能等,可为从分子水平进一步了解人体自身构造、阐明生理机制及促进新型药物开发产生积极影响。

大鼠海马齿状回、杏仁核突触外GABAA受体表达与生殖周期雌孕激素变化相关性研究

目的明确生殖周期中卵巢甾体激素波动是否引发特定脑区神经元突触外GABAA受体表达变化及相关性。方法阴道涂片法筛选出具有完整生殖周期的大鼠,并将其分为两组,动情期组与动情间期组;Elisa检测每组大鼠血清雌孕激素含量;免疫组化法观察每组大鼠海马齿状回、杏仁核突触外GABAA受体δ亚基的表达;分析各组大鼠血清孕激素含量与突触外GABAA受体δ亚基表达的相关性。结果动情期组血清雌激素含量高于动情间期组,而孕酮含量则低于动情间期组,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。海马齿状回、杏仁核GABAA受体δ亚基的免疫组化结果显示,阳性表达动情间期组高于动情期组,差异具有统计学意义(P<0.05);海马齿状回、杏仁核突触外δ亚基阳性结果 IOD值随着动情间期与动情期孕酮浓度值的增加而增加,两变量呈线性相关。结论动情间期高水平的孕激素可致大脑海马齿状回、杏仁核突触外GABAA受体高表达。

青少年肌阵挛癫痫相关基因及其致病机制的研究

青少年肌阵挛癫痫（Juvenile Myoclonic Epilepsy,JME）又称Janz综合征,1989年列入癫痫和癫痫综合征的国际分类。JME是最常见的特发性（遗传性）、全面性癫痫综合征（IGEs）之一,占全部癫痫患者的5%~10%[1],女性发病率高于男性[2]。JME于青春期前后起病,起病年龄通常为12~18岁。

突触外GABA_(A)受体在神经痛大鼠背根神经节中的表达及其变化

目的:探讨突触外γ-氨基丁酸A型(GABA_(A))受体在背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中的表达以及在神经病理性疼痛中的改变。方法:雄性SD大鼠12只,随机分为2组:对照组(sham)、慢性坐骨神经结扎损伤模型(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)组,每组6只。制备CCI模型,通过测定后爪热刺激缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)和机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)以确定造模成功。术后第7天取L;DRG行Western blot和免疫组化检测GABA_(A)受体δ亚基的表达。结果:与sham组比较,CCI组大鼠损伤侧TWL和MWT明显缩短(P<0.05);免疫组化和Western blot结果均发现,L;DRG内有明显的GABA;受体δ亚基的表达,并且,术后第7天,与对照组相比,CCI组L;DRG中GABA;受体δ亚基蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论:DRG中存在GABA;受体δ亚基的表达,且在神经损伤后表达明显下降,在神经病理性疼痛发生发展中可能起重要作用。

叶绿体ATP合酶CF_1与CF_0亚基间的相互作用

通过PCR的方法得到菠菜叶绿体ATP合酶9个亚基的编码序列, 分别克隆到质粒pGBT9和pGAD424, 双转化入酵母菌株HF7C和SFY526, 用酵母双杂交系统检测菠菜叶绿体ATP合酶各亚基间的相互作用. 同时用双杂交系统和体外结合实验检测 g 亚基与e亚基及e亚基突变体eDN21, eDC45之间的相互作用. 实验结果基本上支持目前关于细菌ATP合酶的结构模型. 与之不同的是, d 亚基与b, g, e 以及CF0的Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ亚基均有作用. 这些结果说明尽管叶绿体ATP合酶与细菌ATP合酶有着类似的亚基组成和空间结构, 但在亚基间的相互关系和催化过程中的构象变化上可能有所不同.

不同剂量电离辐射对人外周血淋巴细胞DNA损伤修复相关基因转录水平的影响

目的阐明不同剂量电离辐射对人外周血淋巴细胞中DNA损伤修复相关基因(hOGG1、MGMT、PPP2R1A和PPP2R2D)转录水平的影响。方法抽取志愿者外周静脉血约30 mL,分置于7支肝素锂抗凝管中,以剂量率为0.38 mGy·min-1的60Coγ射线(剂量分别为0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6和3.2 Gy)对人外周血照射后培养12 h,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA并进行定量和纯度分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)的方法分析不同剂量电离辐射诱导DNA损伤修复相关基因hOGG1、MGMT、PPP2R1A和PPP2R2D基因转录水平的变化。结果 hOGG1基因、MGMT基因和PPP2R2D基因的mRNA转录水平均在0.1 Gy时达到峰值。PPP2R1A基因的mRNA转录水平在0.2 Gy剂量时达到峰值。hOGG1基因转录水平在0.1和0.2 Gy剂量组均较对照组显著增高,差异均具有统计学意义(P <0.05)。MGMT基因转录水平在0.1、0.2和0.8 Gy剂量组均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P <0.05)。PPP2R1A基因转录水平在0.2 Gy剂量组比对照组明显增高,在3.2Gy剂量组比对照组明显降低,差异均具有统计学意义(P <0.05)。PPP2R2D基因转录水平在0.1、0.2、0.4和0.8 Gy剂量组均明显高于对照组,3.2 Gy剂量组比对照组明显降低,差异均具有统计学意义(P <0.05)。结论不同剂量电离辐射均可诱导DNA损伤修复相关的应答基因hOGG1、MGMT、PPP2R1A和PPP2R2D的转录水平改变,适宜剂量的电离辐射(0.1~0.2 Gy)可诱导细胞产生辐射兴奋效应或适应性反应。

核因子I-B高表达对肝L02细胞中蛋白磷酸酶2A-B55δ靶向调控研究

目的构建核因子I-B基因(NFIB)真核表达重组质粒,应用于其高表达调控肝细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B亚基基因转录的功能学验证。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人NFIB mRNA片段,克隆入真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),构建pEGFP-NFIB重组质粒后,分别给予250、500、1 000 ng转染永生化人正常肝L02细胞建立NFIB高表达细胞模型(相应设为250、500和1 000 ng剂量组),对照组为250 ng pEGFP-N1转染的L02细胞,荧光定量聚合酶链反应检测NFIB mRNA,激光共聚焦和免疫印迹法(WB)检测核因子-1(NF-1)蛋白水平。电泳迁移率实验分析与NF-1相结合的DNA序列的特异性,荧光素酶报告基因检测PP2A-B55δ亚基基因(PPP2R2D)启动子区的转录活力,RT-PCR和WB检测细胞内PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平。结果双向测序证实pEGFP-NFIB重组表达质粒构建成功。与对照组比较,各剂量组L02细胞中NFIB mRNA相对水平增高(P<0.01),增强型绿色荧光蛋白、NFI-B蛋白表达水平均升高(P<0.05)。NF-1可与PPP2R2D基因启动子区(2R2Dp)-462G>A不同多态性序列结合,NFIB高表达使L02细胞中2R2Dp-462G启动子活力下降(P<0.05),PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平均升高(P<0.05)。结论成功构建人NFIB真核表达重组质粒,应用于人肝细胞中证实NF-1靶向PPP2R2D的功能学调控作用。