δ肝炎病毒研究的新成果

今年9月25日～28日在美国冷泉港召开的1989年病毒性肝炎国际会议上,报道了许多有关δ肝炎病毒的最新研究成果,本文就这一领域内的最新进展作一综述。

人类δ肝炎基因组的结构和复制

本文综述了近年来关于δ肝炎病毒(HDV)基因结构及其复制的研究进展。HDV基因组是一单股RNA,由1679个核苷酸组成,呈环状,并可折叠成不分支的杆状结构,在感染细胞中有多种变异体存在。HDV抗基因组RNA上有一开放读框可编码δ抗原。HDV基因组的复制不需要亲肝DNA病毒的功能和序列,而依赖于δ抗原。HDV基因组及抗基因组的RNA上均可测到自裂位点,与HDV的自裂反应有关。此外,HDV RNA序列还具有自连能力,其与HDV基因组复制的关系尚待进一步研究。

乙型肝炎、丁型肝炎病毒联合诊断芯片制备的初步研究

目的 制备联合检测乙型肝炎病毒 (HBV)、丁型肝炎病毒 (HDV)基因芯片并进行杂交验证。方法 利用PrimerPremier5 0分别针对HBV、HDV基因保守区域设计多对PCR引物 ,扩增后的产物克隆至pMD18 T载体 ,提取阳性克隆质粒进行测序分析鉴定。用PixSys 5 5 0 0芯片打印仪将PCR产物打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片。样品荧光标记采用限制性显示 (RD)技术 ,标记后进行杂交验证分析。结果 序列分析表明 ,运用PCR技术得到的多个基因片段均属于HBV、HDV特异基因。杂交结果显示 ,敏感性、特异性、重复性等指标均佳。结论 利用PCR扩增产物作为探针制备HBV、HDV联合诊断芯片是一种快速、简便的实用方法 ,有着广阔的应用前景 ;利用RD技术标记样品可提高多种肝炎病毒混合检测的敏感性。

丁型肝炎抗病毒治疗药物的研究进展

丁型肝炎病毒(HDV)是一种乙型肝炎病毒(HBV)的卫星病毒,需借助HBV包膜蛋白完成自身的组装和复制,进而建立新的感染。慢性HDV感染是病毒性肝炎最严重的形式,可加速疾病进展,提高肝癌的发生风险,HDV感染者迫切需要有效的抗病毒治疗以缓解疾病进展,但能够用于抗HDV感染的治疗药物仅包括2020年7月欧洲药品管理局有条件批准的Bulevirtide以及之前推荐使用的干扰素。目前,针对病毒复制周期的几种靶向抗病毒药物正在研究中,且前期临床试验结果表现良好。这意味着HDV的抗病毒药物研发取得了重要突破,为丁型肝炎的治疗带来了希望。本文就目前丁型肝炎抗病毒药物进行简要综述,并对相关的治疗方案进行了讨论,为丁型肝炎的治疗提供参考。

丁型肝炎流行病学筛查检测指标及适宜人群

HDV感染需要借助HBV的参与,感染后会加速疾病的进展,具有很高的发展为肝硬化、肝癌等终末期肝病的风险。近年来全社会对丁型肝炎的认识逐渐增强,一些针对丁型肝炎的治疗药物也成为研究的热点,伴随着临床检验手段的逐步完善,对于丁型肝炎的流行病学调查开始被研究者重视。针对国内HDV感染的具体情况虽已有多项研究,但由于研究队列小、区域性强而数据偏差较大。本文就目前丁型肝炎流行病学调查中的调查人群及调查方法检测指标等进行简要综述,并对其中的关键问题进行讨论,以期未来获取更准确的流行病学资料,能够更有效地筛查HDV感染者,为临床早期的干预和治疗提供帮助。

HDV重叠感染可增加慢性乙型肝炎患者的肝细胞癌风险

HDV的重叠感染可加速慢性乙型肝炎患者的肝病进程,尤其肝细胞癌(HCC)的发生风险明显增高。但HDV的致癌机制有待进一步探索,治疗方式及效果也亟待突破。综述了HDV相关HCC流行病学新特点、致病机制的新认识和诊疗进展等,对推进研发更精准的HDV检测手段、更有效的治疗药物及减少HDV相关HCC具有重要意义。

HDV核酶对乙型肝炎病毒抑制作用的研究

目的研究HDV核酶在细胞内对乙型肝炎病毒(HBV)复制及其抗原表达的抑制作用。方法1)以HBV前基因组mRNA为靶基因,体外筛选出HDV核酶有效作用位点,构建HDV核酶并进行体外测活;2)分别选用tRNA-Val、U6和hCMV 3种真核启动子,重组构建HDV核酶真核表达载体ptVHRz、pSURz和pcDHRz,分别用3种载体转染HepG2.2.15细胞;3)用点杂交、ELISA和实时荧光定量PCR方法分别检测核酶在细胞内的表达及对HBV的抑制作用。结果在HBV C基因区筛选到一位点,所构建的HDV核酶在体外条件下对该位点能产生有效切割。3种核酶表达载体在细胞内均能高效表达,在转染48 h后,ptVHRz和pcDHRz对HBeAg的表达产生了明显的抑制作用,而对HBsAg没有抑制作用。三者对HBV的复制均未产生明显影响。结论HDV核酶在细胞内对HBV抗原的表达能产生特异性抑制作用,但未能有效抑制HBV的复制,对其原因需进一步深入研究。

丁型肝炎的实验诊断

δ因子(丁型肝炎病毒)感染所致的临床表现常被乙型肝炎病毒感染所掩盖,所以临床上诊断丁型肝炎主要依靠实验室检查。本文介绍了丁型肝炎的实验室检查方法及其意义。

内蒙古自治区蒙古族聚集区丁型肝炎流行现状分析

目的探讨内蒙古自治区蒙古族聚集区丁型肝炎病毒(HDV)感染情况以及分子流行病学特点。方法纳入2019年4月—2020年10月在国际蒙医医院就诊的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性的患者230例,根据患者情况分为乙型肝炎合并肝硬化组(n=18)和乙型肝炎组(n=212);并以HBsAg定量值250 IU/mL为界限将患者分为HBsAg<250 IU/mL组(n=104)和HBsAg≥250 IU/mL组(n=126)。采用ELISA方法进行HDV抗体的检测,抗体阳性者进一步利用实时定量PCR方法进行HDV RNA检测。并对HDV RNA阳性标本进行分型检测。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验。结果HDV抗体检测阳性率为16.09%,抗体阳性患者中HDV RNA阳性率为91.89%。乙型肝炎合并肝硬化患者共18例,HDV抗体检测阳性率为44.44%,抗体阳性患者HDV RNA阳性率为100%。HBsAg<250 IU/mL的患者共104例,其中只有3例(2.88%)HDV抗体阳性。而HBsAg≥250 IU/mL的患者共126例,HDV抗体阳性率为26.98%。所有能测出分型的标本的基因分型均为1型。结论内蒙古自治区蒙古族聚集区HDV感染率较高,尤其是HBsAg≥250 IU/mL及肝硬化患者。需加强HBsAg阳性患者的丁型肝炎检测,及早诊断和治疗,防止肝炎进一步发展。

丁型肝炎抗体检测方法比较分析

丁型肝炎是由丁型肝炎病毒(HDV)与乙型肝炎病毒(HBV)合并感染或者HDV重叠感染HBV携带者引起的一种严重病毒性肝炎。由于长期重视不足,丁型肝炎的诊断目前还存在巨大空白。近年来,随着相关研究的不断深入,科研和医疗行业逐渐意识到丁型肝炎的危害。同时相关药物研发的重大进展也为丁型肝炎的治疗甚至治愈带来了新的机遇。而这些进展将大大增加对丁型肝炎诊断的需求。抗-HD抗体是丁型肝炎诊断的关键指标。本文就目前丁型肝炎抗体包括抗-HD总抗体、IgG和IgM的检测方法进行了总结和比较分析,并对相关的重要问题进行了讨论,以期加深对丁型肝炎抗体检测现状的了解,并为开发更好的丁型肝炎诊断工具提供参考。

中国丁型肝炎的研究发展史

自二十世纪七十年代发现丁型肝炎病毒(HDV)伊始,中国学者即开始针对HDV及丁型肝炎进行了大量的研究。本文通过查询中国科技期刊各大数据平台及我国学者在国外PubMed数据库期刊发表的相关文献,从历史发展的视角,全面分析总结了我国有关HDV及丁型肝炎从基础到临床的研究历程和科学发现。历年来,我国学者从检测技术方法建立、感染动物模型构建、核酶功能及应用、临床诊断与表现等方面开展了广泛研究。四十年来的研究成果,为进一步研究HDV的病毒学特征、感染机制、免疫应答与损伤、丁型肝炎的临床病理变化和抗病毒治疗奠定了基础。

Delta肝炎的血清学调查分析

本文报告了湖北某些地区 HDV 感染调查结果,在108例 HBsAg 阳性者中,发现抗-HDV 阳性者27例,阳性率为25.0％。其中48例 HBsAg 阳性携带者和28例乙肝病人中,抗-HDV 阳性者分别为9例(18.8％)和14例(50.0％),后者明显高于前者。

我国部分地区慢性HBV感染者HDV感染情况调查

目的了解目前我国部分地区慢性HBV感染者丁型肝炎病毒(HDV)感染流行情况。方法2021年3月—2022年6月从全国10个省市自治区收集3131例慢性HBV感染者血清,用抗-HDV IgG酶联免疫试剂检测全部血清标本。对抗-HDV IgG阳性标本用巢式逆转录聚合酶链式反应(nRT-PCR)法检测HDV RNA。对HDV RNA阳性标本的nRT-PCR扩增产物测序后进行序列分析,确定HDV基因型。分析抗-HDV IgG阳性患者的临床特征。计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验或Fisher精确检验。结果3131例慢性HBV感染者的抗-HDV IgG阳性率为0.70%(22/3131),内蒙古自治区、新疆维吾尔自治区、北京市和湖南省慢性HBV感染者的抗-HDV IgG阳性率分别为1.81%(16/886)、0.88%(2/226)、0.28%(2/708)和1.00%(2/200),其中内蒙古自治区慢性HBV感染者抗-HDV IgG阳性率显著高于北京市(P=0.004),其余地区间比较差异均无统计学意义(P值均>0.05)。对内蒙古自治区慢性HBV感染者临床特征分析发现,抗-HDV IgG阳性组蒙古族患者(P=0.001)、ALT异常患者(P=0.007)和抗病毒治疗患者(P=0.029)的比例显著高于抗-HDV IgG阴性组,而中位HBV DNA水平明显较低(P=0.030)。共检出19例HDV RNA阳性标本,均为HDV基因1型。结论我国不同地区HDV流行率差异较大,内蒙古自治区慢性HBV感染者中HDV流行率较高。我国北方部分省市的HDV流行基因型主要为1型。

HDV RNA检测的研究现状

HDV感染导致的丁型肝炎是最严重的肝炎类型。由于缺乏精准HDV RNA检测方法,HDV的流行率被严重低估。HDV RNA是诊断HDV感染的金标准,在HDV的诊断、筛查和指导治疗方面具有重要意义。但因HDV基因型多、二级结构牢固,导致HDV RNA检测困难。本文就HDV RNA诊断方法的进展进行综述,阐述了HDV RNA检测方法从定性到定量检测的进展,为了解HDV RNA检测重要意义以及促进HDV RNA检测新方法的研发提供新思路。

丁型肝炎病毒抗原的原核表达及抗原性分析

目的利用含T7启动子和His纯化标签pRSETB质粒构建丁型肝炎病毒抗原(HDAg)重组表达质粒(pRSETB-HDAg),转化宿主菌,表达并纯化,获得生物活性高抗原性强的基因工程重组抗原。方法将中国河南株HDAg基因片段插入pRSETB表达质粒,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导表达。表达产物经Chelating亲和层析纯化后,采用EIA方法分析HDAg的抗原性。结果重组HDAg稀释1000倍(10ng/ml)仍与抗体有较强的反应。经与美国HDAg和华美公司生产的HDV诊断试剂同时检测26份HDV阳性参比血清,三者结果比较,除美国抗原漏检1份,检出率为96·15%(25/26份)外,病毒CDC和华美试剂均无漏检,检出率为100%,三者检测结果具有很高的符合率。结论成功构建了丁型肝炎病毒抗原重组表达质粒(pRSETB-HDAg),在原核细胞获得稳定高效表达,EIA检测证明HDAg抗原性好,可用于组装HDV诊断试剂,用于临床丁型肝炎患者的诊断和我国丁型肝炎病毒感染流行病学的调查。

乙型肝炎病毒感染者血清中丁型肝炎病毒标志物检测分析

目的了解丁型肝炎病毒（hepatitis delta virus，HDV）感染标志物在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染者中的分布状况并分析其临床意义。方法收集HBV感染者的临床资料和血清样本，通过酶联免疫分析法检测其血清HBV感染五项指标、HDVAg和Anti—HDV，结合临床诊断和生化指标进行分析。结果收集HBV感染者样本462例，其中无症状携带者210例，慢性肝炎175例，急性乙肝35例，肝纤维化42例，检出HDV感染率为4．8％，男性显著高于女性，肝纤维化组的HDV感染率最高，为9．5％，其次为慢性肝炎的6．9％，45—60岁人群的HDV感染率为7．8％，显著高于其他年龄段。结论慢性乙肝和肝纤维化病例的HDV感染显著增高，提示HDV感染与肝病的严重程度相关，建议对肝病患者开展血清HDV感染标志物检查，鉴别是否存在HDV重叠感染。

广东省佛山市乙型肝炎患者伴随丁型肝炎感染的现状调查

目的了解广东省佛山市的丁型肝炎（丁肝）感染现状，为全国的丁肝流行病学调查工作奠定基础。方法搜集广东省佛山市第一人民医院2011年的乙型肝炎（乙肝）阳性血清，以不同公司的丁肝酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）诊断试剂平行检测；进一步以反转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT—PCR）方法辅证。结果两种ELISA丁肝诊断试剂检测结果一致，8例阳性；经RT-PCR进一步验证，结果正确。结论广东省佛山市丁肝病毒感染率高于全国平均水平，无性别统计学差异，且感染人群偏于高年龄组。

丁型肝炎病毒经宫内传播的研究

目的探讨丁型肝炎病毒（HDV）经宫内传播的可能性。方法以酶联免疫法及32P标记探针原位杂交检测妊娠中期HBsAg阳性的产妇血及新生儿脐血的HDV标志物（HDVM）。结果40例母血中，有8例检出至少一项HDVM，HDV感染检出率为20％。5例HDVRNA阳性的孕妇血清中，1例抗-HDIgM亦阳性，另2例抗-HDIgG阳性。4O例新生儿脐血中，5例HDVM阳性。HDV感染率为12．5％。在3例HDVRNA阳性的脐血标本中，1例抗-HDIgM阳性，另1例抗-HDIgG阳性。本组检出的5例HDV感染的新生儿中，有3例母儿血清的HDVM均阳性。另2例脐血HDVM阳性新生儿的母亲HDVM为阴性。结论HDV存在宫内传播，其途径可能为经胎盘宫内感染。