嗜热四膜虫δ微管蛋白基因的克隆、鉴定及细胞定位

微管蛋白(tubulin)在细胞的结构和功能中发挥着重要作用,α微管蛋白和β微管蛋白是组成微管的主要因子,γ微管蛋白促使α和β微管蛋白二聚体组装为微管结构.然而,4种新的微管蛋白δ-,ε-,ζ-,和η-tubulin在细胞中的功能并不完全清楚.本研究从嗜热四膜虫大核基因组数据库中鉴定了一种新的编码δ微管蛋白基因(Tetrahymena delta tubulin 1,TDT1,TTHERM_00335970,http://www.ciliate.org),TDT1基因转录产生1 326 bp和1 363 bp两种不同的转录本,1 326 bp的转录本编码441个氨基酸的多肽;而1 363 bp的转录本含有37 bp未剪切的内含子序列,从而导致开发读框发生移码突变现象.实时荧光定量PCR结果表明,TDT1基因在四膜虫细胞营养生长和有性生殖过程中都有表达,且在有性生殖过程中的表达显著上调.免疫荧光定位表明,TDT1蛋白不仅定位于四膜虫基体和有性生殖期conjugation junction结构,而且在四膜虫的大核和小核中也有定位.TDT1基因敲除发现,该基因不能通过表型分配完全被巴龙霉素抗性基因替代,结果表明,TDT1蛋白在四膜虫细胞中可能具有多种不同的功能,它的正常表达对四膜虫细胞的生存是必需的.